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"逆针灸"干预对去卵巢大鼠下丘脑不同核团ER-α和ER-αmRNA表达水平的影响
目的:探索"逆针灸"对去卵巢大鼠下丘脑功能的调节机制.方法:将3.5月龄SD雌性大鼠30只,随机分为正常组、假手术组、去卵巢模型组、逆针组、逆灸组.逆灸组与逆针组分别预先艾灸、针刺1个月后,与去卵巢模型组、假手术组同时造模.采用免疫组化和原位杂交方法,观察各组大鼠下丘脑室旁核、视上核、弓状核雌激素受体-α(ER-α)和基因表达水平的变化.结果:大鼠去卵巢后下丘脑室旁核ER-α及ER-αmRNA,视上核ER-αmRNA表达均明显升高(P<0.01),视上核、弓状核ER-α表达明显降低(P<0.01);与去卵巢模型组比较预先进行"逆针灸"处理后,大鼠下丘脑室旁核ER-amRNA表达明显降低(P<0.05),ER-α无明显变化(P>0.05),视上核、弓状核ER-α表达明显升高(P
关键词： 逆针灸 大鼠 Sprague-Dawley 卵巢切除术 下丘脑 下丘脑室旁核 雌激素受体alpha -
靶向PRMT2基因的microRNA对雌激素介导的乳腺癌MCF7细胞增殖的影响
目的:构建靶向人蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的microRNA真核表达载体,鉴定其稳定转染乳腺癌细胞株MCF7后对细胞增殖的影响.方法:根据PRMT2mRNA序列设计合成pre-microRNA片段,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体,并稳定转染入MCF7细胞.采用间接免疫荧光法和蛋白质印迹法检测重组体对PRMT2表达的干扰效果以确定其生物活性.采用结晶紫实验和平板克隆形成实验检测重组体转染对MCF7细胞体外增殖和细胞克隆形成能力的影响.FCM法检测重组体转染对MCF7细胞周期的影响.结果:构建的重组体插入片段的碱基序列完全正确,并且重组体稳定转染MCF7细胞后可成功干扰PRMT2基因的表达.在无处理因子的情况下,重组体转染对细胞的生长速度无明显影响;与转染空载体的MCF7细胞相比,稳定转染重组体的MCF7细胞对雌激素的敏感性增强,但其对雌激素拮抗剂4-OHT处理的敏感性无明显差异.平板克隆形成实验表明,重组体能够增强雌激素介导的MCF7细胞的克隆形成能力.FCM法检测表明,转染重组体的MCF7细胞中G2期细胞比例明显升高(P＜0.05).结论:成功构建靶向PRMT2基因的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体,且在稳定转染MCF7细胞后具有生物学活性.抑制内源性PRMT2基因的表达能够提高雌激素介导的MCF7细胞的增殖和克隆形成能力,上调雌激素受体α目标基因cyclin D1和c-myc的表达,促进细胞周期进程.
关键词： 乳腺肿瘤 微小RNA类 蛋白精氨酸N-甲基转移酶 雌激素受体alpha 转染 细胞增殖 -
人源性雌激素受体alpha高表达慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建人源性雌激素受体alpha(ERα)高表达慢病毒载体,以用于后续雌激素受体对牙源性干细胞分化能力的研究.方法 以pEGFP-ERα为模板,RT-PCR方法体外扩增ERα基因,经测序后重组入慢病毒载体PMSCV-GFP,将正确构建的PMSCV-ERα质粒导入293T细胞进行PMSCV-ERα慢病毒制备,Western Blot检测ERα的表达水平.结果 体外成功扩增ERα并重组入PMSCV-GFP慢病毒载体,Western Blot结果显示PMSCV-ERα组的ERα水平较对照组(PMSCV-GFP组)表达明显增高.结论 成功构建人源性雌激素受体alpha高表达慢病毒载体.
关键词： 雌激素受体alpha 慢病毒载体 293T细胞 -
miR-129对乳腺癌肿瘤干细胞自我更新能力的调控作用及其机制探讨
目的:探究miR-129在乳腺癌中对肿瘤干细胞自我更新能力的调控作用及其机制.方法:应用免疫组化检测乳腺癌肿瘤干细胞在肿瘤组织与癌旁组织中的数量及其与乳腺癌肿瘤分期的关系,验证miR-129和Numb与乳腺癌肿瘤干细胞之间的相关关系.在体外实验中应用Western Blotting及RT-PCR验证miR-129通过阻断雌激素受体alpha(ER alpha,ESR1)对Notch信号通路的调节作用及其调节的具体机制;应用裸鼠成瘤实验验证miR-129在裸鼠体内水平对乳腺癌肿瘤干细胞的影响.结果:肿瘤组织中乳腺癌肿瘤干细胞的比例高于癌旁组织并与肿瘤分期具有相关性;乳腺癌肿瘤干细胞比例与临床样本中miR-129和Numb的表达水平呈负相关;乳腺癌肿瘤干细胞中miR-129的过表达与Notch信号通路的抑制直接相关,这种作用很可能是miR-129通过调控ESR1所引起的Let-7b的表达下调进而导致Numb的释放来实现的;miR-129在裸鼠体内实验中可以抑制乳腺癌肿瘤干细胞的成瘤.结论:miR-129在乳腺癌组织中可以通过调控Notch信号通路影响乳腺癌肿瘤干细胞自我更新的能力,具体的调节机制可能是通过调控ESR1所引起的Let-7b的表达下调进而导致Numb的释放来终抑制Notch信号通路的激活.
关键词： miR-129 雌激素受体alpha Let-7b Numb Notch信号通路
