首页 > 文献资料
-
针刺不同经穴干预心肌缺血模型大鼠下丘脑内单胺类递质的相对特异性
目的:探讨针刺经穴作用的相对特异性,为经脉脏腑相关与脑的联系提供实验支持.方法:随机从80只SD大鼠中选择10只作为正常组,其余大鼠结扎冠状动脉旋前降支复制心肌缺血动物模型.选取模型复制成功大鼠随机分为模型组、神门组、内关组、太渊组,每组10只.按组分别电针大鼠左侧手少阴心经"神门"穴、手厥阴心包经"内关"穴和手太阴肺经"太渊"穴,每次刺激10 min,连续3d.采用酶联免疫吸附法检测大鼠下丘脑室旁核区内单胺类递质的含量.结果:模型组大鼠下丘脑室旁核区去甲肾上腺素(NE) 、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量均明显下降(P<0.01).电针后,与模型组比较,内关组、神门组NE、DA、5-HT含量均明显升高(P<0.01);太渊组NE含量升高(P<0.05),DA、5-HT含量与模型组比较差异无统计学意义(均P>0.05).结论:电针"神门"穴、"内关"穴皆可促进心肌缺血大鼠下丘脑室旁核区单胺类递质含量恢复,且二者的效果明显优于电针"太渊"穴,说明不同的经穴之间具有相对特异性的中枢调控物质基础.
-
杏仁及中枢阿片肽在躯体传入冲动抑制中枢性升压反应中的作用
目的:阐明杏仁及中枢阿片肽类递质在躯体传入冲动对下丘脑室旁核(PVN)兴奋诱发的心血管活动的调节效应中的作用.方法:采用电刺激及多管玻璃微电极脑内微量注射法,观察在侧脑室或同侧杏仁中央核(ACe)微量注射阿片受体阻断剂纳洛酮后,躯体传入冲动对兴奋PVN诱发的心血管反应的影响.结果:电刺激一侧PVN后,平均动脉压(MAP)升高.电刺激腓深神经(DPN)对上述反应有部分抑制作用(P＜0.01),DPN对升压的抑制百分比为43.29%.电刺激DPN也能抑制一侧PVN微量注射L-谷氨酸钠(L-Sodium Glutamate,Glu)100 nL引起的升压效应,抑制百分比为64.58%.侧脑室注射纳洛酮(30μg/15μL)可部分阻断DPN的上述抑制作用,DPN对升压的抑制百分比由56.67%下降到13.79%,抑制取消了42.88%.杏仁注射纳洛酮(200ng/100nL)也削弱刺激DPN对刺激PVN诱发的升压反应的抑制作用,DPN对升压的抑制百分比由60.19%下降到21.05%(P＜0.01),抑制削弱了39.14%.结论:杏仁及中枢阿片肽参与DPN传入冲动对PVN中枢性心血管反应的抑制作用.
-
电针对焦虑大鼠室旁核促肾上腺皮质素释放激素及其Ⅰ型受体mRNA表达的影响
目的:通过观察电针对下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴应激系统的关键结构之一下丘脑室旁核(PVN)、促肾上腺皮质素释放激素(CRH)及其Ⅰ型受体mRNA(CRHR1 mRNA)表达的影响,探讨电针抗焦虑效应的部分神经内分泌作用机制.方法:SD雄性大鼠33只,随机分为空白组、模型组、电针组,采用不可预知的情绪应激刺激方法,建立慢性情绪应激焦虑模型.电针"百会""三阴交"穴,每日1次,每次15 min,治疗21 d.运用高架十字迷宫测试大鼠焦虑行为,免疫组化法检测下丘脑室旁核CRH的表达,原位杂交法观察下丘脑室旁核CRHR 1 mRNA的表达.结果:模型组大鼠在开臂停留时间(OT)和进入开臂的次数(OE)分别占进入两臂区停留总时间和总次数的百分比(OT%和OE%)与空白组比较明显下降(P<0.01);电针能显著提高模型动物的OE%和OT%值(P<0.05,P<0.01),并接近正常水平.模型组大鼠下丘脑室旁核CRH和CRHR 1 mRNA表达明显高于空白组(P<0.05,P<0.01);电针可显著降低模型大鼠CRH和CRHR 1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01).结论:抑制HPA轴的关键激活环节--下丘脑室旁核CRH及其受体表达,可能为电针抗焦虑效应的重要途径之一.
关键词： 电针 焦虑 下丘脑室旁核 CRH CRHR 1 mRNA -
针药结合对脑缺血大鼠下丘脑室旁核脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子表达的影响
目的:观察电针、天麻多糖及电针结合天麻多糖对脑缺血大鼠下丘脑室旁核(PVN)脑源性神经营养因子(BDNF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨针药结合治疗脑缺血的可能机制.方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、天麻多糖组和电针结合天麻多糖组,每组8只.以线栓法制备脑缺血模型.造模成功后,电针组和电针结合天麻多糖组大鼠给予“百会”“足三里”穴电针刺激,30 min/次,每天1次,连续14 d;天麻多糖组和电针结合天麻多糖组大鼠每天给予天麻多糖100 mg/kg灌胃,连续14d.采用免疫组化法观察各组大鼠PVN的BDNF和VEGF表达变化.结果:模型组缺血侧PVN的BDNF、VEGF阳性表达较正常组增加(P＜0.05);电针组、天麻多糖组和电针结合天麻多糖组缺血侧PVN的BDNF、VEGF阳性表达均较模型组增加(P＜0.05);电针结合天麻多糖组PVN的BDNF、VEGF阳性表达较电针组或天麻多糖组增加(P＜0.05).结论:电针结合天麻多糖疗法对大鼠脑缺血损伤有保护作用,其机制可能与脑缺血大鼠缺血侧PVN的BDNF、VEGF表达增加有关,且效果优于单用电针或天麻多糖.
-
电针心经经穴对心肌缺血大鼠下丘脑旁核神经元电活动的影响
目的:观察针刺心经经穴对心肌缺血大鼠下丘脑室旁核神经元电活动特征的影响,探讨针刺心经抗心肌缺血效应的下丘脑调控机制.方法:随机选取8只SD大鼠作为伪手术组,其余采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌缺血模型.将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、电针心经组和电针肺经组,每组8只.电针心经组电针“神门”-“通里”段,电针肺经组电针“太渊”-“列缺”段,刺激20 min,1次/d,共7d.将微电极阵列植入大鼠下丘脑室旁核,采用Plexon多通道采集系统记录神经元放电和场电位;利用Off line Sorter软件进行神经元信号聚类分析,筛选神经元放电信号;采用Neuro Explorer软件对神经元的放电波形进行自相关与互相关分析,并分析各组神经元信号的频率、特征和实时频谱.结果:神经元信号聚类分析和自相关分析可见,伪手术组大鼠下丘脑室旁核区可见2个中间神经元活动,模型组可见2个中间神经元放电活跃,电针心经组可见4个神经元放电活动,其中中间神经元1个、锥体神经元3个,电针肺经组可见1个中间神经元放电活动.互相关分析可见,电针心经组SPK 02 a和SPK 02 b神经元放电活动之间存在抑制关系.神经元放电序列和频率分析可见,与伪手术组比较,模型组大鼠下丘脑室旁核神经元总放电频率明显增强(P＜0.01);与模型组比较,电针心经组大鼠下丘脑室旁核神经元总放电频率显著下降(P＜0.01);电针肺经组大鼠下丘脑室旁核神经元总放电频率明显高于电针心经组(P＜0.01).实时频谱分析显示电针心经组局部场电位频谱能量显著低于模型组和电针肺经组.结论:针刺心经经穴可显著降低下丘脑室旁核中间神经元活动,激活投射到下丘脑室旁核的锥体神经元活动,且中间神经元与锥体神经元之间存在抑制关系,可能是针刺心经抗心肌缺血效应的重要机制之一.
-
"逆针灸"干预对去卵巢大鼠下丘脑不同核团ER-α和ER-αmRNA表达水平的影响
目的:探索"逆针灸"对去卵巢大鼠下丘脑功能的调节机制.方法:将3.5月龄SD雌性大鼠30只,随机分为正常组、假手术组、去卵巢模型组、逆针组、逆灸组.逆灸组与逆针组分别预先艾灸、针刺1个月后,与去卵巢模型组、假手术组同时造模.采用免疫组化和原位杂交方法,观察各组大鼠下丘脑室旁核、视上核、弓状核雌激素受体-α(ER-α)和基因表达水平的变化.结果:大鼠去卵巢后下丘脑室旁核ER-α及ER-αmRNA,视上核ER-αmRNA表达均明显升高(P<0.01),视上核、弓状核ER-α表达明显降低(P<0.01);与去卵巢模型组比较预先进行"逆针灸"处理后,大鼠下丘脑室旁核ER-amRNA表达明显降低(P<0.05),ER-α无明显变化(P>0.05),视上核、弓状核ER-α表达明显升高(P
关键词： 逆针灸 大鼠 Sprague-Dawley 卵巢切除术 下丘脑 下丘脑室旁核 雌激素受体alpha -
幼鼠中枢神经系统FOS蛋白表达升高与母婴分离相关
目的 探讨幼鼠中枢神经系统下丘脑室旁核(PvN)及前皮质扣带回(ACC)内FOS蛋白表达与母婴分离(MS)的相关性.方法 按析因设计,32只SD新生大鼠分成4组,每组8只.A1B1组、A1B2组均为MS组,A1B1组在6周龄时接受结直肠扩张刺激(CRD),A1B2组在6周龄时未给予CRD;A2B1组、A2B2组均未给予MS,同为对照组,A2B1组在6周龄时接受CRD,A2B2组在6周龄时未给予CRD.A1B1、A2B1组幼鼠在接受CRD刺激后2 h和A1B2、A2B2组幼鼠一起处死.之后采用SABC免疫组化法检测不同脑区(包括PVN和ACC)内FOS蛋白免疫阳性(FLI)细胞表达情况.结果 新生期MS和幼鼠在6周龄时接受CRD刺激均可使PVN内FLI细胞数显著升高(F分别为7.033、35.212,P＜0.01).也均使ACC内FLI细胞数显著升高(F分别为22.745、15.106,P＜0.01)；两者对FOS蛋白表达的影响无交互作用.结论 幼鼠中枢神经系统(PVN和ACC)FOS蛋白表达升高与新生期MS明显相关.
-
外周免疫刺激诱导小鼠下丘脑室旁核和视上核中Ⅰ型IL-1受体表达的变化
目的通过研究外周免疫刺激后免疫性细胞因子受体在下丘脑神经内分泌核团中的表达变化,揭示这些核团与神经免疫调节的关系. 方法小鼠腹腔内给予细菌内毒素脂多糖(lipopolysacchride,LPS)或葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB),用免疫组织化学方法观察脾脏核增殖抗体(PCNA)及下丘脑室旁核和视上核中Ⅰ型IL-1受体的表达,并采用双标记技术观察Ⅰ型IL-1受体阳性神经元和加压素及催产素表达的关系.结果1.与对照组比较,LPS或SEB引起脾脏核增殖抗体的表达明显增强.2.Ⅰ型IL-1受体在正常小鼠脑内的表达很广泛.与对照组比较,LPS或SEB引起Ⅰ型IL-1受体在小鼠下丘脑室旁核和视上核中表达显著增强.3.在正常下丘脑室旁核和视上核中Ⅰ型IL-1受体阳性的神经元既有加压素能的,又有催产素能的.结论下丘脑室旁核和视上核参与了免疫反应的调节,这两个核团中的部分加压素能神经元和催产素能神经元在神经免疫调节中可能具有重要作用.
-
高渗刺激诱导大鼠下丘脑室旁核和视上核神经激肽B受体阳性神经元表达Fos
目的研究神经激肽B受体(NK3受体)与机体渗透压调节之间的可能关系. 方法用双重免疫组织化学染色技术,高渗刺激采用静脉内注射1.5 mol/L NaCl的方法,观察了下丘脑室旁核和视上核内NK3受体阳性神经元在高渗刺激下的Fos表达情况. 结果高渗盐水可诱导下丘脑室旁核和视上核内大量神经元表达Fos.在室旁核,双标细胞约占NK3受体阳性神经元的88%,约占Fos阳性细胞的71%;在视上核的主部,双标细胞约占NK3受体阳性神经元的74%,约占Fos阳性细胞的43%. 结论室旁核和视上核内NK3受体阳性神经元可能参与大鼠渗透压调节过程.
-
大鼠下丘脑室旁核和视上核内神经激肽B受体和加压素的共存研究
目的研究神经激肽B受体(NK3受体)免疫反应产物在大鼠下丘脑室旁核和视上核的分布及其与加压素的共存. 方法免疫组织化学染色,标本在光镜和电镜下观察.共存研究采用相邻切片染色法. 结果致密的NK3受体阳性产物分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部.免疫电镜观察发现NK3受体阳性反应产物出现于室旁核和视上核的胞体和树突内.在相邻切片上观察到室旁核和视上核内有相当数量的NK3受体阳性神经元,同时含有加压素,它们主要分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部. 结论根据本研究和以往的机能学的研究结果,推测下丘脑室旁核和视上核内的NK3受体阳性神经元可能参与调控机体内环境改变时下丘脑加压素的释放.
-
延髓内脏带儿茶酚胺能神经元对LPS免疫刺激的Fos表达
目的探讨"延髓内脏带(MVZ)至下丘脑室旁核(PVN)"的儿茶酚胺能通路在"免疫-脑通讯"中的作用. 方法应用WGA-HRP逆行追踪与抗Fos和抗酪氨酸羟化酶(TH)抗体双重免疫组织化学相结合的三重标记方法,即先将WGA-HRP注入大鼠一侧PVN内,存活48h后经腹腔注射免疫刺激剂脂多糖(LPS)诱发免疫反应后,观察MVZ中WGA-HRP逆标细胞、Fos蛋白和儿茶酚胺能神经元(以TH为标记物)的分布及表达状况. 结果在MVZ内发现7种阳性神经元,即HRP、Fos、TH单标细胞、Fos/HRP、Fos/TH、HRP/TH双标细胞和Fos/HRP/TH三标细胞.Fos/HRP双标记和Fos/HRP/TH三标记细胞分别占总HRP逆行标记细胞的12.5%和39.6%. 结论 MVZ对LPS免疫刺激起反应,并可能将免疫信息经儿茶酚胺能神经元上传至PVN;MVZ可能作为"免疫-脑通讯"的一个中继站,通过"MVZ→PVN"通路起免疫调节作用.
-
下丘脑室旁核内雌激素受体的表达与意义
下丘脑室旁核(paraventricular nucleus, PVN)包括大细胞部、小细胞部和背侧帽部等几个部分,其中大细胞部主要合成催产素和加压素,小细胞部主要合成促肾上腺皮质激素释放激素、甘丙肽等多种神经肽.研究发现PVN的神经内分泌活动受到雌激素的调节,进而影响动物的分娩、摄食、脂肪代谢、体重增加等生理功能.雌激素有α和β两种受体(即ER-α和ER-β).在不同种属动物的PNV内两种雌激素受体的表达水平不同,如大鼠PVN主要表达ER-β,而小鼠PVN内除了表达ER-β以外也能表达少量ER-α,提示两种ER在不同动物的PVN内功能可能不同,它们单独或协同介导雌激素在PVN内参与多种肽能神经元有关的生理功能.
-
海马参与自主神经系统调控的研究进展
海马在解剖结构上属于边缘前脑皮质结构,它与下丘脑、杏仁核、脑干有着极其复杂的相互联系.研究发现,刺激海马对自主神经活动产生影响,可引起心率、呼吸、血压等变化;而刺激外周自主神经也影响海马的结构和功能.进一步研究发现,海马可能是通过下丘脑和脑干的核团(如下丘脑室旁核、孤束核等)、内分泌系统和神经递质等参与自主神经系统的调控.
-
下丘脑室旁核的心血管调节功能研究进展
下丘脑室旁核(PVN)是自主性和内分泌性反应的重要整合中枢,且在维持心血管活动的动态平衡中起着关键作用.本文简要归纳了PVN的形态结构、纤维联系,并详细叙述其对心血管活动的调节及与心血管疾病的关系.
-
注射IL-1β后大鼠下丘脑室旁核内CRR/AVP基因转录的动态变化
目的 探讨IL-1β对下丘脑室旁核(PVN)内促肾上腺皮质素释放激素(CRH)和血管加压素(AVP)基因转录的影响.方法 麻醉下于Wistar大鼠右心房内留置导管,48 h后将清醒大鼠分为5组,分别于右心房内注射IL-1β(1.4 μg/kg)或生理盐水(300 μ1)后于15、120 min后断头,以及无任何处置的空白对照组.取各组大鼠躯干血,采用放射免疫分析法测定促.肾上腺皮质激素(ACTH)和AVP的浓度.利用[35S]UTP、[35S]CTP双标记RNA探针采用原位杂交组织化学方法检测各组大鼠PVN内CRH hnRNA、CRH mRNA和AVPhnRNA、AVPmRNA的表达.结果 与空白对照组相比,血浆ACTH和AVP浓度均在注射IL-1β 15 min后显著增加(P<0.01),在120 min后恢复正常.CRH hnRNA表达水平在注射IL-1β 15 min后显著增加(P<0.01),120 min后恢复正常;CRH mRNA表达水平在注射IL-1β 120min后显著增加(P<0.01).小细胞内AVP hnRNA表达水平在注射IL-1β 15 min后显著增加(P<0.01),且持续增加至120 min后,而大细胞内AVP hnRNA表达水平在注射IL-1β 120 min后显著增加(P<0.01);小细胞内AVP mRNA表达水平在注射IL-1β120 min后显著增加(P<0.01),而大细胞内AVP mRNA表达水平在注射IL-1β 15和120 min后均无明显改变.结论 共存于小细胞内的CRH、AVP基因转录的调控机制不同,而共存于大、小细胞内的AVP基因转录的调控机制也完全不同,表明不同细胞内同一基因转录的动态变化不同.
-
丹参酮ⅡA降低高盐喂食所致高血压的中枢机制
目的 观察长期给予丹参酮ⅡA对高盐喂食诱导的高血压大鼠下丘脑室旁核(PVN)区氧化应激水平、交感神经系统活性及平均动脉压的影响,探讨其对高盐喂食诱导的高血压的中枢调控机制.方法 选取7周龄雄性SD大鼠(150～170 g)32只,随机分为4组(每组8只),分别为高盐给药组[8％ NaCl+丹参酮ⅡA 15mg/(kg·d)]、高盐对照组(8％ NaCl+生理盐水)、正常给药组[0.3％ NaCl+丹参酮ⅡA 15mg/(kg·d)]及正常对照组(0.3％NaCl+生理盐水),通过鼠尾动脉血压测量系统记录其血压变化.干预16周后,麻醉后采用电生理方法检测各组大鼠肾交感神经放电情况;处死动物并提取PVN组织,采用免疫荧光染色法、免疫组化、蛋白免疫印迹法检测PVN区gp91phox,白细胞介素(IL)1β及IL-10水平,超氧化物阴离子荧光探针(DHE)染色观察PVN区活性氧簇的变化.结果 高盐对照组平均动脉压较正常对照组明显升高[第16周:(148.2±4.4)比(112.9±4.3)mm Hg,P＜0.05],高盐给药组与高盐对照组相比平均动脉压降低[(126.5±4.4)比(148.2±4.4)mm Hg,P＜0.05];高盐对照组肾交感神经放电与正常对照组相比明显增强(P＜0.05),高盐给药组肾交感神经放电为高盐对照组的67.97％(P＜0.05);高盐给药组PVN区gp91phox、IL-1β较高盐对照组降低,IL-10较高盐对照组升高(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA能够减弱高盐喂食导致的PVN区氧化应激增强,修复炎性细胞因子与抗炎性细胞因子的失平衡,进而抑制交感神经兴奋,降低平均动脉压.
-
中枢肾素血管紧张素系统的激活在孕期糖尿病致子代高血压大鼠中的作用
目的 探讨中枢肾素血管紧张素系统(RAS)的激活在孕期糖尿病致子代高血压大鼠中的作用.方法 Sprague Dawley大鼠随机分为链脲佐菌素组[孕期第0天(雌鼠与雄鼠交配后见阴栓当天为孕期第0天)腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg]和对照组(注射等体积的0.9％生理盐水),每组8只;子代大鼠出生后,分别从2组中选取6只子代成年雄性大鼠进行实验.子代大鼠8周龄时,每2周采用鼠尾动脉无创血压测量法持续监测血压;子代大鼠24周龄时,取子代大鼠下丘脑室旁核,观察mRNA、蛋白表达量的改变;测定下丘脑室旁核氧化应激指标的改变.结果 12、14、16、18、20、22、24周龄时,链脲佐菌素组子代大鼠平均动脉压高于同龄期对照组子代大鼠[(97±4)比(89±3),(102±5)比(92±3),(108±2)比(94±2),(112±2)比(97±3),(115±3)比(100±3),(120±4)比(102±3),(127±3)比(103±4)mm Hg,均P＜0.05].与对照组子代大鼠相比较,链脲佐菌素组子代大鼠丙二醛明显升高,而超氧化物歧化酶明显下降(均P＜0.05).链脲佐菌素组子代大鼠下丘脑室旁核的mRNA、蛋白表达量明显高于对照组的子代大鼠(均P＜0.05).结论 孕期糖尿病引起成年子代大鼠血压升高,其机制可能是氧化应激水平升高引起下丘脑室旁核血压调控中枢的RAS过度激活,终引起成年子代大鼠高血压的发生.
-
大鼠早期生活应激对成年后功能性慢性内脏痛及下丘脑室旁核内CRH R1表达的影响
目的:探讨建立功能性慢性内脏痛的不同造模方式及造成的功能性慢性内脏痛的性别差异;观察功能性慢性内脏痛大鼠下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)内促肾上腺皮质激素释放激素受体1 (corticotropin releasing hormone receptor 1,CRH R1)表达变化,进而认识下丘脑PVN在功能性慢性内脏痛发生中的作用及机制,为临床防治功能性慢性内脏痛提供理论依据.方法:将新生期SD大鼠随机分成雌雄对照组、雌雄母婴分离(neonatal maternal separation,NMS)组、雌雄直结肠扩张(colorectal distension,CRD)组,每组1 0只,成年后进行直结肠内扩张后,采用腹壁撤离反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)和电生理学方法评价其内脏痛觉敏感性；采用HE染色检测结肠组织形态学变化;采用Western blot、免疫荧光染色方法检测PVN内CRH R1及c-fos的表达变化.将正常成年大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组和利多卡因组,每组6只,通过PVN内微量注射利多卡因观察PVN在正常大鼠内脏痛觉调节中的作用.结果:(1)大鼠新生期经历母婴分离、直结肠扩张,成年后AWR评分、腹外斜肌放电幅度增高,痛阈值下降,结肠组织均未见明显病理改变,其中NMS组在20 mmHg直结肠扩张时AWR评分和腹外斜肌放电幅度均比CRD组高(P＜ 0.05,P＜0.05);(2)各组大鼠雌雄AWR评分、痛阈值和腹外斜肌放电幅度差别不一致,但大部分是没有性别差异的；(3)与正常对照组、生理盐水组相比,PVN内微量注射1％利多卡因后10、20、30 min在60 mmHg直结肠扩张时腹外斜肌放电是明显下降的(P＜0.05).(4)NMS、CRD组与对照组比较,PVN内c-fos、CRH R1的表达增加(P＜0.05,P＜0.05).结论:早期生活应激会导致成年后功能性慢性内脏痛的发生,NMS导致的触诱发痛(allodynia)更明显,但没有性别差异.PVN及其内的CRH R1参与大鼠早期生活应激引起的功能性慢性内脏痛的形成和维持.
-
室旁核大电导钙激活钾通道下调介导慢性心力衰竭大鼠交感神经兴奋亢进
目的 观察慢性心力衰竭(CHF)大鼠室旁核内大电导钙激活钾通道(BKCa)的变化及其与交感神经活动的关系.方法 雄性Wistar大鼠,6～7周龄,随机数字表法分为2组,即假手术组和CHF组.通过结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠CHF模型,假手术组仅穿线不结扎.建模术后2周,对大鼠行下丘脑室旁核慢性灌注BKCa选择性阻断剂IBTX术,取假手术组和CHF组大鼠各24只,进一步分成8个亚组,即假手术+溶剂人工脑脊液(aCSF)组、CHF+aCSF组、假手术+IBTX低剂量组、CHF+IBTX低剂量组、假手术+IBTX中剂量组、CHF+IBTX中剂量组、假手术+IBTX高剂量组和CHF+IBTX高剂量组,每组6只大鼠,IBTX低、中、高剂量分别为0.125、1.25、12.5 nmol/nl.另取建模术后2周大鼠,行下丘脑室旁核微量注射病毒术,取假手术组和CHF组大鼠各12只,进一步分成4个亚组,即假手术病毒对照组、假手术基因敲减KCNMB4组、CHF病毒对照组和CHF基因敲减KCNMB4组,每组6只大鼠.超高分辨率小动物超声实时影像系统测定各组大鼠心功能指标,包括左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)和左心室舒张末期内径(LVEDD)等.进一步对大鼠行右侧颈总动脉插管,通过PowerLab生物信号采集与分析系统,采集大鼠的平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末期压(LVEDP)等指标.在肾脏部位游离出肾交感神经,记录肾交感神经放电(RSNA),心电图采用标Ⅱ导联记录,同步得到心率.分别记录在药物或病毒干预后4周上述各指标变化.待超声心动图、血液动力学和肾交感神经记录结束后,经大鼠腹主动脉采血,ELISA法测定大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)及血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平.取血结束后取大鼠心脏及肺脏称重,计算右心室体重比和肺重比.对大鼠心脏进行伊文思蓝染色,计算大鼠心肌梗死面积.免疫荧光和Western blot法检测大鼠室旁核内KCNMB4蛋白表达量.实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠下丘脑室旁核BKCa基因表达量.结果 (1)抑制下丘脑室旁核BKCa功能对大鼠心功能、血液动力学、交感驱动和组织解剖学指标的影响:CHF+aCSF组及CHF+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠LVEF和左心室短轴缩短率均明显低于相应的假手术各组(P均＜0.05),LVEDP均明显高于相应的假手术各组(P均＜0.05),左心室大收缩速率(+dp/dt)均明显低于相应的假手术各组(P均＜0.05).假手术+IBTX中剂量和高剂量组大鼠肾交感神经放电和心率均明显高于假手术+aCSF组,假手术+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠MAP和血浆NE水平均明显高于假手术+aCSF组(P均＜0.05).CHF+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠肾交感神经放电和血浆NE水平明显高于CHF+aCSF组(P均＜0.05),CHF+IBTX中剂量和高剂量组大鼠MAP和心率均明显高于CHF+aCSF组(P均＜0.05).CHF+aCSF组及CHF+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠右心室体重比和肺重比均明显高于相应的假手术各组(P均＜0.05).(2)CHF组大鼠下丘脑室旁核内KCNMB4基因及蛋白亚基表达量:CHF组大鼠下丘脑室旁核内KCNMB4 mRNA和蛋白表达量以及KCNMB4阳性神经元数量均明显少于假手术组(P均＜0.05).(3)下丘脑室旁核内KCNMB4敲减对大鼠交感驱动、心功能和组织解剖学指标的影响:微量注射病毒后4周,假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVEDD均明显大于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组则进一步大于CHF病毒对照组(P＜0.05),假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVEF和左心室短轴缩短率则均低于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组则进一步低于CHF病毒对照组(P＜0.05).假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVSP和+dp/dt均明显低于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组上述指标则进一步低于CHF病毒对照组(P＜0.05),假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVEDP明显高于假手术病毒对照组(P＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组则进一步高于CHF病毒对照组(P＜0.05).假手术基因敲减KCNMB4组大鼠的MAP、肾交感神经放电、心率和血浆NE水平均明显高于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组上述指标则均高于假手术病毒对照组和CHF病毒对照组(P均＜0.05).假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠右心室体重比和肺重比均明显高于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组上述指标则进一步高于CHF病毒对照组(P均＜0.05).(4)下丘脑室旁核内KCNMB4敲减对KCNMB4蛋白亚基表达量的影响:假手术基因敲减KCNMB4组、CHF病毒对照组和CHF基因敲减KCNMB4组大鼠下丘脑室旁核内KCNMB4蛋白表达水平均明显低于假手术病毒对照组(P均＜0.05),且CHF基因敲减KCNMB4组进一步低于CHF病毒对照组(P＜0.05).结论 CHF大鼠室旁核内BKCa表达下调、功能钝化,而其可能参与介导了交感传出神经活动增强,与心衰状态下心功能进一步恶化有关.
-
大鼠脑缺血-再灌注后下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素的表达
目的探讨大鼠脑缺血-再灌注后,不同时期中枢下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素样阳性免疫物的表达.方法取雄性Wistar大鼠70只,随机分成对照组(10只)、假手术对照组(30只)及脑缺血-再灌注组(30只).以颈动脉引流法行全脑缺血-再灌注造模,术后分6、24、72 h 3个时间段取脑,采用免疫细胞化学技术,用图像分析系统行下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素样阳性免疫反应面积、平均吸光度值检测.结果显微镜下观察示,促肾上腺皮质激素样阳性免疫物呈深棕色,胞核深染,并广泛分布于中枢各脑区,核仁清晰可辨.在丘脑及下丘脑区域有散在分布"串珠"状阳性纤维.图像分析结果显示,假手术对照组、脑缺血-再灌注组大鼠的阳性免疫面积和平均吸光度值呈同步变化.从术后6 h开始,假手术对照组、脑缺血-再灌注组大鼠均较正常对照组显著升高,术后24h达高峰(P＜0.05),然后逐渐回落.在3个不同时间段,3组间差异均有显著意义(P＜0.05),术后6及24 h为:脑缺血-再灌注组＞假手术对照组＞正常对照组;术后72 h为:假手术对照组＞正常对照组＞脑缺血-再灌注组.结论在脑缺血-再灌注不同时间段,下丘脑室旁核神经元促肾上腺皮质激素样阳性免疫物表达呈现明显的时间规律;促肾上腺皮质激素可能在神经元功能调控、中枢内环境控制及脑缺血-再灌注损伤过程中发挥着重要作用.
