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逆灸对自然更年期大鼠热休克蛋白及应激激素的影响
目的:观察逆灸"关元"穴对自然更年期大鼠体内与应激相关的激素及蛋白、基因的影响,探讨其保护作用机制.方法:选健康SD雌性大鼠共128只.其中4月龄16只,作为年轻对照组;另将112只已出现动情周期紊乱的10月龄SD雌性大鼠随机分为7组:10、12、14、16月龄对照组;12、14、16月龄逆灸组,每组16只.采用放射免疫、免疫组化、原位杂交方法,观察在10月龄逆灸"关元"穴(2次/周,连续8周)对随后12、14、16月龄大鼠下丘脑不同核团热休克蛋白70(HSP 70)、HSP 70 mRNA、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、β-内啡肽(β-EP)及血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)的影响.结果:各自然月龄组室旁核、弓状核、视上核HSP 70及mRNA表达呈总体升高趋势.CRH、β-EP各自然月龄组呈波动性下降趋势,ACTH总体升高.逆灸组较同月龄对照组比较:室旁核HSP 70在14月龄降低,其mRNA在12、16月龄升高(均P<0.05);弓状核HSP 70在12、14月龄,HSP 70 mRNA在12月龄均明显升高(P<0.05,P<0.01);视上核HSP 70在14月龄,HSP 70 mRNA在12、16月龄均明显下降(均P<0.05).CRH、ACTH在14月龄均显著降低(P<0.05,P<0.01);β-EP含量在12月龄明显上升(P<0.05).结论:逆灸"关元"穴对随后自然更年期大鼠下丘脑内应激蛋白、基因及体内应激激素的调节作用,可能是该疗法实现保护作用的途径之一.
关键词： 灸法 更年期 大鼠 下丘脑 促肾上腺皮质素释放激素 -
注射IL-1β后大鼠下丘脑室旁核内CRR/AVP基因转录的动态变化
目的 探讨IL-1β对下丘脑室旁核(PVN)内促肾上腺皮质素释放激素(CRH)和血管加压素(AVP)基因转录的影响.方法 麻醉下于Wistar大鼠右心房内留置导管,48 h后将清醒大鼠分为5组,分别于右心房内注射IL-1β(1.4 μg/kg)或生理盐水(300 μ1)后于15、120 min后断头,以及无任何处置的空白对照组.取各组大鼠躯干血,采用放射免疫分析法测定促.肾上腺皮质激素(ACTH)和AVP的浓度.利用[35S]UTP、[35S]CTP双标记RNA探针采用原位杂交组织化学方法检测各组大鼠PVN内CRH hnRNA、CRH mRNA和AVPhnRNA、AVPmRNA的表达.结果 与空白对照组相比,血浆ACTH和AVP浓度均在注射IL-1β 15 min后显著增加(P<0.01),在120 min后恢复正常.CRH hnRNA表达水平在注射IL-1β 15 min后显著增加(P<0.01),120 min后恢复正常;CRH mRNA表达水平在注射IL-1β 120min后显著增加(P<0.01).小细胞内AVP hnRNA表达水平在注射IL-1β 15 min后显著增加(P<0.01),且持续增加至120 min后,而大细胞内AVP hnRNA表达水平在注射IL-1β 120 min后显著增加(P<0.01);小细胞内AVP mRNA表达水平在注射IL-1β120 min后显著增加(P<0.01),而大细胞内AVP mRNA表达水平在注射IL-1β 15和120 min后均无明显改变.结论 共存于小细胞内的CRH、AVP基因转录的调控机制不同,而共存于大、小细胞内的AVP基因转录的调控机制也完全不同,表明不同细胞内同一基因转录的动态变化不同.
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促肾上腺皮质激素释放激素、皮质醇和硫酸脱氢表雄酮在早产发动中的作用
目的 探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质醇、硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)在早产发动中的作用.方法 用原位杂交法检测早产阴道分娩产妇26例(早产组)、足月临产阴道分娩产妇29例(足月临产组)、足月未临产剖宫产产妇25例(足月未临产组)胎盘、胎膜组织中CRHmRNA的分布与表达,用放射免疫法测定3组产妇分娩的新生儿脐静脉血CRH,脐动脉血DHEA-S及皮质醇的含量.结果 (1)各组产妇胎盘、胎膜组织中均可见CRH mRNA表达.(2)CRH mRNA在胎盘组织中表达的阳性指数:早产组为5.5±1.4,足月临产组为5.4±1.5,均高于足月未临产组的2.7±1.5,差异均有统计学意义(P＜0.01);CRH mRNA在胎膜组织中表达的阳性指数:早产组为5.4±1.7,足月临产组为5.4±1.4,足月未临产组为2.0±1.4,早产组、足月临产组与足月未临产组比较,差异也有统计学意义(P＜0.01);CRH mRNA在胎盘及胎膜中表达的阳性指数早产组与足月临产组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);各组产妇CRH mRNA在胎盘与胎膜组织中的表达比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)早产组和足月临产组新生儿脐静脉血CRH含量分别为(7.8±3.3)、(7.7±4.1)ng/L,脐动脉血DHEA-S含量分别为(514±295)、(483±207)μg/L,均高于足月未临产组的(4.8±2.4)ng/L、(360±80)μg/L,差异有统计学意义(P＜0.05);而早产组与足月临产组比较,差异则无统计学意义(P＞0.05).早产组脐静脉血CRH含量与胎盘、胎膜组织中CRHmRNA的表达均呈正相关关系(r=0.935、0.853,P＜0.01),足月临产组脐静脉血CRH含量与胎盘、胎膜组织中CRH mRNA的表达也呈正相关关系(r=0.902、0.825,P＜0.01).(4)早产组新生儿脐动脉血皮质醇含量为(246±117)μg/L,明显高于足月临产组的(172±72)μg/L和足月未临产组的(127±60)μg/L,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).早产组新生儿脐静脉血CRH与脐动脉血皮质醇、DHEA-S含量均呈正相关关系(r=0.523、0.424,P＜0.05),足月临产组新生儿脐静脉血CRH与脐动脉血皮质醇、DHEA-S含量也呈正相关关系(r=0.438、0.354,P＜0.05).结论 (1)CRH与分娩发动密切相关,胎盘、胎膜组织中CRH mRNA表达升高可能是早产发动的重要原因.(2)DHEA-S、皮质醇与分娩的发动密切相关.
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促肾上腺皮质激素释放激素、c-Fos及间隙连接蛋白43与分娩发动的相关性
目的 探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、c-Fos和间隙连接蛋白43(Cx43)在足月妊娠子宫平滑肌细胞中的表达变化及其与分娩发动的相关性.方法 选择2006年2-9月在中南大学湘雅二医院住院的足月临产产妇30例(临产组),足月未临产产妇30例(未临产组),因宫颈上皮内瘤样病变行子宫切除术患者30例(对照组).应用放射免疫方法测定3组妇女静脉血中CRH的水平;用核酸原位杂交技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测3组妇女子宫平滑肌细胞中c-Fos、Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平.结果 (1)CRH水平在临产组产妇为(81.8±11.9)pmol/L,未临产组为(34.5±18.6)pmol/L,对照组为(1.3±0.7)pmol/L,临产组明显高于未临产组及对照组,未临产组明显高于对照组,差异均统计学意义(P＜0.05).(2)c-Fos mRNA及其蛋白的阳性染色主要定位于子宫平滑肌细胞核内,少量位于细胞质内;子宫平滑肌细胞中c-Fos mRNA及其蛋白表达水平,临产组分别为5.4±1.7及5.4±1.5,未临产组分别为4.1±0.9及3.9±0.9,对照组分别为1.0±0.4及1.2±0.4,临产组明显高于未临产组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);未临产组也明显高于对照组(P＜0.05).(3)Cx43 mRNA及其蛋白的阳性染色定位于子宫平滑肌细胞质内;子宫平滑肌细胞中Cx43 mRNA及其蛋白表达水平,临产组分别为5.5±1.4及5.6±1.3,未临产组分别为4.1±0.6及4.1±0.5,对照组分别为1.5±0.6及1.1±0.6,临产组明显高于未临产组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);未临产组也明显高于对照组(P＜0.05).(4)3组妇女的CRH水平与子宫平滑肌细胞中c-Fos mRNA及其蛋白的表达水平呈明显正相关(r1=0.61,r2=0.50;P＜0.05);与子宫平滑肌细胞中Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平呈明显正相关(r3=0.52,r4=0.68;P＜0.05);子宫平滑肌细胞中c-Fos mRNA及其蛋白的表达水平与Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平也呈明显正相关(r5=0.51,r6=0.60;P＜0.05).结论 产妇血浆中CRH水平、子宫平滑肌细胞中c-Fos和Cx43的表达与分娩发动有一定的关系,且3者间水平变化均呈明显正相关.
关键词： 分娩 产科 促肾上腺皮质素释放激素 原癌基因蛋白质c-fos 连接蛋白43 -
胎盘和子宫平滑肌组织中尿皮质素mRNA表达水平变化及其与分娩发动的关系
目的探讨胎盘和子宫平滑肌组织中尿皮质素(urocortin,UCN) 对子宫平滑肌收缩功能的影响,及UCN mRNA表达变化在分娩发动、进展中的作用.方法 (1)采用半定量RT-PCR技术检测10例未临产妇女(未临产组)及20例临产妇女(临产组,其中10例潜伏期、10例活跃期)的胎盘组织和子宫平滑肌组织中UCN mRNA表达水平;(2)另取24例剖宫产术分娩产妇的子宫平滑肌组织(实验样本)行离体收缩实验,观察不同剂量UCN对子宫平滑肌的收缩作用,以及对由前列腺素F2α(PGF2α)、缩宫素诱发的子宫平滑肌收缩活动的影响,以收缩曲线下面积表示.结果 (1)临产组胎盘组织中UCN mRNA的表达水平为1.23±0.52,高于未临产组的0.83±0.38,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);临产组子宫平滑肌组织中UCN mRNA的表达水平为1.32±0.22,高于未临产组的0.94±0.13,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).临产组活跃期产妇的胎盘组织及子宫平滑肌组织中UCN mRNA表达水平明显高于潜伏期产妇,两者分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)实验样本对不同剂量UCN均无反应,收缩曲线下面积无变化;但在加入UCN的基础上再加入PGF2α,可引起子宫平滑肌收缩曲线下面积由(2.12±0.15)cm2增加到(3.90±0.33)cm2,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);但UCN对缩宫素引起的子宫平滑肌收缩曲线下面积无影响.结论UCN本身对子宫平滑肌收缩功能无影响,但可以增加PGF2α及缩宫素对子宫平滑肌的收缩作用,从而参与分娩的发动和维持.
关键词： 促肾上腺皮质素释放激素 子宫肌层 胎盘 子宫收缩 -
硝酸甘油贴膜治疗早产的临床效果及机理研究
目的观察硝酸甘油贴膜治疗早产的临床效果,并初步探讨其作用机理.方法 60例先兆早产患者随机分为硫酸镁加舒喘灵常规治疗组(常规组,30例)和硝酸甘油贴膜治疗组(贴膜组,30例),两组孕妇治疗前、后分别抽取外周静脉血,采用放射免疫分析法测定血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平.观察两组孕妇延迟分娩的时间.结果 (1)贴膜组延迟分娩48h,有效率为90%,平均延长孕期25 d.常规组延迟分娩48 h,有效率为80%,平均延长孕期8d.贴膜组延长先兆早产孕妇孕期效果明显优于常规组(P<0.01).(2)贴膜组孕妇血浆中CRH水平由治疗前的(257±61)ng/L,显著下降至治疗后的(38±17) ng/L.常规组孕妇血浆CRH水平由治疗前的(248±60) ng/L,显著降低至治疗后的(56±22)ng/L,两组比较,差异有极显著性(P<0.01).结论硝酸甘油贴膜是一种安全有效的抗早产药物,其作用机理可能与降低血浆CRH水平有关.
关键词： 婴儿 早产 硝酸甘油 促肾上腺皮质素释放激素 -
胎盘组织中尿皮素和促肾上腺皮质激素释放激素2β受体表达变化与先兆子痫发病的关系
目的 探讨先兆子痫患者胎盘组织中尿皮素(UCN)和促肾上腺皮质激素释放激素2β受体(CRH-R2β)表达与先兆子痫发病的关系.方法 应用半定量RT-PCR技术测定20例先兆子痫患者(先兆子痫组)和20例正常妊娠妇女(对照组)胎盘组织中UCN mRNA和CRH-R2β mRNA的水平;采用免疫组化方法对UCN进行蛋白定位和半定量分析.结果 (1)先兆子痫组胎盘组织中UCN mRNA的表达水平为1.14±0.26,高于对照组的0.78±0.46,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)先兆子痫组胎盘组织中CRH-R2β mRNA的表达水平为0.89±0.33,与对照组的0.93±0.50比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)免疫组化定位结果显示,两组产妇的UCN蛋白表达主要位于合体滋养细胞,少量表达于细胞滋养细胞和血管内皮细胞.蛋白半定量结果显示,UCN在先兆子痫组胎盘合体滋养细胞中的表达强度高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 先兆子痫患者胎盘组织中UCN表达水平升高,而CRH-R2β水平则无明显变化,因此UCN的作用加强.这可能是胎盘组织对母体和胎儿应激状态的一种继发性代偿反应,并参与先兆子痫的病理生理过程.
关键词： 先兆子痫 促肾上腺皮质素释放激素 受体 胎盘 -
胎盘组织中尿皮素和促肾上腺皮质激素释放激素2β受体表达变化与先兆子痫发病的关系
目的 探讨先兆子痫患者胎盘组织中尿皮素(UCN)和促肾上腺皮质激素释放激素2β受体(CRH-R2β)表达与先兆子痫发病的关系.方法 应用半定量RT-PCR技术测定20例先兆子痫患者(先兆子痫组)和20例正常妊娠妇女(对照组)胎盘组织中UCN mRNA和CRH-R2β mRNA的水平;采用免疫组化方法对UCN进行蛋白定位和半定量分析.结果 (1)先兆子痫组胎盘组织中UCN mRNA的表达水平为1.14±0.26,高于对照组的0.78±0.46,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)先兆子痫组胎盘组织中CRH-R2β mRNA的表达水平为0.89±0.33,与对照组的0.93±0.50比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)免疫组化定位结果显示,两组产妇的UCN蛋白表达主要位于合体滋养细胞,少量表达于细胞滋养细胞和血管内皮细胞.蛋白半定量结果显示,UCN在先兆子痫组胎盘合体滋养细胞中的表达强度高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 先兆子痫患者胎盘组织中UCN表达水平升高,而CRH-R2β水平则无明显变化,因此UCN的作用加强.这可能是胎盘组织对母体和胎儿应激状态的一种继发性代偿反应,并参与先兆子痫的病理生理过程.
关键词： 先兆子痫 促肾上腺皮质素释放激素 受体 胎盘 -
可溶性细胞粘附分子1、促肾上腺皮质激素释放激素及白细胞介素6在妊娠高血压综合征发病中的作用
目的研究可溶性细胞粘附分子1(s oluble intracellular adhesion molecule-1,sICAM-1)、促肾上腺皮质激素释放激素(c ortictropin-releasing hormone, CRH)及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在妊娠高血压综合征(妊高征)发病中的作用. 方法测定81例妊娠26～37周孕妇血浆sICAM-1、CRH、IL-6水平,其中23例,为正常孕妇(正常妊娠组);58例为妊高征孕妇(妊高征组):包括轻度21例、中度19例、重度18例.用酶联免疫法测定sICAM-1及IL-6,用放射免疫法测定CRH. 结果中、重度妊高征患者的血sICAM-1、CRH 、IL-6水平均显著高于正常对照组(P<0.05),轻度妊高征患者与正常组相比虽无统计学差异但有升高的趋势.IL-6水平与CRH呈正相关(r=0.51,P<0.05). 结论妊高征患者血sICAM-1升高表明内皮细胞损伤在妊高征的发病中起重要作用.CRH分泌的异常增加可能与内皮细胞的损伤有关,该作用可能是通过促进IL-6的分泌实现的.
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急性脑缺血海马CRH、ACTH应变效应研究
海马是调控下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴活动的重要结构.然而,急性脑缺血(ACI)中海马对HPA轴的调控效应的有关研究少见报道.本研究观察了大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠在缺血20min颞叶、海马和丘脑下部的促皮质释放激素(CRH)mRNA表达水平和血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度的变化,报道如下.
关键词： 脑缺血 海马 促肾上腺皮质素释放激素 促肾上腺皮质激素 -
随舰远航直升机飞行人员血浆前阿片黑素细胞皮质激素源性肽及调节因子的变化
目的 探讨短、中、长期驻舰远航前后直升机飞行人员血浆前阿片黑素细胞皮质激素源性肽β-内啡肽(β-EP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)及调节因子促肾上腺皮质素释放激素(CRH)含量变化的特点,为做好航空医学保障提供依据. 方法 对6名为期7 d(短期)、11名为期21 d(中期)和6名为期132 d(长期)驻舰远航的直升机飞行人员,采用放射免疫法测定其远航前后血浆β-EP、ACTH和CRH的含量. 结果 短期驻舰远航后血浆β-EP、ACTH较远航前显著升高(t=2.839、3.104,P＜0.05),血浆CRH无显著变化(t=0.612,P＞0.05);中期远航后血浆β-EP、ACTH和CRH较远航前显著升高(t=3.416、2.496、1.951,P＜0.01或P＜0.05);长期远航后血浆β-EP、ACTH和CRH则显著性下降(t=2.988、2.427、2.129,P＜0.05). 结论 远航可导致直升机飞行人员血浆前阿片黑素细胞皮质激素源性肽β-EP、ACTH及调节因子CRH含量发生变化,且航程对血浆β-EP、ACTH和CRH的变化有不同的影响.
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姜黄素对慢性应激大鼠不同脑区促肾上腺皮质激素释放因子表达的影响
目的 为探讨姜黄素可能的抗抑郁作用机制,观察姜黄素对慢性应激大鼠不同脑区促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)表达的影响.方法 采用不同应激方式交替、持续应激20 d,制成大鼠慢性应激损伤模型,用开野实验、逆转录聚合酶链反应测定大鼠给姜黄素(2.5,5和10 mg*kg-1,po,每日1次,共21 d)前后行为的改变以及下丘脑、海马及额叶皮质中CRF mRNA的表达.结果 慢性应激模型组大鼠在开野实验中5 min内穿越格数、探究次数均显著减少;给予姜黄素后,应激大鼠穿越格数、探究次数均较应激对照组不同程度的增加.慢性应激模型组大鼠下丘脑、海马和额叶皮质中CRF mRNA表达均较正常对照组明显升高;姜黄素可以明显逆转上述脑区CRF mRNA表达的改变.结论 姜黄素对慢性应激大鼠的活动性有明显的改善作用,这一作用很可能与逆转慢性应激大鼠不同脑区的CRF mRNA的异常表达有关.
关键词： 姜黄素 慢性应激 促肾上腺皮质素释放激素 行为 动物 -
皮质醇、促肾上腺皮质素释放激素与早产的关系
目的 测定母血及羊水中促肾上腺皮质素释放激素(CRH)、皮质醇的水平,为早产的预测提供线索.方法 选取特发性早产患者30例(早产组)和妊娠满28周不足37周要求引产孕妇30例(对照组),采用酶联免疫法分别测定母血及羊水中CRH及皮质醇水平.结果 早产组母血及羊水皮质醇和CRH水平均高于对照组[母血皮质醇:(493.46±128.48)μg/L比(305.78±115.56)μg/L;母血CRH:( 920.71±160.34) ng/L比(560.97±138.26) ng/L;羊水皮质醇:(50.18±16.16) μg/L比(21.31±13.50)μ g/L;羊水CRH:( 170.71±23.03) ng/L比(110.97±18.31) ng/L](P＜0.05).结论 CRH、皮质醇可能与早产发动有关.
关键词： 早产 促肾上腺皮质素释放激素 氢化可的松 -
中枢神经系统激素与功能性下丘脑性闭经
功能性下丘脑性闭经(FHA)是由于下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)的脉冲分泌受损导致的一种可逆性非器质性疾病.已发现中枢神经系统分泌的多种激素参与GnRH分泌的调控,并在功能性下丘脑性闭经的发病过程中起重要的作用.就目前认为与下丘脑性闭经相关的中枢神经系统激素进行综述,以探讨其治疗新策略.
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可溶性GST-CRH蛋白原核表达条件的优化及纯化
目的：通过谷胱甘肽巯基转移酶（GST）-促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）原核表达条件的优化及纯化，获得可溶性好、纯度高的重组GST-CRH蛋白。方法通过对GST-CRH转化菌表达温度、菌液密度（OD600）、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度以及诱导时间的摸索，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测可溶性GST-CRH蛋白的表达情况，GST琼脂糖凝胶进行GST-CRH的纯化，Western Blot对表达的目的蛋白进一步鉴定。结果起始OD6000.8、IPTG工作浓度0.1 mmol/L、30℃诱导8 h为GST-CRH优诱导条件；融合蛋白经Western Blot鉴定为表达的GST-CRH，纯化后纯度＞95%。结论建立了GST-CRH的原核表达及纯化方法，获得了高纯度的GST-CRH可溶性蛋白。
关键词： 促肾上腺皮质素释放激素 谷胱甘肽巯基转移酶 原核表达 纯化 -
现代ECT治疗对精神分裂症患者下丘脑激素水平的影响
目的观察现代ECT治疗对精神分裂症患者下丘脑促肾上腺皮质释放激素(CRH)和促甲状腺激素释放激素(TRH)的影响,并推测其可能的生理机制.方法将符合CCMD-3精神分裂症诊断标准的精神分裂症患者57名随机分为治疗组(30名)与对照组(27名)进行观察.用放射免疫分析法分别对两组治疗前后的CRH与TRH水平进行测定,将所获数据进行统计学分析.结果治疗组较对照组在治疗后TRH有明显的降低,而CRH在治疗前后变化不明显.结论无抽搐电休克对TRH的影响大于CRH,或许可以推测该治疗在临床上所见改善心境障碍较思维障碍更为明显的部分原因.
关键词： 精神分裂症 电惊厥疗法 促肾上腺皮质素释放激素 促甲状腺素释放激素 -
促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元钙信号和CREB的调节作用
背景:在急性应激反应中肾上腺皮质激素释放激素可能通过何种信号途径调控下丘脑神经元的神经内分泌活性?目的:探讨促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元内CREB含量变化的调节作用.设计:重复测量设计.单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所,首都医科大学附属天坛医院神经外科.材料:实验于1999-12/2002-03在解放军第三军医大学大坪医院完成.选择孕17 d Wistar胎鼠.方法:将培养的细胞分组:①促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6 mol/L)刺激组.②预先分别用尼莫地平(5 μmol/L)或CP-154526(500 μmoL/L)处理再用促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6 mol/L)刺激组.③分别设置相应的对照组,对照组用等渗盐水刺激.用PTI荧光成像系统测量神经元胞浆内游离钙浓度变化,用Western blot方法测定神经元内P-CREB的含量变化.主要观察指标:①神经元胞浆内游离钙浓度变化.②神经元内P-CREB的含量变化.结果:正常对照组的下丘脑神经元胞浆内游离钙含量较低,外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激后,胞浆内游离钙立即升高;预先应用尼莫地平或CP-154526处理再用促肾上腺皮质激素释放激素刺激的神经元胞浆内游离钙含量的增加明显被抑制,同时也可明显抑制神经元内P-CREB含量的增加.结论:在急性应激反应中,促肾上腺皮质激素释放激素可直接与下丘脑神经元促肾上腺皮质激素释放激素1受体结合,开放膜L-型钙离子通道促使钙离子内流使胞浆内游离钙明显增加,从而进一步激活神经元内P-CREB信号通路.说明在调节下丘脑神经元激活过程中促肾上腺皮质激素释放激素可能起了重要的作用.
关键词： 神经元 钙离子 P-CREB 促肾上腺皮质素释放激素 -
促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元胞浆内环磷酸腺苷和Ca2+浓度的调节作用
背景:在应激反应中,下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的激活对下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素表达的增加起着关键的作用.然而关于通过何种途径调控下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素的神经内分泌活性,促肾上腺皮质激素释放激素能否激活下丘脑神经元,尚不十分清楚.目的:通过外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激培养下丘脑神经元,以观察细胞内环磷酸腺苷和胞浆内钙离子浓度的变化.设计:观察对比实验.单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所,首都医科大学附属天坛医院神经外科.材料:实验于1999-12/2002-03在解放军第三军医大学大坪医院完成.取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元.方法:用外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激培养下丘脑神经元,促肾上腺皮质激素释放激素1受体特异性拮抗剂CP-154526预先处理下丘脑神经元.将培养的细胞分组:①促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6mol/L)刺激组.②预先用CP-154526(500μmol/L)处理再用促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6 moL/L)刺激组.③分别设置相应的正常对照组,正常对照组用等渗盐水刺激.用PTI荧光成像系统测量和分析外源性促肾上腺皮质激素释放激素对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度变化,用放射免疫方法测定神经元内环磷酸腺苷含量.主要观察指标:①下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度.②下丘脑神经元内环磷酸腺苷含量.结果:正常对照组的下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量较低,外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激后,胞浆内游离钙浓度立即升高,神经元胞浆内环磷酸腺苷生成明显增加[(240±22),(153±11)nmol/L;(3.26±0.19),(0.44±0.02)pmol/dish,P＜0.01];CP-154526可明显抑制促肾上腺皮质激素释放激素(10-6 mol/L)刺激的下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量的生成[钙离子浓度:(240±22),(171±16)nmol/L;环磷酸腺苷含量:(3.26±0.19),(2.33±0.21)pmol/dish,P＜0.01].结论:促肾上腺皮质激素释放激素可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元,使神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量明显增加,在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的促肾上腺皮质激素释放激素可能起了重要作用.
关键词： 钙 下丘脑 促肾上腺皮质素释放激素 环AMP -
逆灸关元穴对自然更年期大鼠下丘脑雌激素受体α和促肾上腺激素释放激素及血浆促肾上腺激素的调节
目的:观察逆灸关元穴对更年期大鼠下丘脑和血液中应激激素及下丘脑室旁核雌激素受体的影响,探究逆灸对更年期大鼠应激影响及中枢雌激素受体α调节机制.方法:实验于2003-11/2004-06在北京中医药大学针灸学院针灸机理实验室完成.①选用健康SD雌性大鼠128只.其中,4月龄(年轻)16只为年轻正常组.随机将10月龄大鼠112只分为7组:12,14,16月龄逆灸组;10,12,14,16月龄对照组;每组16只.自然老化鼠.所有逆灸组大鼠均在10月龄开始艾炷灸,将艾炷点燃后,直接放置在关元穴上施灸,每次灸一壮.灸后局部皮肤略潮红.1周灸2次,共灸8周.10,12,14,16月龄对照组及年轻正常组除轻抓仰躺外不做其他处理.②每组取10只采用放射免疫法测定下丘脑促肾上腺激素释放激素、血浆促肾上腺激素水平.每组取其余6只采用免疫组化法测定下丘脑雌激素受体α含量.③组间计量资料差异比较采用单因素方差分析.结果:大鼠128只均进入结果分析.①下丘脑室旁核雌激素受体α表达:各模型对照组随增龄,呈波动上升趋势,14和16月龄对照组明显高于年轻正常组(P＜0.05,0.01).各逆灸组均低于同月龄对照组,其中逆灸16月龄组明显低于16月龄对照组(P＜0.05).②下丘脑促肾上腺激素释放激素含量:模型对照各组随增龄呈波动下降趋势,14和16月龄组明显低于年轻正常组(P＜0.05～0.01).逆灸14月龄组明显低于同龄对照组(P＜0.05).③血浆促肾上腺激素水平:模型对照和逆灸各组随增龄升高,14和16月龄组明显高于年轻正常组(P＜0.01).逆灸12和16月龄与同月龄对照组相近(P＞0.05),逆灸14月龄组明显低于同月龄对照组(P＜0.05).结论:随增龄更年期大鼠处在一种应激紊乱与失调状态,逆灸可使随后12,14,16月龄大鼠紊乱的应激激素得到一定的调整,并这种作用可能与逆灸调节下丘脑雌激素受体α表达有关.
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局部脑缺血再灌注大鼠下丘脑CRH和NGF的动态表达
目的:探讨局部脑缺血对大鼠下丘脑的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和神经生长因子(NGF)以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响.方法:选用正常老龄Wistar大鼠32只,雌雄各半,随机分组,每组4只大鼠.分假手术组和实验组,实验组分为缺血15 min组、缺血15 min再灌注1 h、6 h、1 d、2 d、4 d、9 d组.采用免疫组化方法对老龄大鼠局部脑缺血下丘脑的CRH和NGF表达进行动态观察.结果:假手术组下丘脑有少量CRH和NGF表达,实验组在缺血再灌注1 h内下丘脑CRH和NGF表达均无变化,此后缺血再灌注6 h下丘脑CRH和NGF均有短暂一过性消失,随后缺血再灌注2 d二者在下丘脑的表达相继明显增加.结论:脑缺血后下丘脑CRH分泌细胞并非立刻进入活动增强状态;脑缺血后下丘脑后续阶段存在CRH分泌细胞的活动增强效应;NGF对维系HPA的活动可能具有重要作用.
关键词： 脑缺血 大鼠 Wistar 神经生长因子 促肾上腺皮质素释放激素
