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电针对胃溃疡肝郁证模型大鼠镇痛作用研究
目的:探讨电针对胃溃疡肝郁证的镇痛作用及作用机制.方法:经旷场试验选择合格的SPF级雄性SD大鼠45只,按照随机数字表法分为空白组、模型组和电针组,每组15只.模型组和电针组通过慢性不可预见性刺激合并醋酸烧灼法建立胃溃疡肝郁证大鼠模型.空白组不干预;模型组给予抓取固定刺激,共13 d;电针组穴取“梁丘”和“肝俞”电针治疗,电压2V,疏密波型,疏波4Hz,密波15Hz,强度以局部皮肤肌肉轻微颤动为度,留针20 min,每日1次,连续6d,休息1天,共治疗2周.观察各组大鼠一般情况变化、旷场试验及胃溃疡指数,运用Western blotting法检测下丘脑、胃窦黏膜组织中辣椒素受体亚型1(vanilloid receptor subtype 1,VR1)的表达,ELISA法检测海马组织中海马5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、去甲肾上腺素(nor-epinephrine,NE)的表达.结果:造模结束后,模型组一般行为状态较空白组差,经电针干预后改善明显;模型组活动度较空白组减少(P＜0.01),电针组较模型组增加(P＜0.01);电针组溃疡抑制率为54.95％,溃疡指数较模型组低(P＜0.01);模型组下丘脑及胃窦黏膜组织VR1表达较空白组升高(P＜0.05),电针组较模型组降低(P＜0.05);模型组海马5-HT、NE含量较空白组均明显减少(均P＜0.01),电针组较模型组增加(P＜0.01).结论:电针“梁丘”“肝俞”对胃溃疡肝郁证大鼠有一定的镇痛作用,其机制可能与降低下丘脑、胃窦黏膜组织中VR1和升高海马组织5-HT、NE的含量有关.
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VR1受体稳定真核表达细胞系的建立
[目的] 为研究VR1(Vanilloid receptor subtype1) 受体的功能,建立VR1稳定真核表达细胞系.[方法] 采用 RT-PCR的方法从大鼠脊髓克隆VR1 cDNA,并构建VR1表达载体.将VR1质粒通过电穿孔方法转染HEK293细胞, 经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆.采用RT-PCR、Western blotting、免疫荧光、细胞Ca2+浓度测定等方法检测VR1受体的表达.[结果] 筛选的阳性细胞克隆含有VR1的mRNA及蛋白质,细胞Ca2+浓度的改变提示VR1受体的功能性表达.[结论] 建立了稳定表达VR1受体的真核表达细胞系.
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大鼠VR1基因siRNA表达载体的构建及体内研究
目的 探讨辣椒素受体(vanilloid receptor subtype 1,VR1)在慢性疼痛发生机制中的作用,构建携带VR1 siRNA的慢病毒载体并检测其对大鼠DRG神经元VR1基因的干扰作用.方法 设计靶向大鼠VR1基因的发夹状siRNA,合成两对互补的寡核苷酸序列,退火后克隆到酶切的pRNAT-U6.2/Lenti siRNA载体,通过PCR和DNA测序鉴定重组质粒.空载体及重组质粒分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成慢病毒载体.通过蛛网膜下腔将慢病毒载体注射到大鼠体内,采用RT-PCR方法检测L4-L6 DRG神经元内VR1的沉默效果.结果 测序鉴定证实目的 寡核苷酸片段被克隆到pRNAT-U6.2/Lenti载体中;经蛛网膜下腔注射后,pRNAT-U6.2/Lenti-siVR1可下调正常大鼠L4-L6 DRG神经元内VR1 mRNA的表达.结论 成功构建了靶向VR1基因的 siRNA载体,可有效抑制VR1 mRNA的表达,为深入研究和治疗慢性痛提供了有力的工具.
