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IL-1ra对Fn LPS诱导人牙髓细胞合成IL-1β的拮抗作用
目的：观察人重组白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对内毒素脂多糖（LPS）刺激的人牙髓细胞分泌IL-1β的拮抗作用。方法：用ELISA夹心法检测IL-1β含量。结果：人牙髓细胞经LPS刺激后，IL-1β含量明显增加。当加入高浓度的IL-1ra后，IL-1β含量与对照组相比有显著性降低，在LPS刺激牙髓细胞60分钟以前加入一定浓度的IL-1ra，牙髓细胞培养上清液中IL-1β的含量显著降低，但在90分钟以后再加入IL-1ra，则IL-1β的含量无明显变化。结论：高剂量的IL-1ra能够抑制LPS刺激的牙髓细胞分泌IL-1β，从而拮抗IL-1的生物学活性。
关键词： 白细胞介素1受体拮抗剂 白细胞介素1 内毒素脂多糖 人牙髓细胞 -
淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对体外培养人牙龈成纤维细胞的作用
目的:探讨不同浓度淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素对细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)产生前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响.方法:以培养的人牙龈成纤维细胞为实验模型,用MTT试验检测淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对牙龈成纤维细胞毒性作用的效果,初步筛选其作用浓度;然后用酶联免疫法检测三种提取物对LPS刺激牙龈成纤维细胞产生重要的骨吸收因子PGE2的影响.结果:LPS对HGF有明显的细胞毒性,三种提取物均可显著提高细胞成活率.LPS作用6 h后培养上清中PGE2含量上升,而同时加入淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素各浓度组PGE2含量显著低于对照组(p<0.01).结论:淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素均可抑制LPS对HGF的细胞毒性作用,并且可抑制LPS刺激HGF产生PGE2.
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MiR-155对 LPS 信号通路的调节及其机制
目的：探讨微小RNA155（miR‐155）对脂多糖（LPS）信号通路的调节及可能机制。方法建立miR‐155表达载体模型，体外培养单核巨噬细胞（T HP‐1），分别以超纯水处理T HP‐1细胞（CK组）、LPS处理未经转染的T HP‐1细胞（LPS组）、LPS处理经过miR‐155转染的T HP‐1细胞（LPS＋miR‐155组），处理后收集细胞培养液，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞因子表达水平，Western blot检测TAKl相关结合蛋白2（TAB2）、转化生长因子激酶1（TAK1）蛋白表达情况。结果 LPS＋miR‐155组TNF‐α、IL‐6表达水平低，且显著低于其他两组（均 P＜0.05），CK组 TNF‐α、IL‐6表达水平又显著低于 LPS组（均 P＜0.05）；LPS＋ miR‐155组 TAB2表达水平显著低于其他两组（均 P＜0.05）， LPS组、LPS＋miR‐155组TAK1表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 MiR‐155表达上调具有抑制炎症因子释放的作用，miR‐155可能是通过抑制靶基因T AB2的表达，在调控炎症反应中具有重要作用。
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细菌毒素的受体和信号核转导
已知内毒素脂多糖(LPS)与细胞膜相互作用的信号转导中有5个受体蛋白和3种可溶性蛋白起作用.哺乳动物细胞存在2种CD14,即膜CD14(mCD14)和可溶性CD14(sCD14).在单核/巨噬细胞和中性粒细胞等髓样细胞表达的为mCD14,即GPI-CD14,连接于细胞外侧膜.血管内皮细胞和上皮细胞等非髓样细胞不表达CD14.LPS诱导的细胞活化需要血清中sCD14的参与,其C端缺乏GPI尾.研究发现一种能与LPS类脂体A结合的60 kD糖蛋白LBP,有结合区和调节区.
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miR-142-3p对THP-1细胞释放炎症因子的调控作用
目的 探讨miR-142-3p对人单核细胞株THP-1释放炎症因子的调控作用.方法 体外培养人单核细胞株THP-1,(1)以不同浓度(0.5和2.0 μg/mL)脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞24 h;(2)将miR-142-3p的拟似物(mimic,100 nmol/L)转染至THP-1细胞48 h;(3)先将miR-142-3p的抑制剂(inhibitor,100 nmol/L)转染至THP-1细胞24 h,再用不同浓度(0.5和2.0 μg/mL)LPS诱导THP-1细胞24 h.处理后收集细胞培养液,用ELISA法分别检测THP-1细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的释放量.结果 (1)两种浓度LPS诱导THP-1细胞后,TNF-α、IL-6和MCP-1的释放量均增加(P<0.01),并表现出LPS浓度依赖性,高浓度者释放量较低浓度者增加.(2)THP-1细胞转染miR-142-3p mimic 48 h后,TNF-α、IL-6和MCP-1的释放量增加(P<0.05,P<0.01).(3)THP-1细胞转染miR-142-3p inhibitor 48 h后,再以0.5 μg/mL LPS诱导后,IL-6的释放量减少(P<0.05).结论 LPS能诱导THP-1细胞释放TNF-α、IL-6和MCP-1.过表达miR-142-3p能促进THP-1细胞释放TNF-α、IL-6和MCP-1.抑制THP-1细胞miR-142-3p的表达可减少LPS诱导的IL-6释放.miR-142-3p参与调控THP-1的炎症因子释放,提示miR-142-3p在调控免疫细胞的炎症反应过程中具有重要的作用.
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PUFA对LPS致ALI大鼠的氧化应激及TLR4、TNF-α的影响
目的 探究并分析ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)对内毒素脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠的氧化应激及 Toll样受体-4(TLR4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 选取健康成年Wistar大鼠120只(清洁级,体质量180~240 g),按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组60只,对照组大鼠又随机分为未处理组、处理后6 h组(LPS注射)、处理后24 h组(LPS注射),每组20只.观察组大鼠又随机分为未处理组、处理后6 h组(PUFA+ LPS注射)、处理后24 h组(PUFA+LPS注射),每组20只.观察2组大鼠处理前、处理后6 h、处理后24 h超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、TNF-α、TLR4相对表达量.结果 观察组和对照组大鼠处理前后SOD水平比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组大鼠处理前SOD水平比较差异无统计学意义(P>0.05);随着处理时间的推移,2组大鼠SOD水平均有所降低,但观察组大鼠降低程度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组大鼠处理前后MDA水平比较差异有统计学意义(P<0.05);随着处理时间的推移,2组大鼠MDA水平均有所升高,但观察组大鼠升高程度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组大鼠处理前后ICAM-1水平比较差异有统计学意义(P<0.05);随着处理时间的推移,2组大鼠ICAM-1、TNF-α水平有所升高,但观察组大鼠升高程度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组大鼠肺组织 T LR4相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 PUFA能有效降低LPS致ALI大鼠的氧化应激反应及炎症水平,可能有助于ALI的治疗.
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油酸-内毒素序贯致伤大鼠血浆和肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化
目的探讨促炎症细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平的变化,在全身炎症反应和急性肺损伤中的作用.方法采用油酸加内毒素脂多糖(LPS)序贯致伤大鼠,在油酸致伤后1、4、12和24h实施小剂量LPS第2次致伤,收集血浆和肺泡灌洗液,采用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量.以单油酸致伤和单小剂量LPS致伤作为对照组进行比较分析.结果 TNF-α和IL-1β在油酸致伤4 h LPS第2次致伤后水平高,IL-6的高水平在油酸12 h加LPS致伤组;2次序贯致伤后IL-1β水平变化大,增高显著,血浆浓度达到(1 526±39.69)pg/ml,肺泡灌洗液内浓度为(840.4±95.29)pg/ml.结合肺组织病理学研究,肺组织损伤严重大鼠,血浆和肺泡灌洗液TNC-α、IL-1β和IL-6水平高.结论 TNF-α和IL-1β是早期释放的促炎症细胞因子,其中IL-1β的血浆和肺泡灌洗液中水平高,它可能在全身炎症反应发生、发展和急性肺损伤中起非常重要的作用.肺组织损伤程度与这些促炎症细胞因子水平有密切关系.
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一氧化氮与寄生虫感染的研究进展
自从1987年从生物体内证实一氧化氮(nitric oxide，NO)以来，因其与多种疾病有着密切的关系而受到医学界的极大重视，展开了广泛的研究，并取得了较大的进展。NO在寄生虫感染的免疫中作为一种重要的效应因子，已进行了较为系统的研究，现就这方面的研究进展作一综述。1 NO的生物学合成与功能 NO是由L-精氨酸的胍基氮经氧化过程产生的一种活性中介物，L-瓜氨酸和NO-2／NO3-是该反应的终产物。催化这一反应的酶是NO合成酶(Nitric oxide synthase，NOS)，NOS为一组同工酶。一种为结构型NOS constitutive NOS，cNOS)，其又分内皮型NOS和神经元型NOS。cNOS需要还原型辅酶Ⅱ(NADPH)作辅酶，对Ca++和钙调蛋白有依赖性，其诱导产生低水平NO，参与血管舒张和神经信息传递等。另一种为诱导型NOS(inducible NOS)，该酶不依赖Ca++和钙调蛋白诱导产生高水平NO而参与机体免疫反应。主要存大于巨噬细胞(macrophage，MФ)、中性粒细胞、肝细胞和小神经胶质细胞内。 NO的合成受多种因素的调节。凡能增加细胞内游离钙的各种刺激物都能激活cNOS，诱导产生低水平NO。细胞因子如γ-干扰素(interferon-γ，INF-γ)、α-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-a，TNF-a)、IL-1，内毒素脂多糖(LPS)或细菌毒素等均能诱导MФ合成高水平NO。IL-4、IL-10能抑制MФ内的NO合成。L-精氨酸类似物N-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)、N-硝基-L-精氨酸(L-NNA)、N-硝基精氨酸甲酯等可竞争性抑制NO的合成。同样，NADPH的活性抑制剂也能抑制NO的合成。MHC-Ⅱ类分子和T细胞膜成分等可诱导MФ产生NO。
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LRG介导内毒素预处理诱导的脑保护作用
目的:通过测定不同组大鼠脑缺血/再灌注损伤模型中脂多糖应答分子(LRG)表达水平的变化与炎症因子含量及大鼠脑梗死容积之间的关系,探讨内毒素重复预处理诱导脑保护效应的机制.方法:将66只SD大鼠随机分为假手术组、缺血对照组和内毒素预处理组,每组22只.采用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,采用大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO)制备大鼠大脑缺血/再灌注模型.采用免疫印迹法结合图像分析软件半定量计算LRG分子表达水平的变化,酶联免疫法测定脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的含量,用氯化三苯四唑(TTC)染色法和计算机图像分析系统计算大鼠大脑梗死容积.结果:相比于缺血对照组,内毒素重复预处理组大鼠大脑LRG分子表达水平明显上调,TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低,IL-10的含量明显增高,同时,内毒素预处理组较缺血对照组神经功能评分明显升高,脑梗死容积明显缩小.结论:内毒素重复预处理通过上调LRG分子表达,促进致炎-抑炎因子之间的动态平衡介导脑保护作用.
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可溶性CD14对LPS诱导人牙龈成纤维细胞活化的影响
目的:观察重组表达的sCD14对LPS的炎症介导作用的影响.方法:将异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FTTC)标记的LPS分别和sCD14以及阳性对照内毒素中和蛋白(endotoxin neutralizing protein,ENP)孵育后,加入人牙龈成纤维细胞培养系统中,通过流式细胞仪测定LPS与细胞结合后的荧光强度;采用ELISA检测细胞培养上清中的TNF-α和IL-6的含量.结果:sCD14和ENP可导致细胞膜平均通道荧光强度减低,LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-6分泌量显著下降.结论:sCD14和ENP使人牙龈成纤维细胞的LPS结合量显著下降,表明sCD14和LPS中和蛋白可竞争性结合LPS,引起细胞培养系统中游离LPS浓度下降,对细胞的炎症介导作用减小.
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p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中作用的研究
目的: 研究p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中的作用.方法:采用Western blotting观察LPS对牙龈成纤维细胞内p38 MAPK活性的影响;蛋白激酶活性实验观察SB203580对p38 MAPK活性的抑制作用;Northern blotting观察SB203580对LPS诱导uPA表达的影响.结果:LPS能够迅速地激活牙龈成纤维细胞内p38 MAPK的活性;SB203580能够有效地抑制牙龈成纤维细胞内的p38 MAPK的活性;经SB203580处理后,LPS对uPA的诱导作用受到显著的抑制.结论:LPS通过p38 MAPK信号转导途径诱导牙龈成纤维细胞表达uPA.
关键词： 牙龈成纤维细胞 内毒素脂多糖 尿激酶型纤溶酶原激活剂 p38 MAPK -
LPS调控人牙龈成纤维细胞表达uPA的研究
目的:观察LPS对牙龈成纤维细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响.方法:采用Western blotting 和Northern blotting分别观察LPS对牙龈成纤维细胞内uPA蛋白质表达水平和mRNA表达水平的影响.结果:经1.0 μg/mL LPS处理8 h后,牙龈成纤维细胞内uPA蛋白表达量明显增强,且这一增强作用可持续24 h;经1.0 μg/mL LPS处理4 h后,牙龈成纤维细胞内uPA mRNA表达量明显增强.结论:LPS能够促进牙龈成纤维细胞表达uPA,参与牙周组织的破坏.
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人牙髓细胞受内毒素脂多糖、肿瘤坏死因子、复合树脂浸出液刺激后的MTT值研究
目的:观察人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDP)热休克模型及正常HDP受到 LPS、TNF-α及复合树脂浸出液的细胞毒刺激后的MTT值.方法:用LPS、TNF-α各三种浓度及750ml/L Durafill复合树脂浸出液分别处理HDP及其热休克模型,72h后计算各组相对增殖率(RGR).结果:热处理板与非热处理板相比RGR有显著差异;同一处理因素随浓度增加RGR有下降趋势,且在低浓度与高浓度之间有显著差异.结论:在受到LPS、TNF-α及复合树脂浸出液的细胞毒作用后,经过热休克处理的HDP的MTT值显著高于未经热处理的HDP,提示热处理可能提高HDP的抗细胞毒能力.
