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携带人FL、GM-CSF基因的裸DNA的抑瘤作用
目的探讨可表达人FL和GM-CSF的裸DNA抑制小鼠移植肿瘤生长的作用.方法分别将带有信号肽序列的人FL和GM-CSF基因插入pcDNA3.1/zeo载体,构建分泌表达人FL和GM-CSF的治疗用表达载体,经Sephacryl S1000柱层析法纯化了重组表达质粒.用Western 印迹和ELISA法检测目的基因在293细胞中的表达,并用TF1细胞验证293细胞表达的GM-CSF的生物学活性.重组表达质粒与脂质体孵育形成复合物,隔天肌肉注射小鼠共6次,每只小鼠接种T细胞淋巴瘤细胞EL-4 2×105后,观察不同基因组合条件下肿瘤的生长情况.结果人FL和GM-CSF在293细胞中表达量分别为50 μg/L和30 μg/L,单用FL或GM-CSF和两者联用对肿瘤生长均有一定抑制作用,在第17天抑制率为30%~40%.联合应用组较单用FL或GM-CSF组更为有效抑制肿瘤生长,但小鼠生存时间并无延长.结论人FL和GM-CSF在293细胞中均获表达,且对肿瘤的早期生长具有一定的抑制作用,两者联合应用效果更为明显,但对小鼠终生存时间并无影响.
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鼻咽癌基因治疗研究的新进展
目的:总结鼻咽癌基因治疗研究进展,为临床治疗及基础研究提供参考.方法:在万方、中国知网、pubmed数据库检索近年关于鼻咽癌基因治疗的研究资料,并进行综合分析.结果:鼻咽癌基因治疗在基础研究方面取得满意的效果,在临床应用中副作用少、医从性好.具体方法有免疫基因治疗,自杀基因治疗,基因替代治疗,基因沉默治疗和反义基因治疗.结论:基因治疗将成为鼻咽癌治疗的重要手段.
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人乳头瘤病毒16型E7基因修饰小鼠骨髓树突状细胞诱导的细胞免疫应答
利用人乳头瘤病毒16型E7(HPV16-E7)基因修饰小鼠骨髓树突状细胞(DC),探讨其修饰的DC是否能使机体产生特异性的免疫反应,为以DC为基础的主动性免疫基因治疗提供实验依据.
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胶质瘤的白细胞介素-4免疫基因治疗实验研究
胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤.本研究通过逆转录病毒载体将白细胞介素-4(IL-4)基因导入逆转录病毒包装细胞,注入到脑内荷瘤大鼠肿瘤组织中,观察其对胶质瘤的治疗作用.
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大肠癌细胞因子基因治疗的研究现状
大肠癌的免疫基因治疗作为手术和放化疗的辅助治疗手段有重要的意义.选择编码细胞因子或其受体为目的基因导入肿瘤细胞或免疫效应细胞,在肿瘤局部产生高分泌量的细胞因子,激活抗肿瘤免疫反应,使肿瘤的生长受到抑制或坏死消退,克服了直接给药的严重毒副作用.将肿瘤特异性转录调控序列(如启动子或增强子)与细胞因子基因连接并转染细胞,驱动的目的基因,增强基因治疗的靶向性,做到有的放矢,可达到特异性治疗的目的.常见用于大肠癌基因治疗的细胞因子基因有IFN(干扰素)基因、TNF(肿瘤坏死因子)基因、IL(白介素)基因家族、CSF(集落刺激因子)基因家族、IGFR(胰岛素样生长因子受体)基因等.将多种基因联合应用,或细胞因子基因与其他治疗手段相联合可以提高抗肿瘤效应,减少毒性
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针对端粒酶蛋白催化亚单位的肿瘤免疫治疗研究
端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)相对分子质量Mr 127000,包含1132个氨基酸,其基因位于5号染色体短臂的末端(5p15.33),在90%以上的人类肿瘤中高表达,而正常成熟组织中则基本没有表达,可作为广谱的抗肿瘤治疗分子靶点.DC是已知体内激活静息T细胞功能强的专职抗原递呈细胞,经DC递呈hTERT抗原表位信息后,CTL能识别从hTERT提取的多肽表位,并在体外杀伤多种组织来源的hTERT阳性的肿瘤细胞.因此hTERT是迄今发现的一个具应用前景的肿瘤广谱相关抗原,针对hTERT的肿瘤免疫基因治疗有可能成为肿瘤免疫治疗的又一研究热点.
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大肠癌的基因治疗
大肠癌(colorectal cancer,CRC)是威胁人类生存的恶性肿瘤之一.由于大肠癌比较适于基因治疗,因此他是目前大肠癌研究的热点问题之一.基因治疗主要包括自杀基因治疗,与原癌基因和抑癌基因有关的基因治疗,免疫基因治疗和联合治疗等.有些研究已经进入临床试验阶段.本文介绍了大肠癌的基因治疗研究进展和存在的问题,为今后的医疗科研工作提供新的思路.
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胰腺癌等肿瘤的免疫治疗
胰腺癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,早期诊断率和手术切除率均较低,预后差,因此,开展胰腺癌基因免疫治疗研究具有特殊意义,特别是多基因转染胰腺癌形成的特异性胰腺癌瘤苗对胰腺癌的治疗,免疫基因治疗主要是有效地增强机体自身的抗肿瘤作用、清除术后残留肿瘤细胞、修复肿瘤突变基因.目前肿瘤基因治疗常用的策略有:细胞因子导入,肿瘤疫苗制备,自杀基因治疗,利用反义寡核苷酸技术封闭活化癌基因以及向靶组织转移抑癌基因等.现就wtP53、GM-CSF、B7-1对胰腺癌和相关肿瘤的基因免疫治疗作用进行综述.
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肿瘤免疫基因治疗的应用研究进展
随着生物技术的发展,对恶性肿瘤进行免疫基因治疗已成为研究热点.免疫基因治疗是一种新的肿瘤治疗模式,部分已经进入临床应用阶段,并取得了明显的治疗效果.本文综述了近年来在肿瘤免疫基因治疗研究及临床应用领域所取得的进展.
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骨肉瘤基因治疗研究进展
骨肉瘤是一种临床常见恶性骨肿瘤, 约占所有骨肿瘤的20%.其恶性程度高,好发于青少年,易复发和转移,预后较差.随着分子生物学理论和技术水平的提高, 尤其是肿瘤分子生物学的发展, 骨肉瘤的发生机制在分子水平有了一定的认识.目前,人们针对骨肉瘤及其肺转移已研究开展了免疫基因治疗、反义基因治疗、抑癌基因治疗、自杀基因治疗及其联合基因治疗或联合其他方法的治疗等诸多基辅前景的肿瘤基因治疗方法,现综述如下.
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鼻咽癌免疫治疗的研究进展
鼻咽癌多选择以放疗、放化疗为主的综合治疗模式.随着调强放疗联合化疗在鼻咽癌综合治疗模式中的推广应用,鼻咽癌的局部控制率和生存率得到改善,远处转移成为治疗失败的主要原因.近年来,免疫治疗在恶性肿瘤的研究和应用中取得了明显的进步,并逐渐成为肿瘤综合治疗领域的焦点,在多种恶性肿瘤的治疗中都显示出潜在的疗效和良好的发展前景.免疫治疗具有疗效高、特异性强、不良反应小等优点,有望为鼻咽癌患者的治疗提供新的选择.
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头颈癌的免疫基因治疗
在过去20年,晚期头颈肿瘤患者的预后并没有得到明显改善,尽管使用常规方法如手术、放疗和化疗共同努力优化治疗方法.根据对肿瘤发生的分子变化的越来越多的理解,新的治疗方法有可能改变这种情况.基因治疗涉及到为了治疗目的 将基因序列递送到肿瘤细胞或正常细胞,这些治疗基因通过修正存在的遗传异常,恢复免疫系统间接或直接杀死细胞来发挥作用.免疫基因治疗为头颈癌的治疗带来了希望.有些治疗方案已进入临床试用阶段,包括细胞因子基因治疗、肿瘤抗原靶向的基因治疗、共刺激分子基因治疗、主要组织相客性复合体靶向的基因治疗及反义基因治疗等.在本综述讨论了头颈癌的免疫基因治疗进展.
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分泌mRANTES趋化因子的小鼠肝癌细胞的建立及其体内致瘤性的初步研究
目的:建立分泌mRANTES的小鼠肝癌细胞,并观察其体内致瘤性.方法:mRANTES cDNA被克隆入pBabe puro逆转录病毒载体,构建的重组逆转录病毒载体pBabe puro mRANTES转染包装细胞,嘌呤酶素抗性细胞培养上清感染小鼠肝癌细胞系Hepa1-6,免疫组化检测Hepa1-6、Hepa1-6 mRANTES的mRANTES蛋白的表达.绘制Hepa1-6 mRANTES与Hepa1-6的生长曲线观察细胞的生长.琼脂糖凝胶打孔法体外观察Hepa1-6 mRANTES分泌蛋白对小鼠脾细胞的趋化作用.观察Hepa1-6 mRANTES体内致瘤性.结果:构建了重组逆转录病毒载体pBabe puro mRANTES,Hepa1-6不表达mRANTES,Hepa1-6 mRANTES表达mRANTES蛋白.Hepa1-6 mRANTES与Hepa1-6的生长曲线基本一样.Hepa1-6 mRANTES分泌了对小鼠脾细胞有趋化作用的分子.Hepa1-6mRANTES体内致瘤性降低.结论:Hepa1-6 mRANTES能产生mRANTES,mRANTES不改变细胞体外生长状况,Hepa1-6 mRANTES产生的mRANTES有趋化活性,mRANTES能使Hepa1-6 mRANTES致瘤性降低.
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IL-2基因转染联合CTL杀伤肝癌细胞的体外试验研究
目的 通过研究白细胞介素-2(IL-2)基因转染联合特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对人肝癌细胞(HepG2)的体外杀伤试验,探讨一种肝癌的免疫基因治疗方法.方法 采用多聚阳离子脂质体作载体,将IL-2基因转染至HepG2细胞,通过检测IL-2浓度变化,观察转染效率.用MTT法检测其联合特异性CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用.结果 转染IL-2基因至HepG2细胞的体外佳转染比例为5:1,其可持续分泌IL-230d,分泌高峰在转染后第2~3天.联合特异性CTL细胞,对HepG2细胞显示明显的协同杀伤效应.结论 经转染IL-2基因后,HepG2细胞分泌IL-2可达30d,可以有效地维持特异性CTL细胞的活力,两者联合,对杀伤肝癌细胞有明显的协同效应.
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乳腺癌的基因治疗
乳腺癌的基因治疗是继手术、放疗、化疗和内分泌治疗之后发展的一种新的治疗手段.近年来,由于对肿瘤分子病理学的认识、重组DNA技术的快速发展,针对肿瘤的基因治疗应用于临床已有可行性.目前对乳腺癌的基因治疗主要集中在免疫基因治疗、肿瘤抑癌基因治疗、凋亡基因治疗、化学基因治疗、基因敲除基因治疗和抗血管生成基因治疗.
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肿瘤的免疫基因治疗研究进展
长期以来,手术、放疗和化疗等疗法的研究进展使恶性肿瘤的疗效有了明显的提高,但这些治疗手段并非对所有的肿瘤都有效,往往仅适应于某一类型肿瘤,且有的伴有明显的副作用.因此,寻找一种损伤小又能有效控制肿瘤生长和转移的治疗方法已成为临床肿瘤治疗的迫切需要.随着分子生物学技术的不断完善及各个相关领域研究的不断深入,基因治疗已经从初始阶段逐渐向一个有效而安全的时期过渡.目前所开展的肿瘤基因治疗中,以免疫学原理为基础、免疫学技术为方法而建立起来的肿瘤免疫基因治疗的研究为多.本文就肿瘤免疫基因治疗领域中研究较为集中的几个方面作一简要介绍.
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胰腺癌标志物及免疫基因治疗的研究现状
近年来,随着肿瘤免疫机制及分子生物学研究的深入,对抗肿瘤免疫应答、细胞增殖、癌变、转移以及癌基因和抑癌基因之间的作用机制认识的进一步加深,许多早期诊断胰腺癌的血清及基因标志物已相继发现,同时,在胰腺癌的免疫基因治疗上也有了新的进展.
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肝癌基因治疗的发展趋势及其思考
1 肝癌基因治疗的策略按作用机制的不同,肝癌的基因治疗可分为反义基因治疗、抗癌基因治疗、免疫基因治疗及药物基因治疗.
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前列腺癌的免疫基因治疗研究进展
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一,死亡率高,据统计,仅在美国每年有31 900人死于前列腺癌[1].目前,用于前列腺癌治疗的方法主要有手术、放疗、化疗和激素疗法,这些方法虽然对早期前列腺癌能有效治疗,但是对晚期、转移性或激素非依赖性的患者上述方法也常无能为力,寻找新的治疗方法迫在眉睫.免疫基因治疗是一种新兴的治疗方法,是在免疫学原理的基础上,以免疫学技术结合分子生物学技术而建立起来的基因治疗方案.肿瘤的免疫基因治疗尚处于实验性研究阶段,应用途径有两大类,一是间接体内应用的方法,例如将体外基因转染的抗原提呈细胞再行体内回输或接种治疗法等.
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腺病毒介导人FL与GM-CSF联合抗肿瘤免疫基因治疗实验研究
目的:研究腺病毒介导人Flt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应.方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF.采用ELISA、Western blot法测定重组腺病毒介导的hFL和hGM-CSF在体内外的表达情况.MTT法测定hFL和hGM-CSF刺激细胞增殖的生物学活性.利用流式细胞分析技术研究重组腺病毒对小鼠脾脏树突状细胞(DCs)的扩增情况.在移植EL-4淋巴瘤的小鼠皮下注射4次重组腺病毒(每次5×109 pfu),研究其抑制肿瘤生长的功能.结果:构建得到含有双基因的重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF,并在体内、外高效共表达hFL和hGM-CSF.hFL对小鼠骨髓有核细胞,hGM-CSF对TF1细胞,均有明显的刺激增殖作用.Ad-hFL-hGM-CSF显著扩增小鼠脾脏DCs至正常值的50倍.抑瘤实验中,Ad-hFL-hGM-CSF使小鼠EL-4淋巴瘤生长延慢,瘤体比对照组明显减小,抑瘤率为30%,P<0.05.病理切片显示,Ad-hFL-hGM-CSF治疗组肿瘤细胞间隙有大量淋巴细胞浸润.结论:腺病毒介导hFL和hGM-CSF在小鼠体内显著扩增脾脏DCs,并可抑制EL-4淋巴瘤的生长.