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丙泊酚对培养的大鼠缺氧/复氧心肌细胞内游离钙的影响
目的建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,测定细胞内游离钙([Ca2+]i)观察丙泊酚对缺氧]复氧心肌细胞的保护作用.方法大鼠心肌细胞正常培养6-8天后分为4组.Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为单纯缺氧组,Ⅲ、Ⅳ组为缺氧/复氧加丙泊酚组.比较对照组(Ⅰ组)和实验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组)的细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化.结果心肌细胞[Ca2+]f:Ⅱ组(781.64士298.20nmol/L)与Ⅰ组(188.99±30.78nmol/L)相比较有显著性差异(P<0.05),Ⅲ组(279.11±106.14nmol/L)与Ⅰ组无显著性差异(P<0.05),Ⅱ组与Ⅳ组(469.41±145.35nmol/L)有显著性差异(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组有显著性差异(P<0.05).结论临床剂量丙泊酚和超临床剂量丙泊酚均可抑制钙超载,但使用临床剂量效果优于超临床剂量.静脉麻醉药丙泊酚可以通过抑制钙超载对抗缺氧所致的心肌细胞损伤.丙泊酚尚可认为具有钙拮抗剂作用.
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补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内[Ca2+]i作用的观察
目的:观察脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号细胞内钙离子的变化,并观察补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响.方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶法消化而来.胃泌素受体检测采用放射配基结合实验,壁细胞内[Ca2+]i变化测定采用双波长荧光法.结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数有显著降低,经补脾方药治疗后有所恢复;同时脾虚模型壁细胞内静息钙离子浓度明显低于正常组,经胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2+]i有所升高,且脾虚模型升高幅度明显高于正常组,经治疗后此状态有所恢复,但无统计学意义.结论:脾虚证可能与胃泌素受体低表达相关,且壁细胞内钙离子处于低代谢状态,但对于胃泌素刺激的反应性增强,进而可能导致酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强.补脾方药对其有一定的调节作用.
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17β-雌二醇对大鼠破骨细胞内钙浓度影响的研究
目的探讨雌激素调节破骨细胞活性机制.方法以Chamber方法加以改良,常规体外培养新生Wister大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC).镜下观察细胞形态,测定不同浓度17β-雌二醇(17βE2)在有钙与无钙溶液中对破骨细胞钙浓度(OC[Ca2+]i)的影响.结果 30 min后OC贴壁生长,胞浆伸展.2 h后细胞形态为多形性,有片状或丝状伪足,常规生存52 h.17βE2使细胞变小.除去17βE2,OC形态恢复原状.不同浓度17βE2在不同时间,有钙与无钙溶液中均可诱发OC[Ca2+]i升高.结论 OC是17βE2的靶细胞.[Ca2+]i升高是细胞外Ca2+流动与细胞内存钙释放的综合作用.OC[Ca2+]i升高后,细胞变小,伪足回缩,骨吸收活性被抑制.17βΕ2可能是通过OC[Ca2+]i途径抑制骨吸收.
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红花提取物对家兔肥厚心肌细胞内钙含量的影响
目的 探讨红花提取物对家兔肥厚心肌细胞内钙含量的影响.方法 将30只家兔按随机分配原则分为假手术组、心肌肥厚组和红花组,每组10只.采用Langendorff灌流装置分离心肌细胞,应用荧光指示剂Fura-2/AM标记,SIMPLE-PCI图象成像系统分别测量三组心肌细胞的荧光比值,并以此比值来间接反映细胞内钙的含量的变化.结果 心肌肥厚组(1.26±0.04)和红花组(1.02±0.02)较假手术组(0.85±0.04)荧光比值明显增大,具有统计学意义(P＜0.05),而红花组较心肌肥厚组的荧光比值明显减小,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 肥厚心肌细胞内钙 ([Ca2+]i)增加,形成钙超载,使心律失常的发生率显著升高.
关键词： 红花提取物(CTE) 细胞内钙 心肌肥厚 Fura-2/AM -
Spraque-Dawley大鼠心室肌细胞分离和胞内钙离子浓度测定
目的 探讨Spraque-Dawley大鼠心室肌细胞分离和胞内钙离子浓度测定方法.方法 采用三步法行逆行主动脉灌流获得单个耐钙心肌细胞,然后采用胞内钙荧光测定技术测定细胞内钙离子浓度.结果 在分离过程中如整个心脏保持红润,则细胞数量在90%以上,耐钙细胞KB液中孵育后在70%左右;在分离过程中心脏局部保持红润部位的细胞数量在80%以上,耐钙细胞在60%左右,而苍白区细胞数量变异较大,但一般均在50%以下,且耐钙细胞较少;在分离过程中如整个心脏始终苍白,则细胞数量不仅低于30%,且几乎没有耐钙细胞.采用荧光探针Fura-2/AM,可准确测定细胞内钙离子浓度.结论 通过本研究采用的方法,不仅可获得大量耐钙心肌细胞,而且可准确测定细胞内钙离子浓度.
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安定对胎鼠脑细胞内钙的影响
目的:研究安定在中枢神经系统的钙拮抗作用.方法:采用钙敏感的荧光探针Fura-2技术测定细胞内钙及变化.结果:在不同外钙(0 mmol/L,0.01 mmol/L,0.10 mmol/L,1.00mmol/L,1.30 mmol/L)条件下,细胞内钙离子浓度(简写[Ca2+]i)分别为(41±6)mmol/L,(59±6.85)mmol/L,(85±2)mmol/L,(104±8)mmol/L,(126±5)mmol/.安定0.4 mmol/L对细胞内钙没有显著影响.但安定(0.1 mmol/L～1.0 mmol/L)能浓度依赖性地抑制高钾及L-谷氨酸诱发的[Ca2+]i增高的作用(外钙1.3 mmol/L).其50%抑制率(IC50)分别为0.649 mmol/L(95%可信度为0.224 mmol/L～2.152 mmo[/L)及0.440 mmol/L(95%可信度为0.305 mmol/L～0.635 mmol/L).结论:安定通过阻滞电压依从性钙通道及受体操纵性钙通道,在中枢神经系统具有较强的钙拮抗作用.
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脾虚大鼠壁细胞酸分泌机制的实验研究
目的:观察脾虚模型大鼠酸分泌的异常及补中益气汤对其的调节作用,探讨脾虚状态的酸分泌机制.方法:采用大黄脾虚模型,透射电镜观察离体壁细胞形态、双波长荧光分光光度计测定胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2+]i变化及整体胃灌流实验.结果:电镜观察脾虚大鼠壁细胞分泌小管扩张,处于分泌状态;经胃泌素刺激后脾虚大鼠壁细胞内[Ca2+]i增高幅度明显高于正常组;胃灌流实验表明脾虚大鼠基础胃酸量显著低于正常组,而经组胺刺激后酸分泌增高幅度明显高于正常组,补中益气汤对其有调节作用.结论:脾虚大鼠存在酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强的反应.健脾益气方补中益气汤对其有一定的调节作用.
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P物质对大鼠垂体前叶细胞内Ca2+浓度的影响
目的 研究P物质(SP)对大鼠垂体前叶(AP)培养细胞内Ca2+的影响,进而阐述SP的作用机制.方法 原代培养成年雌性S-D大鼠的AP细胞48h后.加入不同浓度的SP孵育30min,采用Fura-2/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的AP细胞,结合阳离子测定系统检测AP细胞[Ca2+]i.结果 孵育时间为30min时,SP使AP细胞内Ca2+的水平增加,且呈剂量依赖性.结论 Fura-2/AM结合阳离子测定系统可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度,SP通过SPR产生的生物学效应可通过第二信使Ca2+来完成,在SP对生殖轴(下丘脑-垂体前叶-卵巢/睾丸)调控的理论中进一步证明了第二信使转导途径的作用.
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枸杞多糖体外对正常及衰老小鼠免疫细胞功能的作用及作用机理的初步研究
目的:探讨枸杞多糖(LBP)对免疫细胞功能的直接作用及其机理.方法:应用淋巴细胞增殖、溶血空斑和Fura-2/AM双波长荧光测定等方法.结果:LBP体外应用对正常小鼠及快速老化模型SAMP8和抗快速老化模型SAMR1脾细胞增殖反应具有直接促增殖作用,明显增加正常小鼠脾抗体形成细胞(PFC)数目,迅速诱导脾细胞和腹腔巨噬细胞内[Ca2+]i的增加,并有一定剂量依赖性关系.结论:枸杞多糖对免疫活性细胞的功能有直接促进作用,这可能与其增加细胞[Ca2+]i有关.
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用Fura-2双波长荧光法测定低剂量电离辐射对小鼠脾细胞游离钙的影响
目的:探讨低剂量电离辐射免疫增强效应的机理.方法:采用Fura-2/AM双波长荧光测定法研究了低剂量电离辐射全身照射后小鼠脾T淋巴细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)对次佳浓度Con A(5 mg/L)反应性的变化.结果:静息状态下的小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子浓度为95.0±14.0 nmol/L,ConA可使小鼠脾T淋巴细胞内游离钙离子浓度增加69.4±7.6 nmol/L,上升至峰值时间为79.2 s.75、100和200 mGy全身照射后24 h,Con A诱导的小鼠脾T淋巴细胞内游离钙离子动员明显高于假照射组(P<0.01).结论:低剂量电离辐射的免疫兴奋效应与其增强淋巴细胞内[Ca2+]i动员等信息传递过程有关.
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苦参碱对大鼠心肌细胞钙内流影响的实验研究
目的:观察苦参碱对培养SD大鼠心肌细胞内钙浓度的影响,以进一步明确苦参碱抗心律失常的机理.方法:利用培养的乳鼠心肌细胞,负载Fura-2/AM,在不同的条件下(培养液中分别加维拉帕米、氯化钾、不同剂量的苦参碱等),应用图象分析系统,测定心肌细胞内钙荧光强度的变化,间接测定苦参碱对钙内流的影响.结果:高钾环境下心肌细胞内钙荧光强度增高,而苦参碱对此有拮抗作用.结论:苦参碱的钙离子拮抗作用可能是其抗心律失常作用机理之一.
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柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响
目的:测定中药柴胡(Bupleurum Chinese DC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制.方法:以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL-7402细胞内[Ca2+]i.高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化.结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P＜0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P＜0.01).结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL-7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL-7402细胞的多药耐药(multidrug resistance,MDR).钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一.
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糖皮质激素快速抑制高钾离子诱导嗜铬细胞瘤细胞内游离钙浓度升高的作用及其特征
本研究应用钙离子特异荧光指示剂Fura-2/AM,使用Miracal影像系统(Miracal Image System)检测了糖皮质激素对高钾离子升高嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)内游离钙浓度([Ca2+]i)作用的影响.结果表明:(1)皮质酮抑制高钾离子诱导PC12细胞[Ca2+]i升高与其预处理细胞时间的长短有关,预处理3 min时,皮质酮开始产生抑制作用;预处理5 min时,其呈现的抑制作用强;预处理25 min时,抑制作用基本消失.(2)皮质酮在10-8～10-5 mol/L范围内时可呈剂量-效应关系,抑制高钾离子诱导的PC12细胞[Ca2+]i升高,皮质酮浓度为10-5 mol/L时,其产生的抑制作用大;在10-9mol/L时抑制作用不明显.(3)其它甾体激素如皮质醇、地塞米松、孕酮、雌二醇、睾酮、醛固酮在浓度为10-5 mol/L时,也能抑制高钾离子引起的PC12细胞[Ca2+]i升高,但在同一浓度时作用强度有所不同.胆固醇浓度为10-5 mol/L时,对高钾离子诱导PC12细胞钙浓度升高没有抑制作用.在同一浓度时它们的作用强度顺序大致为:孕酮=皮质醇＞地塞米松＞睾酮＞醛固酮=雌二醇＞＞胆固醇.(4)在皮质酮浓度为10-5mol/L时不能抑制由细胞外无钙到有钙过程引起的PC12细胞[Ca2+]i升高.
关键词： 糖皮质激素 PC12细胞 细胞内游离钙离子浓度 高钾离子 Fura-2/AM -
Fura-2/AM荧光法测定日本血吸虫培养细胞内游离钙离子浓度
目的研究用钙荧光探剂(Fura-2/AM)检测静息状态下日本血吸虫培养细胞内的游离钙离子浓度([Ca2+]i),以及β-巯基乙醇对培养细胞[Ca2+]i的影响.方法将18 d虫龄的日本血吸虫童虫制成细胞悬液,贴壁法接种于30 ml培养瓶中,培养液为RPMI-1640含20%小牛血清及常量抗生素.在培养的0-3d,制备日本血吸虫细胞悬液,采用Fura-2/AM钙荧光探剂测定正常静息状态下及加入β-巯基乙醇后日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i.结果正常静息状态下,培养0 d的日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i为188.2 nmol/L;培养1-3 d的[Ca2+]i两两比较差异无显著性(P＞0.05),它们的平均值为(187.0±10.7)nmol/L,与培养0d的[Ca2+]i比较,差异也无显著性(P＞0.05).β-巯基乙醇可使日本血吸虫培养细胞内[Ca2+]i明显升高(P＜0.01),并随浓度的增加而升高.结论培养1-3 d,静息状态下日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i比较稳定,β-巯基乙醇能影响日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i.
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不同浓度中药柴胡提取物对人肝癌细胞内Ca2+和p53表达的影响
目的: 测定不同浓度中药柴胡(Bupleurun Chinese DC, BCDC)提取物对BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和p53表达的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制. 方法: 用Fura-2/AM作为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计测定不同浓度柴胡提取物作用下BEL-7402细胞内[Ca2+]i及其剂量-效应关系;用免疫组化法检测不同条件下BEL-7402细胞的p53表达.结果: 柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),但不具有剂量-效应关系; BEL-7402细胞呈p53天然突变.结论: 柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂(calcium channel blocker,CCB),提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一;BEL-7402细胞呈p53天然突变也可直接或间接影响肿瘤多药耐药性的表达.
关键词： 柴胡 细胞内游离钙 Fura-2/AM Bel-7402细胞 P53 -
中药962对神经细胞内钙升高的血清药理学研究
目的:探讨中药复方962的小鼠血清制品(含药血清)对线粒体损伤造成的神经细胞内游离钙升高的影响及其作用机制.方法:用3-nitropropionic acid (3-NPA)和1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)造成胎鼠神经细胞内钙升高模型.用Fura-2/AM作细胞内钙的荧光指示剂,观察中药复方962的含药血清对神经细胞内游离钙升高的抑制作用,同时利用内钙释放剂Thapsigargin、外源性谷氨酸和KCl作工具药,对含药血清的作用环节进行分析.结果:不同剂量和不同处理时间的含药(962)血清对MPTP和3-NPA造成的神经细胞内钙增高都有明显的抑制作用,而且表现出良好的量效关系.在MPTP和3-NPA模型中,作用强的分别是给药 3 d 和 14 d 得到的血清.含药血清能抑制谷氨酸和KCl引起的细胞内钙增高,大剂量下对Thapsigargin造成的内钙升高也有抑制作用.结论:中药复方962对MPTP和3-NPA造成的神经细胞内钙增高有抑制作用,在两种模型中起效的主要成分份不同,可能分别为原药/早期代谢产物和后期代谢产物/活性因子.作用机制主要是抑制细胞外钙内流,大剂量对细胞内钙库的释放也有影响.
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黄芩苷对白色假丝酵母菌细胞内游离Ca2+的影响
目的 探讨黄芩苷对白色假丝酵母菌细胞内游离Ca2+的影响,为进一步研究黄芩苷抗白色假丝酵母菌作用机制提供依据.方法 采用Fura-2荧光探针技术检测黄芩苷对白色假丝酵母菌细胞内游离Ca2+浓度的影响.结果 1/4 MIC、1/2 MIC、1 MIC黄芩苷浓度组白色假丝酵母菌胞内游离Ca2+浓度明显高于未加药物组(P<0.05).且表现为黄芩苷浓度越高细胞内游离Ca2+浓度越高趋势;不同时间组间比较白色假丝酵母菌胞内游离Ca2+浓度差异显著(P<0.05),在6h～24h随时间延长,细胞内游离Ca2+浓度逐渐升高.但48h胞内游离Ca2+浓度反而下降.结论 黄芩苷在一定浓度范围内,能明显增加白色假丝酵母菌细胞内游离Ca2+含量.
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通脑灵对NMDA介导神经细胞内游离钙离子浓度的影响
目的:研究通脑灵对N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)介导的神经细胞内游离钙离子([LCa2土]I)浓度的影响.方法:应用标记示踪法,以Fura-2/AM为荧光指示剂观察通脑灵对NMDA介导的神经细胞内游离钙离子浓度的影响.结果:500μmol·L-1NMDA可使神经细胞内[Ca2+]明显增高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01).通脑灵可阻止NMDA介导的神经细胞内[Ca2+]I超载.结论:通脑灵通过抑制NMDA介导的钙离子超载而发挥对神经细胞的保护作用.
关键词： 通脑灵 N-甲基-D-门冬氨酸 钙 神经细胞 Fura-2/AM -
凝血酶对原代培养海马神经元游离钙浓度的影响
目的研究原代培养的海马神经元内游离Ca2+水平及凝血酶的影响.方法大鼠海马神经元进行体外原代培养,用钙离子指示剂Fura-2双波长法测定海马神经元内游离[Ca2+]i及不同浓度的凝血酶作用后细胞内[Ca2+]i.结果原代培养的海马神经元生长旺盛,密度高,符合实验要求.在胞外Ca2+浓度为0.0 mmol/L时,静息状态下海马神经元游离[Ca2+]i为(79.83±18.78)nmol/L.当胞外Ca2+浓度为1.3 mmol/L时,海马神经元游离[Ca2+]i为(106.41±22.53)nmo1/L.(1～40)U/ml凝血酶可使海马神经元内游离Ca2+水平显著升高,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).随凝血酶浓度的增加,胞内游离[Ca2+]i之呈剂量依赖性增加.结论凝血酶可使原代培养的海马神经元内游离Ca2+浓度明显升高.
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P物质对大鼠垂体前叶细胞游离Ca2+影响的研究
目的:探讨SP是否影响培养的大鼠AP细胞[Ca2+]i,在第二信使信息转导途径上进一步阐述SP产生生物学效应的机制.方法:原代培养成年雌性S-D大鼠的AP细胞48h,加入SP孵育不同时间,采用Fura-2/AM检测[Ca2+]i.结果:当SP浓度为100nmol/L,孵育时间由10min增加到30min时[Ca2+]i增加,但孵育时间为40min、50min时,[Ca2+]i呈现减少趋势,即大反应的孵育时间为30min.当孵育时间为20min、30min、40min、50min时.[Ca2+]i分别为211±16nmol/L、369±51nmol/L、358±24nmol/L、239士36 nmol/L,与10min(117±17nmol/L)相比较,呈显著性差异(P<0.05).结论:通过Fura-2/AM可精确反映[Ca2+]i,SP兴奋AP细胞SPR后可通过Ca2+来完成其部分的生物学效应,说明了SP对生殖轴(下丘脑-垂体前叶-卵巢/睾丸)有调控作用.
