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CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性
CD4+CD25+调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群,具有免疫无能和免疫抑制两大特性,通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4+CD25-T细胞的抑制作用.GVHD是异基因造血干细胞移植严重的并发症之一,近来有关CD4+CD25+调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论,即该类细胞可有效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比.这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路.本文就CD4+CD25+调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4+CD25+T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述.
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小鼠 B10细胞的分离、鉴定及功能特征
目的：评估小鼠不同组织中B10细胞的比例，分离B10细胞并鉴定其生物学功能，探讨其对效应性T细胞（ CD4＋CD25-T）及调节性T细胞（ Treg）的免疫调节机制。方法采用流式细胞仪检测小鼠不同组织来源B10细胞的表达以及脂多糖（ lipopolysaccharide ，LPS）对B10激活的影响；采用流式细胞分选术（ FACS）和免疫磁珠分选术（ MACS）分选B10细胞、CD4＋CD25-T 细胞和Treg；利用混合淋巴细胞培养实验观察B10对CFSE标记的CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞增殖的调节作用及机制。结果（1）脾脏CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞表达为（3．95±0．79）％，与外周血、肠系膜淋巴结和外周淋巴结相比较表达高，组间差异有统计学意义（P＜0．05）；脾脏CD19＋IL-10＋B细胞表达为（2．02±0．16）％，与外周血、肠系膜淋巴结和外周淋巴结相比较表达高（P＜0．05），且IL-10主要由CD1dhighCD5＋B细胞亚群分泌（P＜0．01）；（2） LPS联合乙酸佛波醇（PMA）、莫能菌素（monen-sin）和离子霉素（ionomycin）能活化B10细胞分泌IL-10。延长LPS的作用时间（48 h）能促进CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞高表达及IL-10分泌增加（P＜0．01）；（3） CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞在体外可抑制CD4＋CD25-T细胞增殖（P＜0．01）、促进CD4＋T细胞分泌IL-10（P＜0．01），同时可促进Treg增殖（P＜0．01）。结论 B10细胞在小鼠脾脏高表达，通过Toll样受体（TLR）信号通路被激活。活化的B10细胞具有免疫抑制性，可抑制CD4＋CD25-T细胞增殖，促进Treg增殖，其可能免疫调节机制是IL-10的释放增加。因此B10细胞有望为治疗多种自身免疫性疾病提供一种全新的治疗方法。
关键词： 调节性B细胞 IL-10 LPS CD4+CD25-T细胞 调节性T细胞 -
CD4+CD25-T细胞凋亡机制的研究
目的:探讨CD4+CD25-T细胞AICD发生的机制.方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25- T细胞.以CD3/CD28单克隆抗体活化BALB/c小鼠CD4+CD25-T细胞或以OVA323-339肽、抗原递呈细胞活化DO11.10小鼠CD4+CD25-T细胞两种方式建立AICD模型.基因芯片检测CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞凋亡相关基因的表达.流式细胞仪检测细胞的凋亡率.并观察FasL中和抗体、TRAIL中和抗体及zVAD-fmk对CD4+CD25-T细胞凋亡的影响.结果:MACS成功分离CD4+CD25-T细胞,纯度可达98%.建立了CD3/CD28抗体以及OVA特异性抗原活化的CD4+CD25-T细胞AICD模型,CD4+CD25-T细胞凋亡率达35%～40%.基因芯片分析发现CD4+CD25-T细胞相对高表达TRAIL、FAS,而CD4+CD25-T细胞相对高表达DR5、FasL.FasL、TRAIL中和抗体及zVAD-fmk可明显抑制CD4+CD25+T细胞的凋亡.结论:FasL、TRAIL及其它凋亡相关分子可能参与了CD4+CD25-T细胞的凋亡.
关键词： CD4+CD25-T细胞 AICD FasL TRAIL -
γ干扰素上调吉兰-巴雷综合征患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的研究
目的 探讨γ干扰素(IFN-γ)诱导吉兰-巴雷综合征(GBS)患者外周血CD4+CD25 T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞的可行性.方法 不同浓度IFN-γ刺激GBS患者外周血中的CD4+CD25 T细胞.Real-time PCR检测诱导CD4+CD25+调节性T细胞中FoxP3的表达,共培养检测其抑制功能;结果与健康人中天然的CD4+CD25+调节性T细胞比较.结果IFN-γ可诱导CD4+CD25 T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞.IFN-γ 40 ng·mL-1诱导的CD4+CD25+调节性T细胞中FoxP3表达含量高,但仍然低于天然的CD4+CD25+调节性T细胞;其抑制能力强,与天然的CD4+CD25+调节性T细胞比较差异无统计学意义.结论 IFN-γ可诱导GBS患者外周血CD4+CD25 T细胞转化为CD4+CD25+调节性T细胞,IFN-γ 40 ng·mL-1诱导的CD4+CD25+调节性T细胞表型和功能与天然的CD4+CD25+调节性T细胞相当.
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转染IκB激酶2的显性负性突变体的受者树突状细胞诱导产生的CD4+CD25-T细胞延长肾移植大鼠生存时间的研究
目的 探讨转染Adv-IκB激酶2的显性负性突变体(IKK2dn)基因并负载供者抗原的受者树突状细胞(DC)诱导产生的CD4+ CD25-T细胞回输是否延长同种异体肾移植大鼠的存活时间,并探讨其机制.方法 获取和培养受者Lewis大鼠骨髓源性DC,转染IKK2dn基因并负载BN大鼠可溶性抗原,与BN大鼠的T细胞初次混合淋巴细胞反应(MLR),72 h后采用免疫磁珠分选法筛选CD4+ CD25-T细胞.肾移植受者为Lewis大鼠,分为初始T细胞组、Adv0-CD4+T细胞组、CD4+CD25-T细胞组、排斥组,术前7d分别输注1×107个初始CD4+T细胞、Adv-0-DC诱导产生的CD4+ CD25-T细胞、Adv-IKK2dn-DC诱导产生的CD4+ CD25-T细胞和等量生理盐水,供者均为BN大鼠.另设第三方供者组,术前处理同治疗组,供者为Wistar大鼠.移植术后观察各组大鼠存活时间和发生排斥反应;测定受者T淋巴细胞增殖能力;检测血清白细胞介素(IL)-2、IL-10、γ-干扰素(IFN-γ)以及转化生长因子-β(TGF-β)表达水平;监测血肌酐(Cr)水平;病理学检查评定排斥级别.结果 CD4+ CD25-T细胞组肾移植大鼠生存时间为(28.50 ±2.36)d,较其他各组显著延长(P＜0.01);与其他各组比较,CD4+ CD25-T细胞组表达高水平IL-10和TGF-β(P＜0.05);与排斥组、Adv0-CD4+T细胞组、第三方供者组比较,CD4+ CD25-T细胞组低表达IL-2和IFN-γ(P＜0.05);CD4+ CD25-T细胞组T淋巴细胞的增殖能力明显低于其他4组(P＜0.05);病理学检查CD4+CD25-T细胞组发生排斥反应的病理级别较低.结论 转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者DC诱导产生的CD4+ CD25-T细胞回输可以延长同种异体肾移植大鼠生存时间,并具有针对供者的特异性,其机制可能与诱导的IL-10、TGF-β的高分泌有关.
关键词： 树突状细胞 IκB激酶2的显性负性突变体 CD4+CD25-T细胞 肾移植 大鼠 -
OLP外周血中CD4+CD25+T细胞体外增殖及对CD4+CD25-T细胞增殖的影响
目的:通过检测口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中CD4+CD25+T细胞的体外增殖及对CD4+CD25-T细胞增殖的影响,探讨调节性T细胞对OLP特异性细胞免疫的调节作用及其在该病发生中的意义.方法:通过免疫磁珠分离系统(MACS)分选OLP患者和健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和效应性T细胞(responder T cell,Tresp),采用流式细胞术检测其纯度、3H--脱氧胸腺嘧啶苷方法检测CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的影响,比较OLP患者和健康志愿者体内Treg细胞功能.结果:分选后健康对照组及OLP患者外周血中CD4+CD25+T细胞纯度均高于85％.无论是健康对照还是OLP患者的CD4+ CD25+T细胞均明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖.与健康对照组相比,OLP组CD4+ CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用显著降低(P＜0.01).结论:调节性T细胞可能通过抑制OLP特异性细胞免疫应答促进疾病的发生发展.
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人Foxp3基因真核载体的构建及在CD4+CD25-T细胞中的表达和功能
目的:构建人Foxp3基因的真核表达栽体并转染人CD4+CD2-T细胞,观察其在CD4-CD25-T细胞中的表达及功能.方法:构建人Foxp3基因pEGFP-N1真核表达栽体,经酶切及双向测序鉴定基因序列的正确性.通过电穿孔法将重组栽体转入人CD4+CD25-T细胞中,利用荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率,采用3H-TdR掺入法检测转染细胞对单个核细胞增殖能力的影响.结果:酶切及测序鉴定pEGFP-Nl-Foxp3重组质粒基因序列完全正确,转染的CD4+CD25-T细胞Foxp3阳性表达率为23.7%,并显著抑制了单个核细胞的增殖能力.结论:成功构建了pEGFP-N1-Foxp3真核表达栽体,并使转染的CD4+CD25-T细胞具有调节性T细胞的功能.
关键词： FOXP3 真核裁体 转染 CD4+CD25-T细胞 -
IL-7对诱导型Tregs表型及功能的影响
目的 初步探讨IL-7对C57BL/6小鼠脾细胞诱导CD4+CD25+调节T细胞(iTregs)的表型及功能的影响.方法 采用磁珠分选技术分选出小鼠CD4+CD25-T细胞,体外环境下给予anti-CD3、anti-CD28、TGF-β、IL-2和维甲酸共同诱导7d,生成CD4+CD25+调节T细胞(iTregs),流式细胞术分析经IL-7刺激24 h后iTreg的表型变化,同时用CFSE稀释法观察其对iTreg细胞抑制功能的影响.结果 CD4+CD25-T细胞通过anti-CD3、anti-CD28、TGF-β、IL-2和维甲酸共同作用,成功诱导为CD4+CD25+iTregs;通过10 ng/ml IL-7干预刺激,iTregs的CD39 (P=0.000 7)和CTLA-4(P=0.011 0)表面分子表达显著下降,iTregs凋亡显著增加(P=0.002 0),抑制功能显著减弱(P=0.001 3).结论 在高质量浓度IL-7的环境中,iTregs抑制功能明显下降且更易于凋亡,说明体外大量诱导的iTregs应用于高质量浓度IL-7机体中,可能是无法达到理想治疗效果的原因之一.
关键词： CD4+CD25-T细胞 iTregs IL-7 表型 抑制功能 -
TGF-β1在早孕妇女外周血和蜕膜组织中诱导生成T调节性(Treg)细胞
目的:研究TGF-β1是否能在人母-胎界面诱导生成T调节性(Treg)细胞.方法:早孕妇女外周血和蜕膜CD4+CD25T细胞中加入不同浓度的TGF-β1(0 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)分别于培养后第2日、第4日和第6日用流式细胞仪检测培养Foxp3的表达情况,随后将诱导生成的CD4+Foxp3+T细胞与CD8+T细胞混合培养,观察后者凋亡因子CD95配体(CD95L)的表达情况.结果:体外培养中,TGF-β1可诱导早孕妇女的外周血和蜕膜CD4+CD25 T细胞生成诱导性Treg细胞,随着培养时间增加而增强诱导效应,且在TGF-βl浓度为5 ng/ml时诱导功能强；诱导生成的CD4+Foxp3+T细胞具有促进效应细胞CD8+T细胞凋亡的功能.结论:体外培养中,TGF-β1能将人外周血和蜕膜诱导生成Treg细胞,且具有免疫抑制功能,有良好的免疫治疗前景.
