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造血干细胞基因治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究
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囊内法行甲状腺切除122例的经验
甲状腺切除术囊内技术(capsular technique)的出现,使喉返神经损伤和永久性甲状旁腺功能低下症的发生大大减少.我院自1996年7月至2003年6月,应用囊内技术实施甲状腺单侧或双侧次全切除122例,未发生永久性甲状旁腺、喉返神经和喉上神经损伤,现报告如下.
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前甲状旁腺激素原基因定点突变后转染体细胞产生甲状旁腺激素的实验研究
目的研究对前甲状腺激素原基因进行定点突变,并转染体细胞产生成熟甲状旁腺激素.方法采用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术,自组织基因组基因中扩增前甲状旁腺激素原的cDNA,并将野生型甲状旁腺激素编码第28位的密码子GTT突变为AGA,使N端28-31氨基酸变为Arg-Lys-Lys-Arg,成为furin酶的酶切位点;将获得的突变表达载体pcDNA3.1/mPTH通过脂质体法转染体外培养的293细胞,用放射免疫法测定表达水平.结果成功地获得突变型甲状旁腺激素原cDNA,293细胞转染突变表达载体后,每日培养液中甲状旁腺激素含量达28.34~52.64 pg/2.0×106细胞,远高于空载体转染的细胞培养液.结论利用PCR技术可获得突变型甲状旁腺激素原的cDNA,突变表达载体pcDNA3.1/mPTH能成功转染体细胞并产生甲状旁腺激素.
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人甲状旁腺激素基因体外表达的研究
甲状旁腺激素(PTH)是保持体内血钙及磷酸盐自身稳定的主要调节因子[1,2].甲状旁腺疾病可导致PTH分泌不足或生物活性的降低,造成低钙血症即甲状旁腺功能低下症(HPT).目前,国内外对HPT的治疗效果不甚理想[1,2].
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带甲状腺的甲状旁腺移植术
我院1995年8月~1997年10月,应用同种异体带甲状腺的甲状旁腺移植术治疗甲状旁腺功能低下症6例,初步观察效果显著,报告如下.
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甲状旁腺功能低下症治疗的现状和趋势
甲状腺手术时造成甲状旁腺(parathyroid gland,PTG)损伤、甲状旁腺炎症、肿瘤或遗传缺陷均可引起甲状旁腺功能低下即甲状旁腺功能低下症(hypoparathyroidism,HPT),导致甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)分泌不足或活性降低[1,2].患者主要表现为PTH降低或测不出、低血钙、高血磷、神经肌肉兴奋性增高.轻者可出现手足麻木、易激动、烦躁,重者可出现四肢抽搐,甚至影响呼吸功能、威胁生命[3].目前内科治疗主要是对症治疗,如应用钙剂、PTH、维生素D制剂、维生素D2(骨化醇)、维生素D3(胆骨化醇)、浓鱼肝油、二氢速固醇等.这些药物虽能暂时缓解症状,但均不能取得长期疗效,不能根本解决问题.自1908年Willian首先进行PTG移植以来,PTG移植技术发展迅猛,目前国内外许多医院都在开展对此种治疗方法的探索,取得了良好的近期效果,并已试用于临床[4].
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甲状旁腺功能低下症基因治疗中重组表达体系pCKM-mPTH质粒的构建与表达
目的研究构建重组表达体系pCKM-mPTH质粒,寻找甲状旁腺功能低下症的基因治疗途径. 方法采用重叠聚合酶链反应(PCR)法、巢式PCR法及粘端连接法构建pCKM-mPTH质粒,以脂质体转染骨骼肌细胞,用β-actin半定量和放免法分别测定其在细胞内外的表达. 结果嵌合基因 pCKM-mPTH质粒测序完全符合已知核苷酸序列,并完成定点突变,转染骨骼肌细胞后,β-actin半定量法测得mPTH在细胞内成功高效表达,放免法测得24h克隆细胞培养液中甲状旁腺激素蛋白的含量为26.37ng/L. 结论成功构建了SD(Sprague Dawley)大鼠重组基因表达体系pCKM-mPTH质粒,并证实其在骨骼肌细胞中有高效表达.
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甲状旁腺功能低下症治疗中几个问题的商榷
甲状旁腺功能低下症越来越常见,对该病的认识和对治疗的思考历经了几个阶段.在治疗方法的选择中,对矛盾的研究和解决反映出相应的哲学思想,体现出创新是继承和发展的辩证统一.在科学研究中,要善于应用哲学思想来指导实际工作,以达到事半功倍的效果.只有重点加强这方面的教育,才能培养出新世纪的合格医学人才.
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带血管蒂甲状腺甲状旁腺胸腺联合移植术
目的探讨联合移植甲状腺甲状旁腺及胸腺治疗甲状腺癌根治术后甲状旁腺功能低下症及预防甲状腺癌复发.方法将带血管蒂甲状腺甲状旁腺及胸腺整块移植给甲状腺癌根治术后继发甲状旁腺功能低下症的患者,观察移植物存活、临床效果及T细胞亚群变化.结果移植后患者的钙剂用量有所减少,临床症状有所改善.移植物血流良好.血钙及甲状旁腺素水平有所变化,但未恢复正常.CD3,CD4/CD8比值升高.结论带血管蒂甲状腺甲状旁腺胸腺联合移植近期可以改善甲状旁腺功能低下症患者的临床症状,远期疗效及抑制甲状腺癌复发的作用尚需长期观察.
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甲状旁腺功能低下症治疗现状
甲状腺手术时造成甲状旁腺损伤、甲状旁腺的炎症、肿瘤或遗传缺陷均可引起甲状旁腺功能低下即甲状旁腺功能低下症(HPT),导致甲状旁腺激素(PTH)分泌不足或该激素活性降低[1,2].患者主要表现为PTH减少或测不出、低血钙、高血磷、神经肌肉兴奋性增高.该病轻者手足麻木、易激动、烦躁,重者四肢抽搐,更严重者影响呼吸功能、威胁生命[3].目前内科治疗主要是对症治疗,如应用钙剂、PTH、维生素D制剂、维生素D2(骨化醇)、维生素D3(胆骨化醇)、浓鱼肝油、二氢速固醇等.这些药物虽能暂时缓解症状,但均不能取得长期疗效,副作用也较大.自1908年Willian首先进行PTH移植以来,PTH移植技术发展迅猛,近2年来国内采用异体胎儿甲状旁腺移植治疗HPT,取得了良好的近期效果,已试用于临床[4].
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当归四逆汤加减治疗疑难病举隅
笔者多年来一直尊崇仲师用方法度,善用当归四逆汤加减治疗疑难病症,多有收获.现将典型病例报告如下. 1雷诺氏病宋某,女,28岁,1999年12月27日初诊.主诉上肢端间歇苍白、紫绀、潮红反复发作2 a余,曾经甲皱微循环检查及激发试验诊为"雷诺氏病".近3月来症状加重,每次发作两手指皮肤先苍白,继而发绀波及手掌,局部麻木冷痛,发作持续10~12 min,常将双手浸入温水中方可缓解,皮肤由青紫到潮红伴烧灼、刺痛感,然后转为正常色泽.经用交感神经阻滞剂及其他血管扩张剂治疗,症状改善不著.诊其脉象细涩,舌质暗红,边尖有瘀点,苔白.
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阿法维生素D3在治疗甲状旁腺功能低下症中的应用
甲状旁腺分泌的甲状旁腺素在机体内参与钙、磷的吸收和骨化,缺乏甲状旁腺素的患者,其肠道吸收钙、磷的作用下降,血钙,血磷的浓度在阈值以下,进而影响到骨的钙、磷化,其主要症状表现在骨钙丢失,造成骨质疏松,重症患者肌肉强直性收缩,头向后仰,手如鸡爪状弯曲,腿脚强直,不能行走.
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并纤维囊性骨炎的假性甲状旁腺功能低下症误诊1例
患儿,女,6岁,因近0.5年右侧肢体发作性无力、摔倒就诊.患儿从小反应慢,四肢无力,扶楼梯上楼,至今不能独自爬上床.近0.5年来右侧肢体发作性无力、摔倒,持续10 min 左右自行缓解,发作时无意识障碍,不伴大小便失禁.
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甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下症
目的观察甲状旁腺激素(PTH)基因和蛋白体外表达情况,并评价其基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠的作用.方法(1)以脂质体将质粒pcDPG分别1次和多次转染293细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染率;(2)转染24、48、72和96 h后real-time定量PCR和Western blot法检测PTH基因与蛋白表达,并活性鉴定;(3)建立甲状旁腺功能低下症模型,将pcDPG质粒多次肌肉注射治疗,监测血钙和PTH值、存活时间及各器官病理变化.结果转染后24 h即见GFP表达,72 h达高峰,96 h开始减少;多次转染后GFP表达率可达90%以上;PTH cD-NA拷贝数转染24 h为5×103,72 h达高为8×104,多次转染显著增高(P<0.01);Western blot 见48 h和72 h有PTH蛋白表达,其可对抗甲状旁腺切除小鼠抽搐症状;术后第2天血钙与PTH明显低于术前(P<0.05),pcDPG质粒大、中剂量组连续治疗48 h后血钙与PTH值均恢复正常.结论重组PTH基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠有较好的疗效.
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小鼠胚胎干细胞转基因治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究
目的探讨小鼠胚胎干细胞(TC-1)转基因治疗甲状旁腺功能低下症(HPT).方法包装出重组人甲状旁腺素(PTH)基因的小鼠干细胞病毒(MSCV),以其感染小鼠ESCs,检测基因转导效率,PTH分泌情况;观察体内外分化情况,以及注入模型鼠体内各组小鼠血PTH和血钙变化情况.结果获得滴度为2×107集落形成单位(CFU)/ml的重组逆转录病毒,经聚合酶链反应(PCR)扩增未检测到有野生型病毒存在,可以安全应用.感染TC-1的效率为70%,每106未分化TC-1每48 h分泌PTH约10 ng.重组有PTH基因的TC-1在体内外均可分化出三胚层组织,注入模型鼠体内,在观察期间实验组动物未再出现甲旁低表现,而且血PTH和血钙均保持在接近正常值范围内.结论 MSCV介导外源PTH基因可高效转导TC-1并持续分泌PTH;体内外分化实验证明TC-1具有全能性,而且内环境并不是决定TC-1分化的唯一因素.经基因转导的TC-1可较好的改善模型鼠的症状,是未来细胞移植的一种潜在来源.
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pcDAN3.1·PTH治疗甲状旁腺功能低下症血钙变化
目的研究pcDAN3.1·PTH治疗甲状旁腺功能低下症时血钙的变化及血钙与pcDAN3.1·PTH剂量的关系.方法手术去掉家兔甲状旁腺,建立甲状旁腺功能低下症模型.将已构建的人甲状旁腺激素基因pcDAN3.1 PTH以100,300,500μg/ml剂量注射模型家兔的骨骼肌内,测定注射后不同时间的血钙.结果注射pcDAN3.1·PTH后24 h时模型家兔的血钙升高,7 d达高峰水平,并持续2个月,以300μg/ml和500μg/ml为佳.结论人甲状腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下是有效的,且以3μg/ml和500μg/ml为佳剂量.
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pcDNA3.1*PTH治疗甲状旁腺功能低下症血液甲状旁腺激素变化
目的研究pcDNA3.1·PTH 治疗甲状旁腺功能低下症时PTH的变化及PTH与pcDNA3.1·PTH剂量的关系.方法手术去掉家兔甲状旁腺,建立甲状旁腺功能低下症模型.将已构建的人甲状旁腺激素基因pcDNA3.1·PTH 以100μg/ml、300μg/ml、500μg/ml剂量注射模型家兔的骨骼肌内,测定注射后不同时间的血液PTH.结果注射pcDNA3.1·PTH 后24h模型家兔的PTH升高,7d达高峰水平,并持续2个月,以300μg/ml和500μg/ml为佳.结论人甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下是有效的,且以300μg/ml和500μg/ml为佳剂量.
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甲状旁腺瘤组织同种移植治疗甲状旁腺功能低下症初步报告
目的为甲状旁腺移植的供体来源提供一种新途径.方法将甲状旁腺瘤组织用6Gy60钴照射后,切成0.5mm×0.5mm×0.5mm~1.0mm×1.0mm×1.0mm薄片,植入裸鼠肾包膜下过渡14 d,移植给甲状旁腺功能低下症患者,受者术前1 d及术后14d服用环孢素A(5mg@kg-1@d-1),以后不用任何免疫抑制剂.术后观察临床症状、体征、治疗的钙剂及罗钙全剂量变化,检测血钙及血甲状旁腺激素,以确定移植效果.结果临床应用5例,其中3例术后不需静脉补钙,口服钙剂量及罗钙全剂量减少,血钙浓度基本恢复到正常值.结论甲状旁腺瘤组织为甲状旁腺移植提供了一种方便、易于获取的新的供体,且可移植给多个患者治疗.
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裸鼠过渡异体甲状旁腺移植的初步报道
目的探讨裸鼠过渡异体甲状旁腺移植的方法和效果. 方法取即死亡尸甲状旁腺,经深低温、60Co照射、裸鼠移植过渡等处理,治疗甲状旁腺功能低下症2例. 结果裸鼠过渡期10~15 d血清甲状旁腺分泌高,其中1例症状消失,效果为优,1例症状部分消失,效果为良. 结论裸鼠过渡异体甲状旁腺移植可以是治疗甲状旁腺功能低下症的的一种方法选择.
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微囊化兔甲状旁腺组织异种移植治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究
目的探讨不同部位微囊化兔甲状旁腺组织异种移植治疗大鼠甲状旁腺功能低下症的效果.方法应用微囊技术制备微囊化(海藻酸钠-钡生物微胶囊)兔甲状旁腺组织.16只去甲状旁腺的Wistar大鼠按完全随机法分为肾脂肪囊微囊组及腹腔微囊组,每组8只.分别于移植微囊化兔甲状旁腺组织后5、15、25、35、45、55及65 d检测血清钙含量,并于移植后第 65 d取移植物行透射电镜检查.结果移植后,肾脂肪囊微囊组大鼠血清钙水平恢复到正常范围直至观察结束时,透射电镜检查显示移植物存活良好; 腹腔微囊组大鼠血清钙水平恢复到正常范围,但第65 d时血清钙水平下降至<1.6 mmol/L,透射电镜检查显示移植物中心坏死,仅边缘有少数存活细胞.结论微囊化兔甲状旁腺组织异种移植在不用免疫抑制剂情况下,可以在大鼠体内存活,且有功能.不同移植部位移植后随着时间的延长存在差异,肾脂肪囊在微囊化异种组织移植中是首选的移植部位.