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毛囊神经干细胞促进受损大鼠视神经大胶质细胞去分化
目的 培养毛囊神经干细胞,研究其对受损视神经大胶质细胞去分化的影响. 方法 取约90g雄性SD大鼠触须垫毛囊隆突区贴块,无血清培养或经15%胎牛血清诱导培养毛囊隆突区细胞,用免疫荧光细胞化学和PCR鉴定;以含增强型绿色荧光蛋白的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)稳定转染该细胞.成年雄性SD大鼠54只,分为正常对照组、损伤组、移植组,移植组为视神经损伤后移植上述毛囊神经干细胞.转染细胞移植组术后7d、14d、30d,取视神经荧光显微镜下观察;损伤组和未转染细胞移植组术后7d取术侧视神经行Affymetrix基因芯片及实时荧光定量PCR检测,术后7d、14d取术侧视神经行HE、免疫组织化学检测. 结果 成功培养出神经前体细胞标记分子阳性的毛囊神经干细胞,诱导后该细胞可表达成熟神经细胞标记分子.毛囊神经干细胞移植到受损视神经30 d后,仍能存活和迁移.与损伤组相比,移植组差异表达基因有240条,其中一些与去分化相关,如干细胞、凋亡、增殖、信号转导、转录、分化发育、细胞黏附等相关基因,实时荧光定量PCR与基因芯片结果基本相符.移植组视神经远侧段细胞数较损伤组明显增多,巢蛋白、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达增加,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达减少,且视神经近侧段神经丝(NF)表达增加. 结论 毛囊神经干细胞通过调节受损视神经中的一些基因表达,促进了其大胶质细胞去分化并向有利于神经再生方向变化.
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甲基苯丙胺对CD-1小鼠视网膜毒性作用的初步研究
目的 探讨甲基苯丙胺对CD-1小鼠视网膜的毒性作用.方法 12只CD-1小鼠腹腔内单次注射大剂量(40mg/kg)甲基苯丙胺.免疫组织化学法观察给药后1 d及7 d视网膜组织毒性反应.GFAP免疫标记大胶质细胞;CD11b免疫标记小胶质细胞;酪氨酸羟化酶(TH)标记多巴胺细胞及神经末梢改变.结果 全部CD-1小鼠耐受该给药方案.给药后1 d及7 d均发现视网膜大胶质细胞及小胶质细胞增生,活化.酪氨酸羟化酶变化不明显.结论 全身单次大剂量注射甲基苯丙胺后可能对CD-1小鼠视网膜产生一定毒性作用.
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干细胞可塑性在血液学方面的研究进展
近年来，干细胞之所以成为人们关注的热点，一是因为人胚胎干细胞系在体外培养获得成功，它具有广泛的分化潜能；二是成年生物组织干细胞可分化成在发育上无关的细胞类型，即干细胞具有可塑性（plasticity），它不仅打破了组织再生来源于该组织干细胞的这一传统观念，而且具有重要的实用价值。我们仅就组织干细胞的可塑性在血液学方面的研究进展作一综述。1 骨髓细胞转化为其他组织细胞的研究近年的研究证明，骨髓内造血干细胞不仅可分化成熟为各类造血细胞和免疫细胞，而且骨髓和骨膜来源的间叶干细胞（MSC）还可成为多种非造血组织，如骨、软骨、肌腱、肌肉、骨髓基质细胞、脂肪细胞和真皮等的前体细胞，从成人骨髓活检获取的MSC，在体外可扩增上千万倍而不失去其成骨活性［1］。Pereira等［2］的实验证明，小鼠骨髓间叶前体细胞在体外扩增后还可成为肺的前体细胞。作者利用表达人Ⅰ型胶原抗原微小基因（COLIAI mini gene）的转基因小鼠作为供体，以未转基因的FVB/N 小鼠作受体。取供体骨髓贴壁细胞（1×105）与正常小鼠骨髓细胞（6×105）混合，移植给分次照射9.0?Gy的正常FVB/N小鼠。于移植1～5个月后，用RT-PCR的方法检测，结果发现骨、软骨和肺组织细胞有1.5%～12.0%带有供体基因，在肺实质内带有供体标记的细胞呈弥漫性分布，表明它们是来自骨髓前体细胞。近，有作者报道用骨髓间叶前体细胞（同种骨髓来源）治疗3例遗传性骨形成缺陷病（缺乏Ⅰ型胶原）的儿童患者，3个月后骨钙含量明显增加(平均28?g)，远高于同龄的健康儿童［3］，为遗传性疾病的细胞治疗提供了新的途径。 1997年Eglitis等［4］证实成年动物造血细胞可分化为脑的大胶质细胞（包括星形细胞和小树枝状胶质细胞，属外胚叶）。作者用C57BL/6j雄性小鼠为供体，用5-氟尿嘧啶富集造血干细胞，用带有Neor 包装细胞与之共培养48?h后收集细胞，移植给经亚致死量照射（4.5 Gy）的雌性WBB6F1/J-kitw/kitwv小鼠（干细胞有缺陷，为供体干细胞生长提供增殖优势）。通过Neor转录本和Y染色体探针原位杂交，以及与大胶质细胞抗原（f4/80）和星形胶质细胞抗原（GFAP）相结合的方法进行检测。结果证明，骨髓移植（BMT）后第3天在脑组织中可检测到300个Neor+细胞，2～4周为2?000个，有的达30 ?000个，分布于海马、中隔、下丘脑、皮质、松果体、桥脑和小脑等，10%的Neor+ 细胞有神经胶质细胞特异性抗原表达，证明它们确系造血干细胞转化而来。 众所周知，肌肉的生长和修复是由肌纤维周围的卫星细胞介导的，未曾发现其它细胞参与肌肉再生的报道。1998年Ferrari等［5］在观察肌肉再生时发现，肌肉前体细胞数明显超过卫星细胞数，因而推测，肌肉再生可能有其他未分化的前体细胞参与。实验用C57/ M lacZ 转基因小鼠为供鼠，将其骨髓细胞移植给免疫缺陷小鼠scid/bg，重建造血。然后用心肌毒素诱发受体胫骨前肌肉再生。结果表明，肌肉损伤后2～3周，取肌肉冰冻切片检测发现不成熟的中心性纤维细胞和较成熟的周围性细胞中出现源于造血干细胞的β-半乳糖苷酶 (β-Gal)阳性标志。证明骨髓来源的前体细胞参与肌肉再生过程，可形成完全分化的肌纤维。1999年Jackson等［6］用Hoechst 333422-low SP纯化的小鼠造血干细胞进一步证明它可迁移到肌肉损伤部位，不仅参与肌肉再生，而且也参与血管再生。由于注入肌肉卫星细胞在5 d内就融入肌肉纤维，而骨髓来源的β-Gal+细胞 2周后才在肌肉中出现，提示骨髓转化为肌肉前体细胞是一个多步骤的过程，包括迁移，细胞分裂，定向肌肉分化，终成熟和融合成肌肉，故需要时间较长［6］。 1999年Peterson等［7］利用性别和基因表型不同的同系骨髓细胞在大鼠中重建造血，然后用CCL4损害受鼠的肝脏或行肝切除术。通过Y染色体探针原位杂交和不同基因表型的检测，结果发现，肝损伤后第9～第13天非实质性肝细胞，包括肝卵圆形细胞（为肝脏的干细胞，表达thy-1），Y染色体为阳性；13?d后，再生的肝细胞出现Y染色体阳性信号，与肝卵圆形细胞分化为肝细胞同步。表明骨髓细胞参与了肝细胞的再生。根据肝脏切片Y 染色体探针原位杂交的观察，Y染色体阳性肝细胞占0.16%，估计有1.0×106肝细胞由骨髓细胞转化而来。由于输注的骨髓细胞没有分类，因此，何种骨髓细胞参与了肝细胞再生尚不能确定。此外，有作者用狗移植模型做实验，证明骨髓CD34+细胞可转化为血管内皮细胞［8］。 到目前为止，由骨髓相关细胞转化为其他组织细胞的有骨、软骨、肌腱、肺、骨骼肌、肝以及血管内皮细胞及脑的大小胶质细胞等。
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小胶质细胞体外培养的研究新进展
组成中枢神经系统的细胞大部分是神经胶质细胞,包括大胶质细胞(星型胶质细胞和少突胶质细胞)和小胶质细胞;小胶质细胞是中枢神经系统的主要免疫细胞,具有提呈抗原、分泌多种细胞因子、吞噬病原体和坏死组织的作用,被认为是脑内的单核巨噬细胞.由于小胶质细胞在颅内免疫反应中的重要作用,对于小胶质细胞的研究已成为热点;小胶质细胞的体外培养是小胶质细胞功能研究的重要途径,本文将对近年来小胶质细胞的体外培养研究进展作一综述.
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嗅鞘细胞移植与脊髓损伤再生修复
嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)是存在于嗅觉系统的一种特殊类型的大胶质细胞,分布于嗅神经、嗅球的第一、二层和嗅上皮.OECs能伴随嗅束进入中枢神经系统.OECs兼有星形胶质细胞和雪旺细胞的特点,并迁徙于周围神经系统和中枢神经系统.在受损的脊髓组织移植OECs后,OECs不仅能引导、支持损伤神经轴突再生、延伸和髓鞘化作用,还能促进神经轴突穿越脊髓损伤所形成的胶质瘢痕区.通过转基因技术使OECs携带某些促进脊髓再生的外源性基因,表达一些促脊髓再生的分子,从而改善脊髓损伤的内环境,诱导损伤的脊髓神经元再生,使得受损脊髓再生的潜力得以发挥,达到脊髓再生和功能恢复的目的.OECs移植被认为是治疗脊髓损伤有潜力、有希望的方法.
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嗅神经鞘细胞及其在脊髓损伤中的应用前景
成年中枢神经系统(central nerve system, CNS)损伤后,由于内部微环境不适合,神经元轴突往往不能再生,而成年嗅觉系统中嗅感觉神经细胞却终生具有增殖、更新能力,新生成的轴突能长入嗅球并建立功能联系.研究发现,嗅觉系统这种独特的特点可能与一种特殊的大胶质细胞--嗅神经鞘细胞有关.
