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氯胺酮对体外循环瓣膜置换术患者外周血表面黏附分子及中性粒细胞水平的影响
目的 评价氯胺酮对体外循环瓣膜置换术患者外周血表面黏附分子CR3表达水平和中性粒细胞(PMN)内炎症介质cAMP浓度的影响.方法 60例体外循环(CPB)下瓣膜置换术患者随机平均分成4组,分别为对照组、氯胺酮Ⅰ组、氯胺酮Ⅱ组和氯胺酮Ⅲ组(n=15),体外循环前10 min经颈内静脉分别给以生理盐水(对照组)、氯胺酮Ⅰ组(0.1 mg/kg)、氯胺酮Ⅱ组(0.5 mg/kg)和氯胺酮Ⅲ组(1.0 mg/kg),并分别在麻醉诱导前即刻(T1)、体外循环开始前10 min(T2)、体外循环结束即刻(T3)、体外循环结束后24 h(T4)不同时点从颈内静脉采血,用流式细胞仪检测CB3表达情况,高效液相色谱法测定cAMP和cGMP浓度,观察患者心率、血压的变化和血管活性药物的使用情况.结果 T1,T2时点各组测量指标差异无统计学意义(P>0.05).T3,T4时点,与对照组相比,各氯胺酮试验组患者外周血CR3表达均降低(P<0.05),其中氯胺酮Ⅱ组和氯胺酮Ⅲ组水平更低于氯胺酮Ⅰ组(P<0.05).T3,T4时点,与对照组和氯胺酮Ⅰ组相比,氯胺酮Ⅱ和氯胺酮Ⅲ组患者外周血PMN内cAMP浓度均增高(P<0.05).T3时点,与对照组和氯胺酮Ⅰ组相比,氯胺酮Ⅱ组和氯胺酮Ⅲ组患者外周血PMN内cGMP浓度均降低(P<0.05).T4时点,与对照组和氯胺酮Ⅰ组患者相比,氯胺酮Ⅱ和氯胺酮Ⅲ组患者的平均动脉压(MAP)升高(P<0.05).氯胺酮Ⅲ组比其他各组术后使用更少的血管活性药(P<0.05).结论 氯胺酮可一定程度地降低CPB患者外周血CR3的表达水平和PMN内cAMP、cGMP的浓度,从而减轻CPB时全身炎症反应.
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慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A 的变化及抗抑郁药物的干预作用
目的 研究氟西汀与噻萘普汀对慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A(PKA)表达的影响.方法 将大鼠随机分为抑郁模型组、氟西汀组、噻萘普汀组和对照组.模型组、氟西汀组和噻萘普汀组给予21 d 的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间氟西汀组每天灌胃氟西汀(10 mg/kg),噻萘普汀组每天灌胃噻萘普汀(50 mg/kg),模型组和对照组每天灌胃等体积的生理盐水.行为学检测应用开场法和液体消耗实验.采用Western blotting 法检测各组大鼠海马PKA 的表达情况.结果 应激后,模型组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数、糖水消耗百分比均显著低于对照组(P ＜0.01).应激后氟西汀组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数和糖水消耗百分比均高于模型组(P ＜0.05).应激后噻萘普汀组糖水消耗百分比高于模型组(P ＜0.05),水平穿越格数、竖立次数和修饰次数也高于模型组,但无统计学差异.在Western blotting 法检测中,模型组大鼠海马PKA 的表达水平显著低于对照组(P ＜0.01);氟西汀组大鼠海马PKA 的表达水平高于模型组(P ＜0.01),与对照组无统计学差异(P ＞0.05);噻萘普汀组大鼠海马PKA 的表达水平显著高于模型组(P ＜0.01),但仍低于对照组(P ＜0.01).结论 氟西汀和噻萘普汀均能逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马PKA 表达的降低.
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老年人膀胱逼尿肌β受体反应性环腺苷酸水平变化及其调节机制
目的探讨年龄对人膀胱逼尿肌肾上腺素能β受体反应性环腺苷酸(cAMP)水平的影响及受体后信号传递途径调节因素的作用. 方法用放射免疫法检测在异丙肾上腺素、BRL 37344和forskolin作用下,老年组(15例)和青年组(7例)逼尿肌组织中cAMP含量以及百日咳毒素(PTX)、霍乱毒素(CTX)、vinpocetine和KT-5720对其影响. 结果在异丙肾上腺素、BRL 37344和forskolin存在下老年组逼尿肌组织cAMP含量分别为(15.0±1.6)、(12.2±1.8)pmol/mg蛋白和(54.5±4.0)pmol/mg蛋白,青年组显著下降(P＜0.01);CTX对老年组cAMP水平无显著影响,PTX与KT-5720显著提高了β受体激动剂存在下的cAMP含量,对forskolin的作用无明显影响,vinpocetine能显著提高β受体激动剂和forskolin作用后的cAMP水平. 结论老年人膀胱逼尿肌的β受体反应性cAMP水平显著下降,腺苷酸环化酶活性的下降和抑制性G蛋白Gi的活性提高可能是其生化基础;Ⅰ型磷酸二酯酶和蛋白激酶A抑制剂能改善老年人逼尿肌的β受体反应性,可以用于治疗老年人膀胱储尿功能障碍.
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8-溴-环磷酸腺苷和异戊烯焦磷酸不改变神经细胞系tau蛋白的表达
目的分析8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)和异戊烯焦磷酸(IPP)在信号传导水平上对不同神经细胞系tau蛋白表达的影响. 方法不同的神经细胞先用8-Br-cAMP和IPP处理30 min,然后细胞内的tau蛋白被富集,tau蛋白的表达用蛋白印迹方法来检测. 结果 SH-SY5Y细胞仅表达分子量小的tau蛋白;PC12细胞主要表达高分子量tau蛋白,但也表达少量异构体型tau蛋白;NG108-15细胞主要表达tau蛋白,含量较少,呈现3种异构体,但也表达少量高分子量tau蛋白.在本实验条件下,未发现8-Br-cAMP和IPP改变这些细胞tau蛋白的表达. 结论 8-Br-cAMP和IPP不改变不同神经细胞系tau蛋白的表达.
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血管紧张素Ⅱ对不同年龄大鼠异丙基肾上腺素激动β受体效应的影响
目的研究3.5月龄与12.0月龄SD大鼠心脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对β肾上腺素受体(β-AR)激动剂异丙基肾上腺素(Iso)诱导的环磷酸腺苷(cAMP)蓄积水平的影响和激动血管紧张素Ⅱ受体(ATR)对β-AR激动后介导的正性变力效应的影响. 方法采用放射免疫法测定心脏cAMP、环磷酸鸟苷(cGMP)水平,采用离体左心房收缩功能实验测定心脏正性变力效应. 结果 Iso刺激后3.5月龄大鼠心脏cAMP水平明显升高[(1 027±169)pmol*mg心肌组织-1与(1 400±267)pmol*mg心肌组织-1,P＜0.05];AngⅡ加Iso联合刺激后3.5月龄与12.0月龄大鼠心脏cAMP水平均明显升高[(1 027±169)pmol*mg心肌组织-1与(1 865±329)pmol* mg心肌组织-1, P＜0.01;(1 047±266)pmol*mg心肌组织-1与(1 697±430)pmol*mg心肌组织-1, P＜0.01)];Iso刺激后3.5月龄大鼠心脏cGMP水平明显下降;在3.5月龄大鼠离体左心房用10个不同浓度的AngⅡ刺激未能诱导出正性变力效应;AngⅡ使3.5月龄大鼠心脏Iso的累积浓度-收缩效应曲线左移,大收缩效应增强,但在12.0月龄大鼠则没有出现这种变化. 结论 AngⅡ对Iso诱导的心脏cAMP蓄积有明显的正协同作用; AngⅡ可增强3.5月龄大鼠心脏β-AR激动后介导的正性变力效应,而随年龄增长这种增强作用消失.
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环磷酸腺苷在大鼠脊髓背侧半切损伤修复中的作用
目的观察在体内给入环磷酸腺苷(cAMP)对大鼠脊髓损伤修复中的作用.方法采用大鼠脊髓T10背侧半切伤模型,通过在脊髓损伤局部、大脑运动皮层、和蛛网膜下腔内给入cAMP,做组织切片免疫组化染色,观察损伤区局部神经丝(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、皮质脊髓束(CST)纤维、脊髓神经纤维及后肢运动功能评分(BBB).结果 cAMP在脊髓损伤局部和大脑运动皮层给入时,损伤区可见大量脊髓再生纤维,在蛛网膜下腔内给入时损伤区可见极少量皮质脊髓束纤维存在.cAMP组损伤区NF分布较多,GFAP较少.所有动物后肢运动在5～6周恢复正常行走,BBB评分的时间曲线在对照组和cAMP组之间没有明显区别.结论在体内给入cAMP能诱导大鼠脊髓损伤后神经再生.
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环磷酸腺苷对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达及分布的影响
目的 探讨环磷酸腺苷(cAMP)对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8(AQP8)表达及分布的影响.方法 培养人羊膜上皮细胞WISH细胞株,随机分为实验组和对照组.对照组给予PRMI 1640培养液常规培养.实验组将8-溴腺苷-3',5'环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)加入培养液中,使其在细胞培养液中浓度分别为10、20、40、100、200、400 μmol/L,不同浓度分别培养2.4、8、16、24和48 h时取样.各浓度重复培养6瓶.采用蛋白印迹法定量检测WISH细胞AQP8的蛋白表达;采用RT-PCR技术半定量检测WISH细胞AQP8的mRNA表达.采用免疫荧光细胞化学法检测WISH细胞上AQP8的分布.结果 对照组WISH细胞AQP8蛋白表达水平为0.028±0.003,AQP8 mRNA表达水平为0.027±0.003.实验组WISH细胞随着培养液中8-Br-cAMP浓度的升高,AQP8蛋白表达水平明显升高.培养液中8-Br-cAMP浓度为20、40、100、200、400 μmoL/L时,其蛋白表达水平分别为0.062±0.007、0.063±0.006、0.125±0.008、0.145±0.010、0.100±0.008,培养液中8-Br-cAMP浓度为200 μmol/L,培养8 h时,AQP8蛋白水平开始升高,24 h时达到峰值,升高约5倍.随着8-Br-cAMP浓度的升高,AQP8 mRNA水平明显升高,培养液中8-Br-cAMP浓度为20、40、100、200、400 μmol/L时,其mRNA表达水平分别为0.065±0.007、0.069±0.006、0.130±0.008、0.150±0.010、0.110±0.009,同样在200 μmol/L时达到峰值;8-Br-cAMP浓度为200 μmol/L,培养2 h时AQP8 mRNA水平开始升高,培养8 h时达到峰值,16 h时开始下降,24 h时降到8-Br-cAMP培养前的水平.8-Br-cAMP浓度为200 μmol/L培养24 h时,细胞内的荧光减弱而细胞膜的荧光明显增强.结论 cAMP可能是调控羊膜上皮细胞AQP8表达及分布的重要介质.
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感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠巨噬细胞分泌CCL5受到抑制的机制
目的：探讨感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠巨噬细胞分泌CC型趋化因子配体5（CCL5）受到抑制的机制。方法取6~8周龄的雌性C57BL/6小鼠随机（采用随机数字表法）分为4组，每组6只。无瘤组：皮下注射DMEM培养基；荷瘤组：皮下注射子宫颈癌细胞系U14细胞；无瘤+脂多糖（LPS；用于诱导小鼠感染）组：皮下注射DMEM培养基，腹腔内注射LPS；荷瘤+LPS组：皮下注射U14细胞，腹腔内注射LPS。（1）采用ELISA法及荧光定量PCR技术检测各组小鼠血清及巨噬细胞中CCL5和前列腺素E2（PGE2）的表达。（2）提取各组荷瘤小鼠血清制备肿瘤条件培养基（TCM），体外诱导巨噬细胞，检测诱导前、后各组上清液和巨噬细胞中CCL5、PGE2和环磷酸腺苷（cAMP）的表达。（3）荷瘤+LPS组选用环氧合酶2（COX-2）抑制剂——NS398阻断PGE2的产生（即荷瘤+LPS+NS398组），蛋白激酶A（PKA）阻滞剂——H89阻断cAMP/PKA信号通路（即荷瘤+LPS+H89组），分别制备TCM并检测两组上清液和巨噬细胞中CCL5、PGE2和cAMP的表达。结果（1）荷瘤组小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为（151±35）pg/ml、1.0]均明显低于无瘤组[分别为（691±85）pg/ml、4.5±0.8；P<0.05]；其血清中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 mRNA的表达水平[分别为（1198±83）pg/ml、5.8±0.8]均明显高于无瘤组[分别为（187±25）pg/ml、1.0；P<0.05]。无瘤+LPS组小鼠血清中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为（4049±141）pg/ml、31.5±2.0]均高于明显高于荷瘤+LPS组[分别为（1951±71）pg/ml、12.1±2.8；P<0.05]；其血清中PGE2蛋白含量及巨噬细胞中PGE2 mRNA的表达水平[分别为（676±70）pg/ml、3.4±0.4]均低于荷瘤+LPS组[分别为（2550±382）pg/ml、11.6±0.9；P<0.05]。（2）各组小鼠血清制备的TCM在体外培养巨噬细胞后，荷瘤组上清液中CCL5、PGE2、cAMP蛋白含量[分别为（1626±177）、（790±156）、（164±30）pg/ml]及巨噬细胞中CCL5、PGE2、cAMP mRNA的表达水平（分别为28.6±1.2、1.7±0.3、1.6±0.3）均明显高于无瘤组[其蛋白含量分别为（27±3）、（448±115）、（118±25）pg/ml，其mRNA的表达水平均为1.0；P<0.05]。无瘤+LPS组上清液中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为（10475±742）pg/ml、212.0±5.7]均明显高于荷瘤+LPS组[分别为（6375±530）pg/ml、142.3±2.5；P<0.05]；无瘤+LPS组上清液中PGE2、cAMP蛋白含量[分别为（2438±95）、（340±13）pg/ml]及巨噬细胞中PGE2、cAMP mRNA的表达水平（分别为4.3±0.7、4.1±0.4）均明显低于荷瘤+LPS组[其蛋白含量分别为（3441±163）、（542±42）pg/ml，其mRNA的表达水分别为5.9±0.3、5.4±0.5；P<0.05]。（3）与荷瘤+LPS组比较，荷瘤+LPS+NS398组上清液中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为（7691±269）pg/ml、159.0±8.9]明显升高（P<0.05），而上清液中PGE2、cAMP蛋白含量及巨噬细胞中PGE2、cAMP mRNA的表达水平均明显降低（P<0.05）；荷瘤+LPS+H89组上清液中CCL5蛋白含量及巨噬细胞中CCL5 mRNA的表达水平[分别为（8375±520）pg/ml、177.0±8.8]进一步升高（P<0.05），而上清液中PGE2、cAMP蛋白含量及巨噬细胞中PGE2、cAMP mRNA的表达水平均进一步降低（P<0.05）。结论感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠血清可在体外抑制巨噬细胞分泌CCL5，这种抑制效应可能是通过cAMP/PKA通路而受PGE2的调控。
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肿瘤坏死因子-β抗肿瘤及作用机制的研究
目的:探讨肿瘤坏死因子-β(tumor necrosis factor-β,TNF-β)对3种人癌细胞的增殖抑制作用及其细胞分子机制.方法:采用多种体外及体内实验方法,从多侧面证实TNF-β的抗肿瘤作用.并采用细胞内游离钙浓度测定、125I-cAMP放免检测法检测cAMP含量.结果:不同浓度TNF-β对肿瘤细胞系均有增殖抑制作用,且呈剂量依赖性.当TNF-β与顺铂和多柔比星合用,JF305细胞死亡百分比分别达到(68.6±9.0)%和(76.5±7.9)%.TNF-β实验组细胞内cAMP浓度明显增加,JF305细胞由(0.057 2±0.0176)上升到(0.289 6±0.078 4)pmol/106个细胞.此外细胞内钙浓度上升并且凋亡.结论:TNF-8具有体内、外抗肿瘤作用,其部分机制是通过增加cAMP含量及诱导细胞凋亡.
关键词： 环AMP 肿瘤坏死因子/生物合成 细胞死亡 -
人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中环磷酸腺苷及蛋白激酶C的改变
目的研究人视网膜色素上皮(HRPE)细胞特异性及非特异性吞噬过程中环磷酸腺苷(cAMP)浓度及蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨cAMP及PKC在HRPE的吞噬功能中所起的作用.方法用1×107 个/ml视杆细胞外节膜盘(ROS)及乳胶微球(LB)于37℃孵育培养的正常HRPE细胞,在孵育的不同时间(5 min至48 h)终止吞噬反应.用双重荧光标记法检测HRPE细胞吞噬动力学.用扫描及透射电镜证明HRPE细胞对LB及ROS的结合与吞噬作用.分别用125I-cAMP放射免疫试剂盒及液闪记数γ-32P放射活性法检测相应时间点的HRPE细胞特异性及非特异性吞噬时的cAMP浓度及PKC活性. 结果 HRPE细胞特异性吞噬过程中,孵育15 min时ROS结合于HRPE细胞表面,此时cAMP浓度开始降低;胞质及胞膜PKC活性的降低早于cAMP,发生在孵育5 min时,但二者均在孵育24 h达到低值.在非特异性吞噬过程中,HRPE细胞结合LB发生在孵育90 min,在孵育的12 h内cAMP浓度无明显变化(P>0.05),12～48 h cAMP浓度降低;胞质及胞膜PKC活性在孵育的5 min至48 h时间内,与对照组比较,差异均无显著意义(P>0.05).结论 cAMP及PKC对HRPE细胞特异性吞噬吞入过程的维持十分重要,但不参与非特异性吞噬的直接调节.并且,HRPE细胞特异性吞噬过程伴随着cAMP浓度及PKC活性的降低. (中华眼科杂志,2004,40:178-182)
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弥漫性脑创伤与二次脑损伤发生机制研究
为研究弥漫性脑创伤(DBI)与二次脑损伤(SBI)后鼠脑代谢型谷氨酸受体1a(mGluR1a) 、cAMP、cGMP含量变化及I类mGluRs拮抗剂MCPG的治疗作用,将大鼠随机分为假手术对照、单纯DBI、脑损伤合并SBI及MCPG作用组.脑损伤后,以低血压作为SBI指标,于伤后不同时间进行免疫组化和放射免疫研究.结果发现,与对照组比较,单纯DBI组脑皮层mGluR1a阳性神经元表达在伤后1h增加,24h达高峰(P<0.01),伤后24h cAMP水平下降,cGMP升高,cAMP/cGMP 比值下降;合并SBI组,mGluR1a阳性神经元表达在伤后0.5h即明显增加,6h达高峰(P<0.01),cAMP改变也更加明显;MCPG可减少SBI后损伤神经元的数目.提示mGluR1a参与了细胞兴奋性毒性和代谢应急,是加重脑损害的关键因素.
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己酮可可碱和咯利普兰对淀粉样β蛋白诱导脑损伤后学习记忆功能的影响
目的 探讨磷酸二酯酶抑制剂对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的脑损伤大鼠学习记忆功能的改善作用及可能机制.方法 SD大鼠分为假手术对照组、模型组、己酮可可碱(PTX)16.5 mg·kg-1组和咯利普兰1 mg·kg-1组.模型组及给药组大鼠两侧海马内分别注射Aβ25-35 5 μL,术后24 h给药组ip给药,每日1次,连续14 d.给药7 d后进行避暗实验,14 d后进行Morris水迷宫实验观察行为学变化.之后处死大鼠,用放射免疫法测定海马组织cAMP含量.结果 与模型组比较,PTX组和咯利普兰组大鼠在避暗实验中潜伏期明显延长,在水迷宫实验中寻台时间明显缩短,海马组织cAMP水平显著升高.结论 升高脑内cAMP水平可能是磷酸二酯酶抑制剂PTX和咯利普兰增强Aβ脑损伤大鼠学习记忆功能的机制之一.
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捕食应激对大鼠海马环一磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响
目的 探讨严重心理应激所致情感行为异常与认知功能受损的神经生物学机制.方法 在大鼠捕食应激模型基础上,通过免疫组织化学与蛋白质免疫印迹检测,观测应激大鼠神经细胞核转录因子环一磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(pCREB)与CREB结合蛋白(CBP)表达的分布特点与动态变化规律.结果 免疫组化研究显示,捕食应激后12 h应激大鼠脑组织CREB阳性免疫反应信号明显弱于对照组(对照组海马与额叶皮质分别为1.78±0.40和1.18±0.26,应激大鼠分别为0.55±0.13和0.88±0.20,P＜0.01),且以海马结构的改变更明显(与额叶皮质相比,P＜0.01);pCREB与CBP阳性免疫反应信号则明显高于对照组(P＜0.01),而pCREB表达亦以海马细胞增强得更明显(与额叶皮质相比,P＜0.05).海马组织免疫印迹检测进一步揭示捕食应激后1 h应激大鼠海马CREB即较对照组明显下调(应激大鼠为2.82±0.65,对照组为11.86±2.47,P＜0.01),24 h仍显著低于对照组(应激大鼠为5.12±1.13,对照组为10.56±2.38,P＜0.01);CBP表达则同步明显增多(1、24 h应激大鼠分别为1.77±0.39和2.44±0.55,对照组分别为1.06±0.24和0.86±0.20,P＜0.01);而pCREB表达仅于1、12 h显著增高(1、12 h应激大鼠分别为2.56±0.59和1.93±0.41,对照组分别为1.04±0.22和0.96±0.21,P＜0.01).结论 捕食应激后中枢神经系统,特别是选择性海马结构的CREB转录途径的改变,在短暂严重心理应激所致长时程情感行为异常与空间学习和记忆等认知功能受损中可能有重要意义.
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三氧化二砷联合8-CPT-cAMP诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究
目的了解三氧化二砷(As2O3)联合8-对氯苯硫基环腺苷酸(8-CPT-cAMP)对维甲酸(RA)耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞的作用. 方法以RA耐药的APL细胞株NB4-R1和NB4-R2为模型, 通过观察细胞生长、形态、表面分化抗原以及对四氮唑蓝的还原能力的改变来研究As2O3、8-CPT-cAMP单独和联合对细胞增殖及分化的影响;并应用免疫荧光和Western blot检测药物处理前后细胞内PML-RARα融合蛋白以及细胞周期调控蛋白的变化.结果 低剂量As2O3(0.25 μmol/L)与8-CPT-cAMP(200 μmol/L)可协同促进NB4-R1和NB4-R2细胞分化.8-CPT-cAMP可通过影响细胞周期调控蛋白E2F和P21的表达而抑制细胞增殖,并促进As2O3介导的PML-RARα融合蛋白降解.结论 As2O3联合8-CPT-cAMP能够诱导RA耐药的APL细胞分化.
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腺苷酸环化酶的活化影响NB4细胞对全反式维甲酸的敏感性
目的探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞对全反式维甲酸(ATRA)耐药的分子机制.方法以ATRA敏感及耐药的APL细胞株NB4和NB4-R1为模型,观察细胞形态、表面分化抗原以及对四氮唑蓝还原能力的改变,分别研究腺苷酸环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)的特异激活剂毛喉素、拮抗剂9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-氨(SQ22536)对ATRA诱导分化作用的影响.结果AC的拮抗剂SQ22536能显著抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,ATRA+SQ22536组与ATRA组比较,CD11b阳性率由(95.9±2.5)%降至(60.3±7.1)%,NBT还原实验吸光度(A)540值由0.585±0.092降至0.170±0.028,差异有显著性(P＜0.05).而AC的激活剂毛喉素则可以克服NB4-R1细胞对ATRA的耐药,ATRA+毛喉素组与ATRA组比较,CD11b阳性率由(34.3±5.3)%升高至(94.6±2.4)%,NBT还原实验A540值由0.110±0.028升高至0.395±0.049,差异有显著性(P＜0.05).PDE的特异激活剂钙调蛋白以及拮抗剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)对ATRA的作用基本没有影响.结论AC能否正常激活也许是APL对ATRA产生耐药的重要原因之一.
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cAMP诱导大鼠脊髓损伤后神经再生
目的观察在体给入环磷酸腺苷(cyclic adinosine monophosphate,cAMP)对大鼠脊髓损伤后神经再生的作用.方法56只SD大鼠制成脊髓T10背侧半切断损伤模型,随机分为六组.各组分别在脊髓损伤局部、大脑运动皮层和T6蛛网膜下腔内给入cAMP或生理盐水.动物存活6周后处死,制作脊髓组织切片,通过免疫组化染色观察损伤区局部神经丝的分布;通过皮质脊髓束和脊髓顺行追踪观察皮质脊髓束和脊髓神经纤维的再生;通过动物后肢运动BBB评分观察后肢运动功能恢复的程度,并以此来评价治疗措施的脊髓损伤修复效果.结果用三种方式给入cAMP,损伤区神经丝沿脊髓纵轴延伸分布,但未与尾端重新连接.在蛛网膜下腔给入cAMP无明显的脊髓神经再生;在损伤区局部和大脑运动皮层给入cAMP,损伤区可见大量脊髓再生纤维,包括部分皮质脊髓神经纤维再生.各组动物在术后4～5周均恢复正常行走,BBB评分超过20分.结论在脊髓损伤局部和在大脑运动皮层给入cAMP能诱导大鼠脊髓损伤后神经再生,但尚不能达到有效促进实验动物后肢运动功能的效果.
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双丁酰环腺苷酸对甲状腺鳞癌SW579细胞株增殖的影响
目的:探讨双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)对甲状腺鳞癌SW579细胞株增殖的影响.方法:将dbcAMP 0.5、1.0、2.0 mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24 h后,用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测SW579细胞增殖的变化；经dbcAMP 0.5 mmol/L作用24h后,ELISA法检测细胞成熟促进因子(MPF)的活性,Western Blot方法检测cdc2-Tyr15磷酸化水平,流式细胞术检测细胞周期变化情况.结果:与对照组相比,经不同浓度dbcAMP处理的SW579细胞株的增殖均受抑制.在0.5 mmol/L dbcAMP作用下24 h,SW579细胞MPF活性为(22.87±2.57) ng/L,远小于对照组的(115.50±7.53) ng/L,差异有统计学意义(t=3.324,P＜0.05).实验组cdc2-pTyr15磷酸化水平(0.258 ±0.026)高于对照组的(0.142±0.009),差异有统计学意义(t=7.424,P＜0.05).与对照组相比,应用0.5 mmol/L dbcAMP处理细胞之后,G0/G1期无显著变化,S期细胞数量减少,G2/M显著增多.结论:dbcAMP能够显著降低甲状腺鳞癌SW579细胞株的活力,使细胞增殖受到明显抑制.
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环磷酸腺苷葡甲胺预先给药对内毒素致大鼠急性肺损伤的影响
目的 探讨环磷酸腺苷葡甲胺预先给药对内毒素(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,2～3月龄,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=18):对照组(C组)、LPS组和环磷酸腺苷葡甲胺预先给药组(MCA组).LPS组和MCA组股静脉注射LPS 10 mg/kg制备大鼠ALI模型,C组注射等容量生理盐水.MCA组于LPS注射前20 min时股静脉注射环磷酸腺苷葡甲胺2 mg/kg,C组和LPS组注射等容量生理盐水.于LPS注射前即刻、注射后2和4h时各取6只大鼠,采集腹主动脉血样行血气分析,记录PaO2和PaCO2,采用ELISA法测定血浆TNF-α和IL-10浓度.于LPS注射后4h时处死6只大鼠,取肺组织,电镜下观察病理学改变,采用ELISA法测定环磷酸腺苷(cAMP)的活性,采用Western blot法检测核蛋白NF-κB p65表达水平.结果 与C组比较,LPS组PaO2和肺组织cAMP活性降低,PaCO2、血浆TNF-α和IL-10的浓度及肺组织核蛋白NF-κB p65表达水平升高(P＜0.05).与LPS组比较,MCA组PaO2、肺组织cAMP活性与血浆IL-10浓度升高,PaCO2、血浆TNF-α浓度和肺组织核蛋白NF-κB p65表达水平降低(P＜0.05),病理学损伤减轻.结论 环磷酸腺苷葡甲胺预先给药可减轻LPS致大鼠ALI,其机制可能与增强肺组织细胞内cAMP水平,激活cAMP信号通路,抑制NF-κB活性,减轻炎性反应有关.
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cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨cAMP-PKA信号转导通路在缺血预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年SD大鼠50只,体重300-350g,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型后随机分为5组(n=10):缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IPC组)、H89组、脯氨酸二硫氨基甲酸组(PDTC组)和双丁酰环磷酸腺苷组(db-cAMP组).K-H液平衡灌注10 min后,R组K-H液继续灌注30 min后停灌1 h,再灌注30 min;IPC组停灌5 min,再灌注5 min.反复3次,停灌1 h再灌注30 min;PDTC和H89组停灌5 min,分别用含有PDTC 100μmol/L和含有H89 10 μmol/L的K-H液再灌注5 min,反复3次,余同IPC组;db-cAMP组用含db-cAMP 200 μmollL的K-H液灌注30 min,停灌1 h再灌注30 min.于平衡灌注10 min、再灌注10、20和30 min时记录左心室压力大变化速率(±dp/dtmax)和左心室发展压(LVDP).于平衡灌注10 min和再灌注30 min时记录冠脉流出量(CF);测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸肌酸激酶(CK)活性.于再灌注30 min时取心肌组织,采用EMSA法检测NF-κB-DNA结合活性,采用RT-PCR法检测TNF-α mRNA表达,采用Western blot法检测磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(p-CREB)(Serl33)表达.结果 与IR组比较,IPC组和db-cAMP组NF-κB-DNA结合活性和TNF-α-mRNA表达降低,±dp/dt和CF升高,CK和LDH活性降低,WC组、PDTC组和db-cAMP组p-CREB(Ser133)表达升高(P<0.05或0.01);与IPC组比较,H89组和PDTC组NF-κB-DNA结合活性和TNF-αmRNA表达升高,±dp/dt、LVDP和CF降低,CK和LDH活性升高.H89组p-CREB(Serl33)表达降低(P<0.05或0.01).结论 缺血预处理通过激活cAMP-PKA信号转导通路抑制NF-κB-DNA结合活性,减少炎性因子的基因转录.从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.
关键词： 环AMP 环AMP依赖性蛋白激酶类 缺血预处理 心肌再灌注损伤 -
cAMP-PKA信号转导通路在利多卡因上调大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性物质相关蛋白-A表达中的作用
目的 评价环腺苷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信号转导通路在利多卡因上调大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)表面活性物质相关蛋白-A(SP-A)表达中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,处死后分离、纯化、培养AECⅡ,接种于24孔细胞培养板中,100μl孔,细胞密度1×106个/ml,培养2h后,换无血清DMEM培养基,采用随机数字表法,将其分为4组(n=48):正常对照组(C组)培养基中不加入任何药物处理;腺苷酸环化酶激动剂佛司可林组(F组)培养基中加入佛司可林10 μmol/ml;利多卡因组(L组)培养基中加入利多卡因200 μg/ml; PKA抑制剂H89+利多卡因组(P+L组)培养基中加入H89 10μmol/ml孵育AECⅡ10 min后,再加入200μg/ml利多卡因.于药物孵育6、12、24 h(T1-3)时采用ELISA法检测AECⅡ内环cAMP含量和PKA活性,采用实时荧光定量PCR法检测SP-A mRNA表达,采用Western blot法检测SP-A表达.结果 与C组比较,F组T1-3时、L组T2.3时AECⅡSP-A和SP-AmRNA表达上调,cAMP水平和PKA活性升高(P＜0.05);与L组比较,P+L组T1-3时AECⅡSP-A和SP-A mRNA表达下调,PKA活性降低(P＜0.05),cAMP水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利多卡因可通过激活cAMP-PKA信号转导通路上调大鼠AECⅡ的SP-A表达.
关键词： 利多卡因 环AMP 环AMP依赖性蛋白激酶类 上皮细胞 肺泡 肺表面活性物质相关蛋白质A
