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深圳市1998~1999年流行性感冒病毒监测
流行性感冒(流感)是一种具有严重危害的病毒性急性呼吸道传染病。为及时准确地监测流感病毒变异株,探索变异规律,将1998~1999年深圳市流感病毒监测结果报道如下。 1.材料与方法:每周分别从深圳市两家定点监测医院采集发热38℃以上的类流感患者咽拭子标本,按常规处理后,置-70℃冰箱保存待进行病毒分离。病毒分离采用鸡胚双腔法和MDCK传代细胞两个接种途径。凝集血球用1%人O型红细胞悬液。病毒鉴定用常量半加敏血凝抑制试验(HI)进行,抗体测定用微量半加敏血凝抑制试验进行,测定抗原为:A/京防/262/95(H1N1)、A/沪防/1/98(H3N2)、B/京防/184/93。 2.结果: (1)流感病毒分离概况:1998年检测标本2 300份,分离流感病毒40株,分离率为1.74%;1999年检测标本1 187份,分离流感病毒70株,分离率为5.90%。1998年与1999年分离率差异具有统计学意义(χ2=44.31,P<0.001)。
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人眼球后和其它部位成纤维细胞的差异
研究表明,眼球后成纤维细胞活性增强在Graves眼病(Graves ophthalmopathy,GO)的发生中起重要作用。但是成纤维细胞具有多相性,不同部位成纤维细胞在相应部位疾病的发病中所起的作用不同。本文选用人眼球后和腹部皮肤成纤维细胞进行这方面的研究,初步探讨两种成纤维细胞在结构和功能方面的某些差异。 1 材料与方法 眼外肌(部分)及周围结缔组织取自一位22岁因眼外斜视手术的男性病人;腹部皮肤组织块取自一位9岁因脂肪瘤手术的男性儿童,患者均无自身免疫性疾病史。按照Bahn方法,进行原代和传代细胞培养。实验中为防止传代细胞某些功能发生较大变化,仅选用3~10代的细胞。在培养的两种成纤维细胞内(球后和皮肤成纤维细胞浓度各为6×104和4×104个cell/mL),分别加入不同药物,同时设不加药物的阴性对照,每个浓度设3或4个复孔。适时加入3H-TdR,后测定每分钟计数值。
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应用Vero细胞制备狂犬病疫苗适条件的研究
我国目前用于预防狂犬病的主要是地鼠肾细胞疫苗,其产量和质量尚不能满足防病、灭病的需要.Vero细胞经WHO检定合格并推荐作为生产人用灭活狂犬病疫苗的传代细胞,不仅来源方便,繁殖速度快,维持时间长,容易控制外源因子污染,而且对狂犬病毒敏感,适合大规模生产.为此,我们对狂犬病毒在Vero细胞上传代的适条件进行了研究.
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培养细胞污染支原体的PCR检测方法的建立及应用
在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色;用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等[1].然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量.污染细胞常见的支原体包括:发醉支原体(M.fementans)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginina)、梨支原体(M.pirum)、唾液支原体(M.salivarium)和人型支原体(M.hominis)[2-3].被这些支原体污染的细胞常常不引起明显的细胞病变,也不导致培养液浑浊,难以凭肉眼发现,因此,建立一种高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要.
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生物技术药物中宿主DNA残留Q-PCR检测法的方法验证
自20世纪50年代,用于生产生物技术药物的细胞基质一直因其安全性而备受关注,生产用基质细胞经历了从原代细胞,二倍体细胞到传代细胞的发展历程,人们对其潜在风险的认识也在不断变化。虽然,至今没有因为生物制品中 DNA残留量而引发不良反应或安全事故,但其用量随着临床治疗的需求越来越大,需要长期反复用药的生物制品也越来越多,同时,疫苗的使用者为健康人群,这些都使得药品监管部门更加重视生物技术产品的安全性,其中 DNA残留量的质量控制一直是人们关注的热点。几十年来对于残余 DNA问题的争论一直在继续,有的观点认为应将残余 DNA作为一种重要危险因素[1],也有人倾向于将残余 DNA作为一般杂质控制。各国研究机构围绕着残余 DNA问题都做了大量的工作,国内外也有很多有关细胞基质及残余 DNA的文献和技术指南发表[2-4]。但根据现有研究结果,现在认为应将其视为一般杂质,并控制其在生物制品中的含量达到纯化工艺可控制的低量。
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双黄连抑制流感病毒诱导MDCK细胞程序化死亡的研究
研究显示,流感病毒在体内可诱导人体的呼吸道上皮细胞凋亡,在体外使宫颈癌细胞(Hela)和狗肾传代细胞(MDCK)凋亡[1,2].近来报道抗流感病毒药物可抑制流感病毒诱导感染细胞凋亡[3].但双黄连是否可抑制流感病毒诱导MDCK细胞凋亡少有报道.我们自2005年7月至2008年6月采用Annexin V及碘化丙啶(PI)双染并应用流式细胞仪检测双黄连对流感病毒诱导MKCK细胞凋亡的影响,报告如下.
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小儿传染性单核细胞增多症
Epstein Burr病毒,简称EB病毒(EBV),属于疱疹病毒,γ亚科,是已知的8个人类疱疹病毒之一.自1964年由Epstein,Achong和Barr首次在建立的伯基特(Burkitt)淋巴瘤细胞株中发现、体外传代细胞中发现EBV以来,已有多种疾病被证实与EBV感染有关.
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微囊藻毒素-LR对传代细胞的毒性
目的从多种传代细胞株中,筛选对微囊藻毒素-LR敏感的细胞株,探讨建立经济、简便研究该毒素传代细胞模型的可能性.方法不同宿主来源的8种细胞株(KB细胞,NIH/3T3细胞,H-4-Ⅱ-E细胞,Hela细胞,Vero细胞,Hep G2细胞,Caco-2细胞,HL-60细胞)与不同浓度的微囊藻毒素-LR作用,细胞培养24,48,72,96h后观察其形态学变化,利用体外细胞法(MTT)测定其细胞毒性终点(判断细胞活性)及乳酸脱氢酶试验测定细胞膜受损情况.结果8种细胞株中,KB细胞和H-4-Ⅱ-E细胞在培养96 h,毒素浓度大于18.8 μg/ml时,呈现明显剂量-反应关系.KB细胞与毒素接触8 h后就有显著的形态学改变,其实验结果的重现性和稳定性非常好;乳酸脱氢酶试验显示微囊藻毒素-LR可导致KB细胞膜损伤.结论微囊藻毒素-LR对KB细胞和H-4-Ⅱ-E细胞有明显的细胞毒性作用.从形态学变化、试验结果的重现性、稳定性和敏感性考虑,KB细胞可用作研究该毒素的传代细胞模型.
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电镜技术快速检测培养细胞污染的应用
目的:细胞培养中污染不可避免,应用电镜技术检测传代细胞中的细菌污染,既快速又准确.方法:利用电镜,根据细菌的形态及其鞭毛、噬菌体等指标的其中一项判定细菌的污染.结果:该检测结果为传代细胞的应用提供了可靠地保证.
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增殖型血管平滑肌细胞模型的培养改良
以往使用的血管平滑肌细胞(VSMC)模型是直接用正常血管贴壁培养传代细胞,并认为传至第5代以后即为分泌型[1].但我们通过检测特异性表型表达基因SM22α发现,按以往传代培养的VSMC仍有表达.
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流行性出血热30例的血清学检测
为确定江西地区流行性出血热(EHF),病原我们收集了南昌市(郊)、南昌、新建、半城、临川、余江、东乡等县,自1981~1983年3年来EHlF患者30例初期和恢复期血清42份,与安微省分离的EHlF病毒(陈株)人肺癌传代细胞(A一549)抗原进行间接免疫荧光试验Ⅲ,获特异性反应阳性结果.
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从单核细胞中分离流行性出血热病毒
自1978年以来,国内外先后以A549细胞和Vero传代细胞从疫区鼠肺和患者血中分离得到病原[1-4].本研究系用Vero细胞从陕西省冬季散发型流行高峰期的流行性出血热(EHF)患者血清和单核白细胞(包括单核细胞和淋巴细胞)中分离得到EHF病毒.
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EB病毒感染相关性疾病
EB病毒(EBV)是已知的8个人类疱疹病毒之一.自1958年 Burkitt首次报道 Burkitt淋巴瘤及1964年Epstein和 Barr在Burkitt淋巴瘤标本的体外传代细胞中发现EBV以来,已有多种疾病被证实与EBV感染有关,现综述如下.
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皮肤科学基础
20120001 人原代表皮干细胞及其传代细胞生物学特性的比较/王元元(三军大大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆市创伤愈合与组织工程研究所),杨桂红,杨涛…//第三军医大学学报.-2011,33(1).-24 ~27选择2009年5 -12月在该科医学美容门诊行包皮环切术后的包皮标本共20例,从包皮标本获得人原代表皮干细胞,利用0.25%胰蛋白酶冷消化4h获得传代细胞,利用CASY系统计数后计算细胞的黏附率,倒置相差显微镜下观察原代干细胞及传代细胞的形态学变化,观察干细胞表面标志物整合素β1和CK19,细胞分化的表面标志物CK10的表达,以及各代细胞基因组的表达差异.结果:原代干细胞的黏附率为(55.44±2.42)%,随着传代次数的增加,2代、4代及6代细胞的黏附率分别为(44.30±2.76)%,(30.95±2.24)%和(20.64±1.37)%,与原代细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05).细胞生长融合时间随着传代次数而增加.各代细胞均表达整合素β1;原代、2代及4代细胞表达CK19,但6代细胞不表达CK19;部分6代细胞表达CK10.原代及4代细胞基因组比较结果相近,但与6代细胞结果差异较大.提示与原代干细胞相比,体外培养的人表皮干细胞在4代以后生物学特性发生改变,体外实验宜选用4代以前的细胞.
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四种动物传代细胞染色体遗传变异率分析
目的分析制苗用传代细胞染色体的变异稳定性,以判定其质量. 方法采用直接法制取传代细胞染色体标本,用常规Giemsa染色,1000倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目,求出染色体变异率(%),并进行核型分析. 结果 F81为亚二倍体细胞系,染色体众数为30;Vero是超二倍体细胞系,染色体众数为73~75;MDCK属于亚四倍体细胞系,染色体众数为125~135. BHK21为亚二倍体或亚四倍体细胞系,亚二倍体众数为42,亚四倍体细胞众数为72~74. 四种细胞系的染色体畸变率为0%~6%,均较低. 结论四种传代细胞遗传学特性相对稳定,各代次间无本质差异,可候选为制苗用细胞.