首页 > 文献资料
-
牡荆素鼠李糖苷对脐静脉内皮细胞缺氧再给氧损伤的影响
目的:观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧再给氧损伤内皮细胞的保护作用.方法:采用脐静脉内皮细胞培养的方法,以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤,分别以组织化学法、发光法、荧光染色法测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、游离Ca2+,酶动力法测定细胞培养液中LDH等.结果:不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可减少细胞内Ca2+浓度和MDA含量;使细胞内和培养上清中的LDH活性明显降低.结论:牡荆素鼠李糖苷可通过稳定内皮细胞膜,减轻其损伤等机制保护内皮细胞缺氧再给氧性损伤,对实验细胞显示有保护作用.
-
牡荆素鼠李糖苷对血管内皮细胞血管活性物质的影响
目的:观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧再给氧损伤内皮细胞产生血管活性物质的影响.方法:采用脐静脉内皮细胞培养的方法,以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤,分别以放射免疫、Griess法测定细胞培养上清中6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(N0)含量.结果:不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可使血管舒张因子N0、6-Keto-PGF1α产量明显增加;缩血管因子ET-1、TXB2明显减少.结论:牡荆素鼠李糖甙对缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质具有一定的调节作用.
-
用双向电泳技术探讨益生注射液抗缺血再灌注损伤的分子机制
目的:用双向电泳技术探讨天然成分组方药物益生注射液抗移植物缺血再灌注损伤的分子机制.方法:利用血管内皮细胞缺氧损伤模型模拟移植器官的缺血再灌注损伤过程,通过双向电泳技术观察受损细胞用药修复前后蛋白质组的变化,探索药物作用的靶标及分子机制.结果:发现缺血再灌注损伤可以导致内皮细胞大量蛋白质含量发生变化,但只有8种蛋白质在用药前后含量发生明显改变(其中6种蛋白质在细胞受损后含量下降,益生药物干预后上调;另2种受损后含量增高,药物作用后下调).结论:双向电泳技术为分析药物作用的分子机制提供了新的有效手段,益生注射液可能将血管内皮细胞的8种蛋白质作为靶标,通过调节其含量而发挥抗缺血再灌注(缺氧再给氧)损伤作用.
-
牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞血管舒缩因子表达影响的实验研究
目的:观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧-再给氧损伤内皮细胞产生血管舒缩因子表达的影响.方法:采用脐静脉内皮细胞培养的方法,以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤,分别以放射免疫、Griess法、免疫组化法测定细胞培养上清中内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性;RT-PCR方法测定细胞内ET-1,NOS mR-NA的转录.结果:不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可明显提高内皮细胞NOS mRNA的表达和NOS的活性;使内皮细胞血管舒张因子NO产量明显增加;缩血管因子ET-1 mRNA表达及ET-1明显减少.结论:牡荆素鼠李糖苷能通过蛋白及基因水平有效地调节缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质的表达.
-
补阳还五汤抗缺氧再给氧乳鼠心肌细胞凋亡的实验研究
目的:观察含补阳还五汤的大鼠血清对缺氧24h再给氧4h后新生乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及对一氧化氮(NO)含量的影响.方法:采用Annexin V-PI双标记方法(以流式细胞仪和ELISA法)检测细胞凋亡,以紫外分光光度法测定心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放水平,采用改良Yu方法测定NO浓度,用Ohkawa法测定硫代巴比妥酸(TBARS)反应物质含量.结果:补阳还五汤药物血清能显著抑制心肌细胞的凋亡及LDH释放,降低培养细胞上清液中NO和TBARS水平,其效应呈剂量依赖关系.结论:补阳还五汤具有抗缺氧再给氧心肌细胞凋亡作用,其机制与清除氧自由基和NO特性有关.
-
缺氧再给氧对内皮细胞免疫功能的影响及益生注射液干预效果初探
目的:探讨缺血再灌注(缺氧再给氧)对内皮细胞免疫功能的影响及益生注射液的干预效果.方法:用人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧再给氧模型模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程.间接免疫荧光染色显示胞内核因子-κB(NF-κB),流式细胞术检测细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、CD86和CD54,并将内皮细胞与同种异体淋巴细胞混合培养(MELR),检测淋巴细胞增殖程度、IL-2的产生及凋亡淋巴细胞百分率.结果:缺氧再给氧使ECV304细胞变圆、收缩、脱落,胞浆NF-κB表达增高,且由胞浆阳性为主转为胞核阳性为主,细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、CD86增高,CD54无显著变化,MELR中3H-TdR掺入量、IL-2生成量显著增多,凋亡淋巴细胞百分率降低.益生注射液干预后ECV304细胞形态基本恢复正常,NF-κB表达未下调,但核阳性细胞百分率降低,以核浆阳性为主,其他多项检测指标的改变得以逆转.结论:缺氧再给氧影响了ECV304细胞几种重要免疫相关分子的表达,益生注射液可发挥拮抗作用,使内皮细胞保持相对正常的免疫学功能.
-
氧化应激在血管内皮细胞缺氧/再给氧损伤中的作用
目的 探讨冠状动脉内皮细胞( CAEC)缺氧再给氧(H/R)损伤发生机制及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对它的影响.方法 将体外培养的猪CAEC分为3组.对照组:未经处理;H/R组:将细胞作H/R处理;PDTC组:于培养液中加入PDTC而后作H/R处理.分别检测各组CAEC谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.结果 在相应时间点,对照组细胞GSH、MDA的含量及ICAM-1表达无明显改变;H/R组及PDTC组细胞GSH含量明显低于对照组,而MDA的含量及ICAM-1表达明显增高,其中PDTC组细胞GSH含量又明显高于H/R组,MDA的含量及ICAM-1表达明显低于H/R组.结论 H/R损害CAEC,使其GSH含量明显减少、MDA含量及ICAM-1表达明显增加;PDTC有效降低ICAM-1活性,减轻H/R损伤.提示氧化应激在血管内皮细胞缺氧-再给氧损伤过程中起重要作用.
-
吡咯烷二硫氨基甲酸脂对缺氧再给氧冠状动脉内皮细胞凋亡的影响
目的:探讨缺氧再给氧(H/R)时冠状动脉内皮细胞(CAEC)氧自由基清除功能和细胞凋亡率的变化及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(PDTC)对它的影响.方法:将体外培养的猪CAEC分为3组.对照组:未经处理;H/R组:作H/R处理;PDTC组:在H/R前于培养液中加入PDTC.分别检测各组细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、核转录因子(NF-κB)表达及细胞凋亡率.结果:实验期对照组GSH、MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率无明显改变;H/R及PDTC组GSH含量明显低于对照组同期,而MDA含量、NF-κB表达及细胞凋亡率明显高于对照组同期;但PDTC组GSH含量明显高于H/R组同期,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显低于H/R组同期.结论:H/R使细胞GSH含量明显减少,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显增加;PDTC能有效降低NF-κB的表达,改善细胞氧自由基清除功能,降低细胞凋亡率,减轻H/R损伤.
关键词： 冠状动脉内皮细胞 缺氧再给氧损伤 细胞凋亡 吡咯烷二硫氨基甲酸脂 -
腺苷A1受体激动剂对心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的保护作用
目的 观察腺苷A1受体激动剂对培养的心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的影响.方法 以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,给予腺苷A1受体激动剂R(-)N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)(0.1及1μmol/L),测定培养液上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量及细胞MTT代谢率的变化.结果 腺苷A1受体激动剂可以使培养液上清液中LDH和MDA的含量明显降低,SOD的活性增强,细胞MTT代谢率明显升高,且呈现剂量依赖性.而且这种作用可被腺苷A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.结论 腺苷A1受体激动剂对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞有保护作用.
-
三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞钙离子浓度及肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响
目的:探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响.方法:将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组,对各组进行相应处理后,分别检测各组细胞内钙离子浓度[ca<'2+>]i、肌浆网Ca<'2+>-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI<,2>)含量、细胞活力的变化.结果:模型组、tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca<'2+>-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI<,2>)含量、细胞活力明显低于正常组,[Ca<'2+>]i明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca<'2+>-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PCI<,2>)含量、细胞活力明显高于H/R组,[Ca<'2+>]i明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组肌浆网Ca<'2+>-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI<,2>)含量、细胞活力明显高于维拉帕米组及PDTC组,[Ca<'2+>]i明显低于维拉帕米组及PDTC组.结论:H/R可激活ECV304,使细胞肌浆网Ca<'2+>-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI<,2>)含量、细胞活力明显降低,[Ca<'2+>]i明显升高;tPNS能有效改善肌浆网Ca<'2+>-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC.
-
人urotensinⅡ对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及机制
目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin Ⅱ,hUⅡ)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制.方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3h后再给氧3h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细胞活性,测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)和一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)含量,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2+荧光强度.结果:在1×10-10.5～1×10-9.5 mol/L范围内,hUⅡ明显地抑制A/R损伤引起的大鼠心肌细胞存活率和细胞活性的下降、CK活性和cTnI含量的增高、NOS活性和NO含量的降低及心肌细胞内游离Ca2+含量的增高,但1×10-9、1×10-8.5、1×10-8mol/L hUⅡ却无上述抑制作用.结论:hUⅡ在低浓度时,对大鼠心肌细胞缺氧性损伤有保护作用,其机制可能与促进NO合成和降低细胞内游离Ca2+有关.
关键词： urotensinⅡ 心肌细胞 缺氧再给氧损伤 细胞内游离钙离子 一氧化氮 -
小牛血去蛋白提取物注射液对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用
目的:观察小牛血去蛋白提取物注射液(deproteinized extract of calf blood,DECB)对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用.方法:以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,测定培养液上清乳酸脱氢酶的含量.结果:DECB 0.1及0.3 g·L-1可以提高损伤后心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,并使培养液上清乳酸脱氢酶的含量明显降低.结论:DECB对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞具有保护作用.
关键词： 心肌细胞 培养的 小牛血去蛋白提取物注射液 缺氧再给氧损伤 -
丙泊酚预处理对大鼠离体心肌缺氧/再给氧损伤线粒体细胞色素C释放的影响
目的 探讨丙泊酚预处理对大鼠离体心肌缺氧再给氧损伤时心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响.方法 50只SD大鼠随机分为5组:对照组(C组),DMSO预处理组(D组),25、50、100 μmol·L-1丙泊酚预处理组(P1、P2、P3组).应用Langendorff离体心脏灌注模型,经主动脉用K-H液逆行灌注.各组均缺氧30 min,再给氧60 min.DMSO组、P1、P2、P3组在缺氧前分别以含DMSO、相应浓度丙泊酚的K-H液灌注10 min,再冲洗5 min,重复2次.记录平衡灌注末、缺氧前即刻、再给氧30、60 min时的心功能指标.再给氧60 min时用DNA原位末端缺口标记技术(TUNEL法)测定凋亡细胞,提取心肌线粒体,免疫印迹法测定线粒体和胞质的细胞色素C水平.结果 D组与C组相比差异无显著性;与D组相比,P1、P2、P3组再给氧30 min、60 min时LVEDP降低、LVDP升高(P＜0.05),再给氧末心肌细胞凋亡率降低(P＜0.05或0.01),心肌线粒体细胞色素C释放减少,胞质细胞色素C的量明显降低(P＜0.05或0.01).结论 丙泊酚预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素C释放到胞质降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌缺氧再给氧损伤.
-
麦冬总皂甙对培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用
目的:观察麦冬总皂甙(Ophiopogan Total Saponies,OTS)对培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用.方法:以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,测定培养液上清乳酸脱氢酶的含量.结果:OTS10 μg/L和40μg/L可以提高损伤后心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,并使培养液上清乳酸脱氢酶的含量明显降低.结论:OTS对缺氧再给氧损伤的心肌细胞具有保护作用.
-
补阳还五汤对大鼠脑皮层神经元生长的影响
目的观察含补阳还五汤的药物血清对体外培养大鼠脑皮层神经元生长的影响,为补阳还五汤治疗缺血性脑损伤提供实验依据.方法以体外培养新生SD乳鼠大脑皮层神经元为观察对象,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞生长情况.观察含药血清对常规培养及在缺氧状态下神经元生长的影响.结果补阳还五汤对常规培养及在缺氧条件下培养的神经元有显著促进生长作用,与空白血清组比较有显著差(P<0.05).结论大鼠以补阳还五汤灌胃给药后,其血清中的药物成份有促进体外培养神经元细胞生长的作用.
-
益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究
目的探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理.方法用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧1.5小时,然后以含糖培养基,在5%CO2和37℃条件下给氧培养5小时,建立内皮细胞缺氧再给氧模型,以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程,荧光染色显示胞内钙离子与线粒体,细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)浓度.结果缺氧再给氧使ECV304细胞变圆、收缩、脱落,细胞内钙离子含量增高,线粒体膜电位减弱,SDH活性下降,LDH活性增高,培养液中SOD与NO含量减少,而MDA浓度增高;用益生注射液干预后,ECV304细胞形态基本恢复正常,上述多项检测指标的改变得以逆转.结论缺氧再给氧导致ECV304细胞发生脂质过氧化,胞内钙离子超载、SOD活性及NO水平降低、线粒体功能受损,益生注射液可使上述变化得以逆转,从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤.
