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三七注射液对兔缺血再灌注损伤的延迟预处理作用及信号机制研究
目的:研究三七注射液预处理对实验性兔缺血再灌注损伤的延迟保护作用及其部分信号转导机制.方法:采用心肌梗死面积、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天门冬酸氨基转移酶(AST)水平和组织匀浆液中丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性作为心肌细胞受损指标,观察三七注射液(150mg/kg体重)预处理24h后对兔缺血再灌注损伤的保护作用及蛋白激酶C(PKC)、抑制剂Chelerythrine chloride(CTC)、酪氨酸激酶(TK)、抑制剂Genistein(GST)对三七注射液预处理作用的影响;并通过免疫组化(SP法)测定预处理24h后,nPKC-ε、核因子-κB(NF-κB)的表达情况.结果:三七注射液预处理能显著缩小缺血再灌注损伤心肌的心梗面积,减少血浆LDH、CK水平和组织匀浆液中MDA生成,并明显提高Mn-SOD活性,CTC、GST可完全取消这种心肌保护作用.三七注射液预处理还可明显增加nPKC-ε、NF-κB的表达,CTC能抑制此作用,但GST仅对NF-κB的表达增加有抑制作用.结论:三七注射液能够模拟缺血预处理延迟保护作用.其机制涉及PKC及TK信号转导途径,可能通过活化nPKC-ε,使下游靶蛋白TK磷酸化而激活,再诱导NF-κB的高度表达产生延迟预处理心肌保护作用.
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大蒜素对乳鼠心肌细胞延迟预处理保护作用及其信号转导机制的研究
目的:研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的延迟保护作用及其部分信号转导机制.方法:采用细胞存活率、乳酸脱氢酶活性、丙二醛含量作为心肌细胞受损指标,观察终浓度为20μg/ml的大蒜素预处理24h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及蛋白激酶抑制剂H-7、丝裂素激活蛋白激酶抑制剂PD 98059对大蒜素预处理作用的影响;并通过免疫印迹技术(Western blot analysis)测定大蒜素预处理24h后,nPKC-ε、热休克蛋白70(HSP70)和核因子-кB(NFкB)的表达情况.结果:大蒜素预处理能显著提高缺氧复氧损伤心肌细胞存活率,减少LDH漏出和MDA生成,H-7、PD 98059可完全取消这种心肌保护作用.大蒜素预处理可明显增加nPKC-ε、HSP70的表达,H-7能抑制此作用,而PD98059仅对HSP70表达有抑制,NF-кB在各组间均无明显表达.结论:大蒜素能够模拟缺血预处理延迟保护作用,其机制涉及PKC及MAPKs信号途径,可能通过活化nPKC-ε,使下游靶蛋白MAPKs磷酸化而诱导HSP70的高度表达产生延迟预处理心肌保护作用.
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大蒜素延迟预处理对实验性兔心肌梗死损伤保护作用的研究
目的探讨大蒜素对实验性兔心肌梗死损伤的延迟保护作用.方法采用心肌梗死重量占危险区心肌重量的百分比(I/R)和心肌超微结构,作为心肌梗死损伤指标,观察大蒜素(1、0.5 mg/kg)预处理对24 h后实验性兔心肌梗死损伤的保护作用.结果 1 mg/kg剂量大蒜素延迟预处理能显著减少I/R比值达30.62%,并明显改善坏死区心肌的超微结构.结论大蒜素在实验性兔心肌梗死模型能够模拟缺血预处理延迟保护作用,具有药物预处理的潜在价值.
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大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧延迟保护作用的研究
目的:研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧的延迟保护作用及其机制.方法:采用细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量作为心肌细胞受损指标.观察终浓度分别为5、10、20、50 μg/ml的大蒜素预处理以及预处理12、24、36 h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响,并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂H-7、丝裂素激活蛋白激酶(MAPKs)抑制剂PD 98059对大蒜素预处理的作用.结果:大蒜素能提高细胞存活率,减少LDH漏出和MDA生成.其中20 μg/ml浓度作用较强.大蒜素预处理12 h后即产生延迟保护作用,24 h强,36 h消失.H-7、PD 98059能够完全清除大蒜素预处理的心肌保护作用.结论:大蒜素可以模拟缺血预处理延迟保护作用,其机制涉及PKC及MAPKs信号途径.
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硫化氢延迟预处理对大鼠心肌蛋白质组学的研究
目的 采用蛋白质组学技术,观察硫化氢延迟预处理对大鼠心肌蛋白质表达的影响.方法 16只SD大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组和硫化氢预处理组,每组8只.尾静脉注射生理盐水和硫化氢预处理后24h建立心肌缺血/再灌注模型(缺血30 min、再灌注120 min).用双向凝胶电泳(2-DE)分离两组大鼠心肌组织蛋白质,2-DE图谱分析后找出表达差异的蛋白质,并用基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质.结果 对照组的蛋白质点数平均为929±14,硫化氢组的蛋白质点数平均为906±10,经凝胶图像分析找到表达差异蛋白质15个;用MALDI-TOF-MS对差异蛋白进行鉴定,共鉴定出11个蛋白质,包括多(聚)脱氧核糖核苷酸合酶、胱硫醚-γ-裂解酶、转录起始因子、NADH脱氢酶、鸟嘌呤核苷酸释放因子、果糖二磷酸醛缩酶A、糖原合成酶激酶-3、电子转移黄素蛋白、谷胱甘肽S转移酶、钙活化核苷酸酶、S-腺苷蛋氨酸合成酶.结论 硫化氢延迟预处理可使大鼠心肌组织蛋白表达发生改变,其心肌保护作用可能与改善能量代谢、抗氧化反应、细胞保护和保护呼吸链等有关.
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大蒜素延迟预处理对兔血流动力学的影响
目的:探讨大蒜素对兔心肌梗死模型血流动力学指标的延迟保护作用.方法:采用血流动力学作为心肌梗死损伤指标,观察大蒜素(1、0.5mg/kg)预处理对24h后实验性兔心肌梗死损伤的保护作用.结果:大蒜素(0.5、1mg/kg体重)预处理使复灌末LVEDP较缺血再灌损伤组分别降低32.34%及56.56%(P＜0.01或P＜0.05);LVPSP分别提高61.58%及94.33%(P＜0.05);+dp/dt分别增加19.94%及49.84%(P＜0.05),-dp/dt分别增加24.17%及51.33%(P＜0.05或P＜0.01).但对动物HR、CF无明显改变.结论:大蒜素在实验性兔心肌梗死模型能够模拟缺血预处理延迟保护作用,具有药物预处理的潜在价值.
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环氧合酶2介导地氟醚延迟预处理对大鼠心脏的保护作用
目的:探讨环氧合酶2介导地氟醚延迟预处理对大鼠心脏的保护作用.方法:32只Wistar大鼠随机分为对照组、NS398组、地氟醚延迟预处理组(DES)及NS398+DES组,建立心肌缺血/再灌注模型,以TTC染色法测定梗死心肌大小;另取32只Wistar大鼠,分组同上,RT-PCR测定缺血区心肌COX-2 mRNA水平.结果::地氟醚延迟预处理(1MAC)可显著减少大鼠缺血/再灌注后心肌梗死的范围(P＜0.01),并可使心肌COX-2 mRNA表达增强(P＜0.01),其心脏保护作用可被COX-2选择性抑制剂NS398阻断.结论:环氧合酶2介导地氟醚延迟预处理对大鼠心脏具有保护作用.
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重组人脑钠肽(BNP)延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的影响
目的:应用生化及免疫组化的方法探讨重组人脑钠肽(BNP)延迟预处理是否对心肌缺血再灌注损伤具有有效的保护作用及其机制.方法:制作各组模型.A组:重组人脑钠肽(BNP)延迟预处理组,采用给药后左冠状动脉前降支40 min缺血,120 min再灌注;B组:缺血再灌注组,采用左冠状动脉前降支40 min缺血,120 min再灌注;C组:假手术组,开胸穿线但不结扎.各组模型制备完成后在光镜下观察兔缺血再灌注心肌形态学变化及用免疫组化法检测Bcl-2与Bax的表达;并分别在各组模型制作完成后4 h取血,生化分析心肌酶.结果:(1)心肌酶学检测显示,CK-MB升高为B组>A组>C组,B组与A组相比P<0.01,A组与C组相比P<0.001.(2)HE染色显示对照组心肌结构正常,缺血再灌注组心肌损伤严重,BNP药物延迟预处理组心肌损伤较轻.(3)镜下观察细胞中Bax及Bcl-2的表达:假手术组Bcl-2表达呈阳性,Bax表达阴性;缺血再灌注组Bax表达呈强阳性,Bcl-2表达呈弱阳性;BNP药物延迟预处理组Bax表达呈弱阳性,Bcl-2的表达介于对照组及缺血再灌注组之间.结论:BNP对于在体兔心肌缺血-再灌注损伤具有延迟保护作用.
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药物延迟预处理减少在体幼兔缺血再灌注损伤后的心肌细胞凋亡
目的 在完全模拟心脏体外循环手术的在体缺血再灌注损伤幼兔模型中,验证二氮嗪介导的延迟预处理是否能够减少心肌细胞凋亡.方法 3～4周龄健康新西兰幼兔32只随机分为:对照组;缺血再灌注(I/R)组;二氮嗪(DZX)组:幼兔24 h前耳缘静脉注射DZX(1 mg/kg);DZX+PDTC组:将实验用幼兔24 h前耳缘静脉注射DZX(1 mg/kg)及二硫代氨基甲酸吡咯烷PDTC(100 mg/kg).建立在体幼兔体外循环缺血再灌注损伤模型,阻断升主动脉1 h后开放循环再灌注6 h, 而对照组仅建立体外循环,不阻断升主动脉,经历实验组相同体外循环时间.取心室壁心肌做TUNEL染色检测凋亡细胞, Caspase-3酶活性的检测, Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达.结果 ① TUNEL检测结果:缺血再灌注损伤所导致的心肌细胞凋亡较对照组均显著增高(P<0.01);DZX组凋亡指数较I/R组明显减少(P<0.01);加入PDTC后,凋亡指数又较DZX组明显增多(P<0.01).② I/R组较DZX组Caspase-3活性明显升高(P<0.01).但DZX组和DZX+PDTC组Caspase-3活性并无差别(P>0.05).③与I/R组相比DXZ组幼兔心肌细胞Bcl-2/Bax显著增加(P<0.01);与DZX组相比DZX+PDTC组幼兔心肌细胞中Bcl-2/Bax显著减少(P<0.05).结论 二氮嗪介导的延迟预处理能够减少心肌细胞凋亡;NF-κB通过调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用.
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心肌延迟预处理效应机制的研究进展
延迟预处理是一个涉及多种应激-反应基凶表达,并终导致心肌保护蛋白合成的复杂过程.除缺血之外,热刺激、锻炼和细胞因子等亦可触发相同的信号转导过程.更蘑要的是,许多药物,如NO供体、A1受体激动剂、内毒素衍生物和阿片受体激动剂等均可诱导出类似于缺血预处理的延迟预处理效应.这说明这种内源性调节反应可用于治疗目的 .现就延迟预处理效应的触发环节、信号转导系统和介导凶素作一综述.
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阿片类药物延迟预处理心肌保护作用的研究进展
与缺血预处理类似,阿片类药物预处理亦可诱发延迟性心肌保护作用,临床应用麻醉性镇痛药如吗啡等可通过激动阿片受体而减轻缺血/再灌注损伤.研究发现,阿片类药物预处理的延迟性心肌保护作用持续时间较长,所以对预防心肌缺血/再灌注损伤更具临床应用价值.此文综述了阿片类药物预处理延迟性心肌保护作用的生理学基础和机制.
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吗啡延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤p38丝裂原活化蛋白激酶的影响
目的 探讨吗啡延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护机制.方法 30只健康新西兰雄性大白兔随机分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、吗啡预处理组(M组),每组10只.c组仅行左冠状动脉套线而不阻断160 min;I/R组行左冠状动脉阻断40 min,再灌注120 min;M组在静注吗啡1.0 mg/kg 24 h后处理同I/R组.各组分别于左冠状动脉前降支阻断前20 min(TI)、左冠状动脉前降支阻断20 min(T2)、左冠状动脉前降支阻断40 min(T3)、心肌再灌注1 h(T4)、心肌再灌注2 h(T5)5个时点抽取颈内动脉血测定血清中TNF-α含量.再灌注120 min后,免疫印迹法测心肌p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)活性水平,同时测心肌梗死面积.结果 与I/R组比,M组TNF-α含量降低,p38MAPK活性降低,心肌梗死面积减少[M组(21.5%±2.4)%,I/R组(37.8%±1.7)%].上述差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 吗啡延迟预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用可能通过抑制心肌p38MAPK的活性、减少TNF-α生成来实现.
关键词： 吗啡 延迟预处理 心肌缺血再灌注损伤 p38丝裂原活化蛋白激酶 兔 -
核转录因子-kB在腺苷A1受体激动剂预处理中的作用
目的:了解核转录因子-kB(NF-kB)与腺苷A1受体激动剂(CCPA)预处理延迟阶段中的作用.方法:健康雄性Wistar大鼠随机分组.A组:以CCPA预处理;K组:在CCPA处理前15min注射NF-kB抑制剂;C组:对照组仅用CCPA溶剂注射.24h后制成离体心脏,作离体灌注心,12～15℃缺血180min,间断灌注4℃改良st.Thomas心麻液,再灌注60min.观察心功能,心肌Mn-SOD、MDA和ATP等指标.结果:A组左心压力上升大速度的恢复率、心肌Mn-SOD、ATP都明显高于K、C组;MDA为15.78±2.39(nmol/mg蛋白质)低于K、C组,差别均有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论:NF-kB在腺苷A1受体激动剂(CCPA)预处理延迟阶段中起着信号传递的关键作用.
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银杏叶提取物延迟预处理对大鼠心肌缺血再灌注时细胞色素c氧化酶表达的影响
目的:探讨银杏叶提取物(EGb761)延迟预处理对大鼠心肌缺血再灌注时细胞色素c氧化酶(cytochrome coxidase,CcO)表达的影响.方法:健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠40只,随机分成4组:S组(假手术组),仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流150 min; IR组(缺血再灌注组),行冠状动脉左前降支阻断30 min,再灌注120 min;M组(银杏叶提取物延迟预处理组),予以静脉注射银杏叶提取物EGb761 100 mg/kg,给药后24h同IR组处理；D组[银杏叶提取物预处理+5-羟葵酸(5-HD)组],缺血前15 min静脉注射5-HD 5 mg/kg,余同M组处理.再灌注结束后测心肌CcO的表达和心肌梗死面积,观察心肌细胞超微结构.结果:与IR组[(37.87±5.92)％]比较,M组[(23.78±4.82)％]心肌梗死面积减小(P＜0.05),D组[(39.62±5.18)％]差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比,IR组、M组和D组CcO均升高(P＜0.05)；与IR组比,M组CcO增高(P＜0.05).电镜下,M组心肌细胞损伤程度较IR组减轻,D组与IR组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:银杏叶提取物延迟预处理对大鼠心肌的保护作用与上调心肌CcO表达有关.
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异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响
目的:观察异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响,并探讨其心肌延迟保护效应的机制. 方法:40只成年雄性新西兰大白兔随机分成4组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚预处理组(S组)、异氟醚预处理+阿片类受体阻断剂组(N组).除C组外,各组均接受左冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min.S组在缺血前24 h时吸入2.0%异氟醚2 h,N组在吸入2.0%异氟醚前10 min,静脉注入阿片类受体阻断剂纳络酮6 mg/kg.再灌注结束后,测心肌梗死面积,免疫印迹法测Bcl-2和caspase-3蛋白的表达,透视电镜下观察心肌超微结构变化. 结果:与I/R组比,S组心梗面积(19.7%±2.8% vs 37.8%±1.7%)显著降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达增高,caspase-3蛋白活性降低(P＜0.05),心肌病理损伤减轻.结论:异氟醚预处理对心肌延迟保护效应可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调caspase-3蛋白活性,抑制心肌细胞凋亡有关.
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金属硫蛋白介导腺苷A1受体激动剂延迟预处理对兔心肌的保护作用
目的:探讨腺苷A1受体激动剂--2-氯环戊腺苷(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的延迟相保护机制.方法:30只健康新西兰雄性大白兔随机均分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和CCPA组(P组).C组仅行左冠脉套线而不阻断160 min;I/R组行左冠脉阻断40 min,再灌注120 min;P组在静注CCPA 0.1 mg/kg 24 h后处理同I/R组.再灌注结束后观察心肌细胞超微结构和心肌梗死面积的变化,测超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdhyde,MDA)含量,免疫印记法测心肌金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达.结果:与I/R组比,P组血清中SOD的活性增高,MDA的含量降低(P<0.05),MT表达增高(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05).结论:CCPA预处理对缺血再灌注心肌的延迟相保护作用与促进心肌MT表达有关.
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腺苷A1受体激动剂延迟预处理对缺血再灌注兔心肌炎性细胞因子的影响
目的 探讨腺苷A1受体激动剂(2-氯环戊腺苷,CCPA)延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护机制及对炎性细胞因子的影响.方法 30只健康新西兰雄性大白兔随机分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、CCPA组(P组),每组10只.C组仅行左冠脉套线而不阻断160 min,I/R组行左冠脉阻断40min,再灌注120 min,P组在静注CCPA 0.1 mg/kg 24h后,处理同I/R组.各组分别于左冠前降支阻断前20min(T1)、左冠前降支阻断20 min(T2)、左冠前降支阻断40 min(T3)、心肌再灌注1 h(T4)心肌再灌注2 h(T5)5个时点抽取颈内动脉血测定血清中肌钙蛋白(cTnI)、白介素-10(IL-10)和白介素-6(IL-6)含量.再灌注结束后观察心肌细胞超微结构的变化,用伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积.结果 与C组比,I/R组与P组cTnI、IL-10和IL-6含量均增高(P<0.05),但与I/R.组比,P组IL-10增高(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05),cTnl和IL-6降低(P<0.05).结论 腺苷A1受体激动剂延迟预处理通过调控炎性细胞因子平衡发挥心肌保护作用.
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七氟醚延迟预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制研究
目的：探讨七氟醚延迟预处理对于减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法选取15只已成年的健康雄性大鼠作为研究对象，随机将其分为缺血再灌注组、七氟醚延迟预处理组和假手术组，每组5只。比较各时点（T0～T4）各组大鼠的血流动力学指标和心肌梗死面积的变化情况。结果各组T0时心率（HR）、平均动脉压（MAP）和心率血压乘积（RPP）等血流动力学指标比较差异无统计学意义（P＞0.05），心肌缺血再灌注后T1～T4时HR、MAP和RPP值均低于T0时，差异具有统计学意义（P＜0.05），但组间两两比较差异无统计学意义（P＞0.05）。缺血再灌注组与七氟醚组心肌缺血面积比较差异无统计学意义（P＞0.05）。但七氟醚组心梗面积明显低于缺血再灌注组（P＜0.05）。结论七氟醚延迟预处理可有效减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，对心肌细胞有较好的保护作用。
