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百会穴注射腺苷A1受体激动剂对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质的影响
目的 观察百会穴( GV20)注射腺苷A1受体激动剂(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质的影响.方法 将24只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、二甲基亚砜(DMSO)组和CCPA组.采用线栓暂时性阻塞大脑中动脉法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型；DMSO组和CCPA组分别在缺血再灌注即刻百会穴注射DMSO 20μL和CCPA(0.1 mmoL/L)20 μL；分别对大鼠行为学、大脑皮质半暗带区组织形态、Bcl-2蛋白表达量和神经细胞凋亡率进行评估.结果 与模型组和DMSO组比较,CCPA组大鼠行为学明显改善(P＜0.05)；神经元无明显的胞浆空染、核固缩等现像；Bcl-2蛋白表达量明显升高(P＜0.01)；细胞凋亡数明显减少(P＜0.01).结论 百会穴注射CCPA能够改善脑缺血再灌注损伤大鼠行为学和大脑皮质半暗带区组织形态学,提高大脑皮质半暗带区Bcl-2蛋白表达量并减少神经细胞凋亡率,缓解大鼠脑缺血再灌注损伤,可作为一种新型的治疗方法.
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腺苷A1受体激动抑制心肌细胞肥大
目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷A1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropy1) adenosine(R-PIA)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制特别是与CaMK Ⅱ表达的关系及对心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化的影响.方法 新生大鼠心肌细胞分组给药,以10 μmol/L的异丙肾上腺素(β肾上腺素激动剂,β-AR)诱导心肌肥大,观察1 μmol/L的R-PIA的作用以及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂KN93(0 2 μmol/L)防止腺苷A1受体的激活对心肌肥厚的作用.[3H]亮氨酸leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成;Western blot法测细胞核内CaMKⅡδB的表达水平;Till图像测定系统,以Fura-2做荧光标志,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化.结果 1 μmol/L的R-PIA可以明显抑制Iso诱导的蛋白合成增加[(974 8±58 6)vs(1220 8±240 5)计数/(min·孔),P<0 01],抑制[Ca2+]i瞬变增加[(189 9±10 7) vs (312 5±8 8)nmol/L,P<0 05]和心肌细胞核内CaMK Ⅱδ B的表达含量增加的作用,该抑制作用可以被A1受体抗拮剂8-cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.并且当R-PIA与KN93合用时二者有协同抑制作用,其作用较单用KN93组明显[分别为蛋白合成:(R-PIA+KN93合用:758 1±80 7)vs(KN93单用:981 3±184 4),P<0 05;[Ca2+]i瞬变浓度:(R-PIA+KN93合用:169 96±10 02)vs(KN93单用:202 39±16 58),P<0 05].结论 在低血清环境下,Iso明显诱导心肌细胞肥大.腺苷通过激动A1受体明显抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制可能通过降低心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达.
关键词： 心肌肥厚 腺苷A1受体激动剂 CaMKII 异丙肾上腺素 [Ca2+]i瞬间变化 -
腺苷A1受体激动剂对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的抑制作用
目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷A1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropyl)adenosine (R-PIA ) 对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制.方法在二十四孔培养板上进行新生大鼠心肌细胞培养,待细胞长成单层后,换成低血清培养基,分组给药,48 h后用Lowry's法测心肌细胞的蛋白质含量;用计算机CIAS大恒细胞图象分析系统测量心肌细胞体积;用[3H]-leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成.结果在低血清(0.4%)环境下,ISO明显诱导了心肌细胞蛋白含量增加,体积增大和蛋白合成增加.R-PIA 可以明显抑制ISO诱导的心肌细胞蛋白含量增加、体积增大、蛋白合成增加的作用,该种作用可以被A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.结论在低血清环境下,ISO明显诱导心肌细胞肥大,ISO诱导心肌细胞肥大通过激动β-肾上腺受体途径.腺苷明显抑制ISO诱导的心肌肥大,其可能是通过激动A1受体途径来发挥这种抑制作用的.
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百会穴注射腺苷A1受体激动剂对创伤性颅脑损伤大鼠脑水含量及炎性介质的影响
目的 观察百会穴(GV20)注射腺苷A1受体激动剂(CCPA)对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠脑水含量及炎性介质的影响.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为模型组、CCPA组、二甲基亚砜(DMSO)组,每组10只.采用改良Feeney法建立大鼠TBI模型;DMSO组和CCPA组于制模前30 min百会穴注射DMSO和0.1mmol/L CCPA各20 μL.伤后24 h评估大鼠神经功能行为学评分,并观察各组脑水含量及大脑皮质白细胞介素(IL-1、IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的变化.结果 与模型组和DMSO组比较,CCPA组神经功能评分明显升高[分:10.90±0.99比8.60±0.84、8.95±0.99,均P＜0.01],脑水含量及脑组织内IL-1 β、TNF-α水平明显降低[脑水含量:(71.30±0.44)％比(73.25±0.66)％、(72.99±0.29)％,均P＜0.05;IL-1 β(灰度值):29.31±3.08比63.41±2.46、51.44±7.23,TNF-α(灰度值):43.03±4.19比70.79±8.10、60.17±11.16,P＜ 0.05或P＜0.01],IL-10水平明显增加[灰度值:58.33±3.14比31.30±4.17、26.26±1.65,P＜0.01].结论 百会穴注射CCPA能明显减轻TBI后脑水肿的程度和神经行为缺损症状,其机制可能是通过降低脑组织中IL-1β、TNF-α和提高IL-10的表达、减轻炎症反应而起作用的.
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腺苷A1受体激动剂对心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的保护作用
目的 观察腺苷A1受体激动剂对培养的心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的影响.方法 以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,给予腺苷A1受体激动剂R(-)N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)(0.1及1μmol/L),测定培养液上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量及细胞MTT代谢率的变化.结果 腺苷A1受体激动剂可以使培养液上清液中LDH和MDA的含量明显降低,SOD的活性增强,细胞MTT代谢率明显升高,且呈现剂量依赖性.而且这种作用可被腺苷A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.结论 腺苷A1受体激动剂对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞有保护作用.
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腺苷A1受体激动剂对兔脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 观察腺苷A1受体激动剂对兔脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 新西兰大白兔随机分成治疗组、对照组和假手术组,建立兔脊髓缺血/再灌注模型,给予腺苷A1受体激动剂CPA、DMSO,观察兔神经功能恢复；通过病理切片,计算脊髓前角正常神经元；应用免疫荧光染色检测Bcl-2表达.结果 治疗组和假手术组的神经功能评分在各观察时间点均明显高于对照组(P＜0.01)；与对照组相比,治疗组和假手术组的脊髓前角正常神经细胞数明显增多(P＜0.01)；治疗组兔脊髓神经元的免疫荧光反应明显强于对照组.结论 腺苷A1受体激动剂对脊髓缺血/再灌注损伤具有保护作用,可保护神经元和改善神经功能障碍.
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腺苷A1受体激动剂后处理对兔心肌缺血-再灌注损伤的影响
目的 探讨腺苷A1受体激动剂(2-氯环戊腺苷,CCPA)后处理对兔心肌缺血-再灌注损伤的保护作用.方法 32只兔随机均分为四组:假手术组(S组,开胸后仅行左冠状动脉套线而不阻断160min)、缺血-再灌注组(IR组,行左冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min)、缺血后处理组(lPC组,结扎左冠状动脉前降支40 min,再通30 s,结扎30 s,重复3次,再灌注120 min)和CCPA后处理组(APC组,结扎左冠状动脉前降支40 min,开放左冠状动脉1 min内予以静推CCPA100 μg/kg,冉灌注120 min).分别于左冠状动脉前降支阻断前20 min(T1)、左冠状动脉前降支阻断20 min(T2)、左冠状动脉前降支阻断40 min(T3)、心肌再灌注1 h(T4)和心肌再灌注2 h(T5)抽取颈内动脉血测定血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量.再灌注末抽血离心测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),测定心肌梗死面积.结果 和IR组相比,IPC组和APC组再灌注各个时间点cTnI均降低(P<0.05);IPC组和APC组梗死面积均小于IR组(P<0.05);IPC组和APC组血清中sOD的活性高于IR组,MDA的含量低于IR组(P<0.05).结论 腺苷A1受体激动剂后处理具有类似缺血后处理的心肌保护作用.其机制可能是通过减少氧自山基的生成,增强心肌抗氧化能力.
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腺苷A1受体激动抑制高糖诱导的心肌细胞肥大
目的 研究腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenylisopropyl) adenosine(R-PIA)对高糖(HG)诱导心肌细胞肥大的作用及机制. 方法大鼠乳鼠心肌细胞培养,以HG(25.5 mmol·L~(-1))诱导心肌细胞肥大模型,观察1 μmol·L~(-1) R-PIA和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂U0126对心肌肥厚的作用.用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;Western blot法测心肌细胞p-ERK1/2的相对表达水平;Till图像测定系统测心肌细胞[Ca~(2+)]I瞬间变化.结果 1 μmol·L~(-1) R-PIA和U0126可以相似程度地抑制HG诱导的心肌细胞蛋白含量增加、p-ERK1/2相对表达增加及[Ca~(2+)]I瞬间增加.合用0.1μmol·L~(-1)腺苷Al受体拮抗剂8-eyelopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)抑制作用消失.结论 腺苷通过激动A1受体抑制HG诱导的心肌肥厚,其机制与减少心肌细胞p-ERK1/2的相对表达和降低[Ca~(2+)]I瞬间变化有关.
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腺苷A1受体激动剂对缺血损伤的兔脊髓神经元凋亡的影响
目的 观察腺苷A1受体激动剂对脊髓缺血性损伤后的神经元凋亡的影响.方法 建立兔脊髓缺血模型,给予腺苷A1受体激动剂(CPA),观察兔神经功能恢复,通过病理切片,计算脊髓前角正常神经元,再应用免疫荧光染色检测BCL-2表达水平,western-blot的方法 观察caspase3、caspase9、BCL-2、BCL-X1、BAX、BAD表达水平.结果 与DMSO组相比,CPA组兔神经功能明显改善.caspase3、caspase9、BCL-2、BCL-X1表达水平显著高于DMSO组,而BAX、BAD表达水平则明显降低.结论 腺苷A1受体激动剂可能通过抑制神经元凋亡对脊髓缺血损伤发挥保护作用.
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腺苷A1受体激动剂拮抗大鼠慢性低氧所致右心室肥厚的实验研究
目的 通过外周途径持续给予腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(CPA),观察其拮抗低氧致右心室肥厚的作用和机制.方法 将24只SD大鼠随机分为3组:A组(常氧组)、B组(慢性低氧组)、C组(慢性低氧+CPA治疗组).B、C组于缺氧箱中喂养.于实验第8天予皮下埋泵给予CPA.于第21天处死大鼠,检测右心室/(左心室+室间隔)[RV/(LV+S)]、右心室/体重(RV/BW)比值;采用RT-PCR及Western-blot法检测RGS4基因及蛋白表达.结果 慢性缺氧组与常氧组相比,RV/(LV+S)、RV/BW比值明显增高(分别P<0.01,P＜0.05),而RGS4的mRNA及蛋白表达水平明显下降(均P<0.01);CPA处理后RV/(LV+S)、RV/BW比值明显低于缺氧组(分别P<0.01,P＜0.05),而RGS4的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P均＜0.01). 结论外周途径应用CPA能拮抗慢性缺氧所致右心肥厚,其机制可能是通过上调RGS4表达从而抑制G蛋白介导的信号通路.
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腺苷A1受体激动剂预处理兔延迟相心肌蛋白质组学分析
目的:研究腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)预处理延迟相缺血再灌注心肌保护的蛋白质表达谱的变化.方法:8只新西兰大白兔随机分为CCPA预处理组(CCPA组)和生理盐水预处理组(NS组).CCPA组用100 μg/kg CCPA预处理大白兔,NS组用生理盐水预处理.24h后冠状动脉左前降支行30 min缺血/2h再灌注,然后取左心室缺血区心肌组织进行蛋白质组学研究.另取12只新西兰大白兔随机分为假手术组(Sham组)、生理盐水预处理组(NS组)和CCPA预处理组(CCPA组),每组4只,用Western印迹验证差异蛋白αB-晶状体蛋白的表达.结果:双向凝胶电泳分析发现2组表达明显差异的蛋白点有55个.其中17个差异蛋白质点用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱技术以及Mascot和Expasy软件分析,初步鉴定出17个蛋白质.这些蛋白质包括应激反应蛋白、代谢相关蛋白、信号调节蛋白、离子通道蛋白、免疫相关蛋白等.Western印迹证实αB-晶状体蛋白在CCPA组中的表达明显上调.结论:CCPA预处理延迟相缺血再灌注心肌组织的蛋白质表达谱发生改变,这些蛋白质可能与腺苷A1受体激动剂预处理延迟相缺血再灌注心肌保护作用有关.
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金属硫蛋白介导腺苷A1受体激动剂延迟预处理对兔心肌的保护作用
目的:探讨腺苷A1受体激动剂--2-氯环戊腺苷(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的延迟相保护机制.方法:30只健康新西兰雄性大白兔随机均分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和CCPA组(P组).C组仅行左冠脉套线而不阻断160 min;I/R组行左冠脉阻断40 min,再灌注120 min;P组在静注CCPA 0.1 mg/kg 24 h后处理同I/R组.再灌注结束后观察心肌细胞超微结构和心肌梗死面积的变化,测超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdhyde,MDA)含量,免疫印记法测心肌金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达.结果:与I/R组比,P组血清中SOD的活性增高,MDA的含量降低(P<0.05),MT表达增高(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05).结论:CCPA预处理对缺血再灌注心肌的延迟相保护作用与促进心肌MT表达有关.
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腺苷A1受体激动剂延迟预处理对缺血再灌注兔心肌炎性细胞因子的影响
目的 探讨腺苷A1受体激动剂(2-氯环戊腺苷,CCPA)延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护机制及对炎性细胞因子的影响.方法 30只健康新西兰雄性大白兔随机分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、CCPA组(P组),每组10只.C组仅行左冠脉套线而不阻断160 min,I/R组行左冠脉阻断40min,再灌注120 min,P组在静注CCPA 0.1 mg/kg 24h后,处理同I/R组.各组分别于左冠前降支阻断前20min(T1)、左冠前降支阻断20 min(T2)、左冠前降支阻断40 min(T3)、心肌再灌注1 h(T4)心肌再灌注2 h(T5)5个时点抽取颈内动脉血测定血清中肌钙蛋白(cTnI)、白介素-10(IL-10)和白介素-6(IL-6)含量.再灌注结束后观察心肌细胞超微结构的变化,用伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积.结果 与C组比,I/R组与P组cTnI、IL-10和IL-6含量均增高(P<0.05),但与I/R.组比,P组IL-10增高(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05),cTnl和IL-6降低(P<0.05).结论 腺苷A1受体激动剂延迟预处理通过调控炎性细胞因子平衡发挥心肌保护作用.
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腺苷A1受体激动剂延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护机制.方法:30只健康新西兰雄性大白兔随机分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、CCPA组(P组),每组10只.C组仅行左冠脉套线而不阻断160min,I/R组行左冠脉阻断40min,再灌注120min,P组在静注CCPAO.1mg/kg24 h后处理同I/R组.各组分别于左冠前降支阻断前加min(T1)、左冠前降支阻断20min(T2)、左冠前降支阻断40min(T3)、心肌再灌注I h(T4)心肌再灌注2 h(T5)5个时点抽取颈内动脉血测定血清中IL-10含量.再灌注120 min后,测心肌热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)蛋白表达和心梗面积,电镜下观察细胞超微结构变化.结果:与I/R组比,P组IL-10含量和HSP70表达增高(p＜0.05),心肌梗死面积减少(P＜0.05),细胞结构损伤减轻.结论:CCPA延迟预处理通过增高心肌HSP70表达和IL-10水平来减轻缺血再灌注损伤发挥心肌保护作用.
