大鼠肝大部切除后热休克处理对热休克蛋白和磷酸酶的影响

目的研究热休克蛋白(Hsc70/Hsp68)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)在肝再生过程中的生物学作用,检测这些大分子在大鼠肝大部切除后热休克处理下的动态变化. 方法用组织化学、免疫组织化学、Western印迹、酶的原位复性电泳、体视学分析、比色分析等方法. 结果肝切除和热休克联合处理(PH-HS)后的0～144h恢复期间,ACP有3个高活性期(12、36和96h),AKP有2个高活性期(12和36h),Hsc70/Hsp68有2个高表达期(16和48h);PH-HS后ACP和AKP活性增强与140～180kD的酶活性增加有关.与只进行热休克(HS)(44℃,30min)处理或与只进行2/3肝切除(PH)后恢复期间Hsc70/Hsp68含量和磷酸酶活性动态变化的比较表明,PH-HS对Hsc70/Hsp68含量和磷酸酶活性的影响可持续120h;PH-HS中的PH能略微降低ACP和AKP活性,减少HS诱导肝细胞合成Hsc70/Hsp68的量;PH-HS中的HS处理能抑制PH诱导的Hsc70/Hsp68表达和推迟ACP活性高峰出现的时间. 结论 ACP、AKP和Hsc70/Hsp68均在肝细胞的HS反应和肝再生中起作用,其中,ACP可能在启动肝再生中起重要作用,AKP和Hsc70/Hsp68可能在DNA合成和细胞分裂中起重要作用.

热休克及化疗刺激对人白血病细胞K562中HSP70 mRNA及MDR1 mRNA表达的影响

为了研究热休克、Adriamycin(ADM)化疗应激刺激下热休克蛋白70(HSP70)、多药耐药基因MDR1的表达情况,对K562细胞予以43℃高温热休克和(或)加以ADM化疗,然后采用免疫组织化学方法检测HSP70的表达,MTT法检测K562细胞的生长抑制率,RT-PCR检测HSP70 mRNA和MDR1 mRNA的表达,流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果显示:①HSP70蛋白的合成在43℃热作用后恢复37℃孵育2小时达到高峰并聚集在胞核和核仁内,呈"核内迁移"现象;3小时后HSP70表达开始降低,5小时后HSP70的合成逐渐降低至正常,并恢复以胞浆表达为主.②K562细胞在43℃高温热休克刺激下HSP70 mRNA表达增加,随着37℃孵育时间的延长表达量有增多趋势并持续一段时间,MDR1 mRNA的表达与之相似,二者在37℃孵育2小时分别增加4倍和5.8倍.③ADM化疗刺激后细胞内P-gp表达增加;ADM化疗、43℃热休克刺激后再加ADM化疗,K562细胞中HSP70mRNA、MDR1 mRNA表达均上调,且43℃热休克刺激处理后再加入ADM作用二者的表达要高于单加ADM化疗组.结论:热休克和ADM化疗刺激的K562细胞中HSP70和MDR1表达增加,有利于维护肿瘤细胞的稳定性,HSP70可能与耐药有关.

榄香烯增强瘤苗免疫原性的研究

目的在基因水平上通过与热休克处理对比探讨榄香烯增强肿瘤细胞免疫原性的分子机制. 方法人肝癌细胞HepG2经50μg/ml榄香烯或42℃热休克处理后,与未经处理的对照组一起,分别提取总RNA、逆转录成cDNA、体外转录制备生物素标记的cRNA,应用含有12550条人类基因的表达谱芯片,与热休克对比分析经榄香烯处理的人肝癌细胞HepG2基因表达谱的改变. 结果榄香烯能使HepG2细胞的24条基因表达明显改变,在这24条基因中有14条基因在热休克处理时未发生表达变化. 结论榄香烯有可能在基因水平上改变肿瘤细胞的免疫原性,并可能诱生与热休克不同的免疫原性物质.

热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes的抗肿瘤作用

目的 本研究探讨热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes的体内抗肿瘤效应.方法 通过分级离心和蔗糖密度梯度离心法分离和纯化E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes.热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes和未热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes分别命名为Exo/HS和Exo.通过电镜观察exosomes的形态,Western blot检测exosomes的蛋白成分.以Exo、Exo/HS、PBS免疫小鼠,用E.G7-OVA肿瘤细胞进行攻击,观察各组免疫保护效应;建立E.G7-OVA荷瘤小鼠模型,观察各组免疫治疗效应.通过LDH法检测各组免疫小鼠脾细胞CTL活性.结果 电镜下exosomes为双层膜的囊泡样结构,直径为40～100 nm.Western blot结果 表明:Exo和Exo/HS都含有HSC70、HSP70、HSP60、HSP90、MHC Ⅰ和OVA分子,而Exo/HS中HSP70和MHC Ⅰ分子的含量更高.免疫保护试验发现,Exo/HS组免疫小鼠90 d的无瘤率显著高于Exo组和PBS组(50%、20%、0%,P<0.01);对荷瘤小鼠的免疫治疗显示,Exo/HS对荷瘤小鼠的肿瘤抑制效应显著高于Exo组和PBS组(P<0.01).CTL结果 表明,Exo/HS免疫小鼠诱导的OVA抗原特异性的CTL活性显著高于Exo组和PBS组(P<0.01).结论 热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes可作为有效的肿瘤疫苗.

热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞瘤苗对原位接种结肠肿瘤的免疫预防作用

目的:研究热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的体内抗肿瘤作用以及对原位接种结肠肿瘤小鼠的免疫保护作用.方法:肿瘤细胞CT-26经热休克处理后制备冻融抗原,体外负载树突状细胞,免疫同源小鼠(热休克组).以IFN-γ ELISPOT实验、LDH释放实验检测小鼠体内肿瘤特异性T细胞免疫反应,以原位接种结肠肿瘤的体积以及荷瘤小鼠的生存时间来评价该树突状细胞瘤苗对结肠原位接种CT-26小鼠的免疫保护作用,并与非热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的免疫效果(非热休克组)作一比较.结果:热休克处理肿瘤细胞可提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞表面MHC-Ⅱ类分子(66.3% vs 59.1%)、共刺激分子CD86的表达(39.4% vs 36.7%);热休克组小鼠脾淋巴细胞中肿瘤特异性CTL数量高于非热休克组(P=0.001),相同效靶比下前者肿瘤特异性细胞毒活性强于后者;热休克组与非热休克组小鼠原位接种结肠肿瘤14 d后的肿瘤体积均明显小于单纯DC免疫组(P=0.000),但HSCT-26DC免疫组与CT-26 DC免疫组间差异无显著性(P=0.480).单纯DC免疫组50%(3/6)可见腹膜转移,CT-26 DC免疫组以及HSCT-26DC免疫组均未见腹腔转移;热休克组小鼠荷瘤生存时间显著长于非热休克组(P=0.0384).结论:热休克处理肿瘤细胞可以提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的体内抗肿瘤作用,热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞瘤苗对原位接种结肠肿瘤小鼠具有良好的免疫保护作用.

温热对BGC-823胃癌细胞HSP70表达及超微结构的影响

目的:探讨热处理BGC-823人胃癌细胞后,HSP70表达与细胞凋亡及超微结构改变的关系.方法:采用MTT法及流式细胞术对BGC-823胃癌细胞株在42℃及43℃两个温度,分别热处理2、7、12 h后,进行细胞增生、凋亡及HSP表达测定,同时在透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构特点.结果:高热对肿瘤细胞的杀伤作用明显,各加热组均可使BGC-823细胞高表达HSP70,在43℃条件下热休克7 h后,HSP70表达量高,并与细胞的凋亡有关.随着时间延长,对肿瘤细胞超微结构的影响加大.大多数细胞表现出染色质浓缩、DNA分裂的形态学特征.结论:热处理对肿瘤细胞具有杀伤作用,43℃/7 h为诱导BGC-823细胞凋亡的适宜条件,凋亡是BGC-823细胞热诱导死亡的重要机制,热处理后HSP70过表达可能与肿瘤细胞凋亡有关.

热盐水致胃黏膜细胞凋亡及对热休克蛋白表达影响

目的:研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CAG)胃黏膜组织中的凋亡细胞、增生细胞和Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α及P53表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法:采用脱氧核糖核酸转移酶介导等缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色技术.细胞凋亡时DNA含量分析采用流式细胞检测技术.结果:TUNEL检测细胞凋亡显示:在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎中凋亡细胞数明显增多,在黏膜全层均可见到,呈弥漫性分布.萎缩性胃炎中凋亡细胞指数显著高于正常大鼠胃黏膜(P＜0.05);免疫组化法检测凋亡相关基因和PCNA,显示:Bcl-2、Fas、HSP60、HSP70、HSP90α、P53及PCNA在热盐水灌胃所致的萎缩性胃炎中的表达率显著高于正常胃黏膜(P＜0.05);流式细胞检测显示:在萎缩性胃炎时,在G0/G1峰前可见一个亚G0/G1峰,也即凋亡细胞峰出现,而在正常胃黏膜时未显示亚G0/G1峰.结论:热盐水灌胃可导致大鼠胃黏膜组织细胞增生和细胞凋亡异常,其调控基因(Bcl-2、Fas)及HSP60、HSP70、HSP90α、P53在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎发生中起重要作用.

多巴胺对大鼠心肌不同缺血时间再灌注热休克蛋白表达影响的实验性研究

多巴胺对大鼠心肌不同缺血时间再灌注热休克蛋白表达影响的实验性研究

血红素加氧酶-1系统和心脏移植

血红素加氧酶(血红素氧化酶,heme oxygenase,HO)是血红素降解的起始酶和限速酶,催化血红素降解为胆色素、CO和自由铁,在体内以HO-1、HO-2、HO-3三种形式存在,HO-1为诱导型,另外两种为组成型.血红素是HO-1的主要作用底物,各种非血红素因素包括重金属、细胞因子、激素、内毒素、热休克、化学物质及氧化刺激等均可诱导HO-1大量表达.

槲皮素提高肝癌HepG2细胞热化疗疗效的实验研究

目的研究热休克对人肝癌HepG2细胞耐药性的影响,探讨合用槲皮素(Qu)能否提高肝癌细胞热化疗的疗效.方法42℃恒温水浴法热休克传代人肝癌细胞系HepG2细胞90 min.MTT检测半数抑制浓度(IC50),求得耐药倍数、增敏倍数;荧光染色检测凋亡率;流式细胞术检测HSP70和P-gp表达率.结果Qu能诱导HepG2细胞凋亡.HepG2细胞热休克诱导后4 h对多柔比星ADM耐药性升高2.78倍(P＜0.05);HSP70阳性细胞数升高,4 h达到11.47%,升高近1倍(P＜0.01);P-gp阳性细胞数12 h达到96.31%,升高近2倍(P＜0.01);热休克前应用Qu能有效抑制热休克诱导HSP70和P-gp的过量表达,抑制细胞对ADM耐药性的产生,起增敏作用(P＜0.05),呈浓度依赖性.结论槲皮素可阻断热休克诱导HepG2细胞HSP70和P-gp的过表达,抑制耐药性的产生,起到热化疗的增敏作用,可成为肿瘤耐药逆转剂.

热休克对急性运动大鼠骨骼肌中MDA及SOD的影响

目的:探讨热休克对急性运动后大鼠骨骼肌中脂质过氧化物(MDA)和抗氧化酶(SOD)的影响.方法:SD大鼠分为高温安静组、高温运动组、室温安静组、室温运动组.高温安静组和高温运动组大鼠经热休克处理后室温恢复24小时,进行一次性急性运动,运动后16小时取样进行各项检测并与室温安静组和室温运动组进行比较.结果发现,高温安静组HSP72高于室温安静组,高温运动组骨骼肌中MDA明显低于室温运动组(P < 0.05),而SOD略高于室温运动组,但无统计学意义(P > 0.05).结果提示,热休克可明显减少骨骼肌中脂质过氧化物(MDA)含量,减轻急性运动对骨骼肌的损伤.

热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚(AAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 40℃分别热休克(HS)处理小鼠10 min(HS10组)、20 min(HS20组)和30 min(HS30组),室温恢复8h后,小鼠ip给予AAP 550 mg·kg-1诱导急性肝损伤,分别于AAP后0,6,24,42和72h进行相关指标检测.赖氏法检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性,HE染色进行病理学分析,免疫组化法检测给予AAP后0h,小鼠肝热休克蛋白70(HSP70),细胞色素P4501 A2(CYP1A2)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western印迹法检测给予AAP后0,6,24,42和72 h时小鼠PCNA的表达.结果 与AAP对照组相比,HS20组小鼠血清中AST和ALT酶活水平显著降低(P＜0.05),而HS10组和HS30组小鼠无显著差异.与AAP对照组相比,HS20显著降低了AAP诱导的小鼠肝损伤程度(P＜0.05),而HS10和HS30未显著降低肝损伤的程度.HS20显著诱导了小鼠肝HSP70(P＜0.01),CYP1A2(P＜0.01)和PCNA(P＜0.05)的表达,而HS10和HS30显著诱导了小鼠肝HSP70和CYP1A2(P＜0.05)的表达,但未明显诱导PCNA的表达.与HS10和HS30相比,HS20更加显著地诱导了HSP70和CYP1A2的表达(P＜0.05).HS20组小鼠在注射AAP后0,6,24,42和72 h,小鼠肝PCNA的表达均显著高于AAP对照组(P＜0.05)、HS10和HS30组(P＜0.05).结论 40℃热休克预处理20 min可以有效降低AAP诱导的小鼠急性肝损伤程度,加速肝损伤后的修复.

热休克诱导弹性蛋白原在培养的人真皮成纤维细胞中异常表达

目的:观察热休克对体外培养的人类真皮成纤维细胞中弹性蛋白原mRNA以及蛋白质表达的影响,以阐明环境因素中的热休克效应在皮肤日光弹力变性中所起的作用.方法:将原代培养的人类真皮成纤维细胞置于43℃水浴箱中30min,然后恢复37℃,5%(体积分数)CO2恒温培养,分别于24 h以及48 h收集标本,以Northern blot和Western blot方法分别检测弹性蛋白原mRNA及蛋白质的表达水平.结果:热休克刺激后弹性蛋白原mRNA表达明显上升,热休克后24 h上升为对照组的(163±12)%(P＜0.05),48 h上升为对照组的(221±22)%(P＜0.05),同时成纤维细胞培养上清液中弹性蛋白原的蛋白质表达水平也明显增高,24h上升为对照组的(149±12)%(P＜0.05),48 h上升为对照组的(783±10)%(P＜0.05).结论:在体外原代培养的人类真皮成纤维细胞中,热休克可诱导弹性蛋白原mRNA以及蛋白质的过度表达,提示该异常增多的弹性蛋白原可能在日光弹力变性的发生、发展中起重要作用.

逆转录病毒载体介导的bcl-2反义RNA促进胃癌MGC-803细胞凋亡

bcl-2是Tsujimoto在Ⅱ型B细胞淋巴瘤中发现的一种基因,其过度表达能抑制撤退生长因子、射线、热休克、化疗药物、病毒及促凋亡基因等多种因素诱导的细胞凋亡 .bcl-2蛋白高表达赋予肿瘤细胞对多种化疗药物的抗性,导致化疗失败或复发.逆转bcl -2的表达可能提高化疗效果.我们将bcl-2的编码序列反向插入逆转录病毒表达载体中并转导实体瘤胃癌细胞株MGC-803,观察bcl-2反义序列对实体瘤肿瘤细胞的作用.

c-Jun氨基末端激酶活性测定

丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)是细胞内重要的信号转导酶类,它们被细胞外刺激因子激活后,可通过使不同的转录因子磷酸化,调节特定基因的表达,转导细胞增殖、肥大或细胞分化的信号.研究表明,MAPKs家族至少有3个亚类,分别为细胞外信息调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/ERK2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)和p38激酶,其中JNK又称应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK),已知它可被炎症介质(TNF-α、IL-1)、应激刺激(热休克、高渗)、紫外线、缺血/再灌注等激活.

血浆肠脂肪酸结合蛋白和二胺氧化酶与热休克患者疾病严重程度的相关性

国内学者进行了一项研究，探讨血浆肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）和二胺氧化酶（DAO）在热休克患者中的作用。该研究纳入住重症加强治疗病房（ICU）的严重热休克患者和健康志愿者各10例。入组时分别测定其血浆iFABP和DAO含量，并留取全血测定内毒素水平，分析iFABP、DAO与内毒素水平的相关性；同时还测定了患者的白细胞计数（WBC）、血清降钙素原（PCT）、C-反应蛋白（CRP）以及促炎因子白细胞介素（IL-1α、IL-6）等水平。结果显示：与健康对照者相比，热休克患者iFABP和DAO水平均显著升高（均P＜0.05）；动力学曲线表明，热休克患者iFABP和DAO水平分别在纳入后第3天和第4天达到峰值。经治疗后，患者iFABP、DAO水平均显著降低（均P＜0.05）。内毒素水平与IFABP、DAO水平呈正相关。研究者还观察到，热休克患者血清PCT、CRP、 IL-1、IL-6等水平显著升高，但WBC并未升高。该研究者得出结论：iFABP及DAO水平能很好地反映中暑热休克患者肠黏膜屏障功能，治疗后iFABP和DAO水平明显下降，因此可能是热休克患者病情严重程度的预测因子。

热虚脱和热休克的防治

有许多人暴露在过热的环境中,因过热而患病者以户外劳动者为多,运动员、小孩、老人也常常会受到过热的影响,尤其是老年人,容易发生热休克.

出现这些症状提示你中暑了

中暑是一种与环境高温相关的疾病,重者可发生热痉挛、热晕厥、热衰竭、热休克等,发现或者处置不及时也有可能会导致严重不良后果.中暑多见于在高温环境下长时间作业的年轻人,如从事重体力劳动或剧烈运动;也见于没有重体力劳动的老年人或儿童、体温调节能力和适应能力差以及有基础疾病者.中暑原因 环境温度、湿度与中暑密切相关,高温并高湿的环境更容易发生中暑.环境温度在35℃以上,散热的途径主要靠汗液蒸发;环境湿度超过75％,人体即使“汗出如浆”也不能通过汗液蒸发的途径散热了.

80例流行性出血热休克综合治疗效果分析

我院自1975年1月至2003年10月对80例伴休克的出血热患者,进行了综合治疗,现将治疗效果分析如下.