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温热对BGC-823胃癌细胞HSP70表达及超微结构的影响
目的:探讨热处理BGC-823人胃癌细胞后,HSP70表达与细胞凋亡及超微结构改变的关系.方法:采用MTT法及流式细胞术对BGC-823胃癌细胞株在42℃及43℃两个温度,分别热处理2、7、12 h后,进行细胞增生、凋亡及HSP表达测定,同时在透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构特点.结果:高热对肿瘤细胞的杀伤作用明显,各加热组均可使BGC-823细胞高表达HSP70,在43℃条件下热休克7 h后,HSP70表达量高,并与细胞的凋亡有关.随着时间延长,对肿瘤细胞超微结构的影响加大.大多数细胞表现出染色质浓缩、DNA分裂的形态学特征.结论:热处理对肿瘤细胞具有杀伤作用,43℃/7 h为诱导BGC-823细胞凋亡的适宜条件,凋亡是BGC-823细胞热诱导死亡的重要机制,热处理后HSP70过表达可能与肿瘤细胞凋亡有关.
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磁感应纳米基因靶向治疗方法的研究与展望
磁感应纳米基因靶向治疗方法是一种联合磁感应热疗和热诱导基因治疗的综合肿瘤治疗方法.磁性纳米颗粒既是磁感应热疗的核心介质,也可以作为肿瘤基因治疗的非病毒载体.
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发热诱导的学龄期儿童难治性癫痫性脑病急性期的脑电图监测
发热诱导的学龄期儿童难治性癫痫性脑病(fever-induced refractory epileptic encephalopathy in school-aged children,FIRES)是一类儿童期与发热感染相关的癫痫性脑病,通常表现为发热后出现癫痫持续状态.2012年8月,国内8家医院组成的协作组首次报道了13例FIRES患儿的临床特点、预后分析和随访期脑电图改变[1].本院于2011年9月、2013年2月和2013年5月在重症监护病房(intensive care unit,ICU)中完成3例FIRES患儿急性期的4次动态脑电图(ambulatory electroencephalogram,AEEG)监测并进行相关研究,现将结果,报道如下.
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西妥昔单抗联合放射及加热诱导鼻咽癌细胞系凋亡的实验研究
由于单纯放疗作为鼻咽癌的主要治疗手段效果不甚理想[1],联合靶向治疗或热疗等综合治疗逐渐引起人们关注[2-3].西妥昔(cetuximab,商品名为爱必妥)为嵌合单克隆抗体,属于表皮生长因子受体抑制剂类靶向药物.实验通过观察西妥昔单抗联合放射及加热诱导人鼻咽癌细胞凋亡效应,为临床综合治疗鼻咽癌提供借鉴.
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041电离辐射和/或高热诱导的六种不同p53状态人肿瘤细胞S期停滞和G1期阻滞
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热诱导颊癌细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达的关系
目的探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达变化的关系.方法43℃40min水浴加温诱导BcaCD885细胞产生凋亡.采用流式细胞仪(FCM)-DNA及抗体检测技术分别测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达量,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中Bcl-xL蛋白表达的动态变化,探讨二者间的关系.结果凋亡组内Bcl-xL蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05),凋亡率与Bcl-xL蛋白表达水平存在负相关关系(r=-0.89,P<0.05).结论Bcl-xL在热诱导BcaCD885细胞凋亡的调控中起重要作用.
关键词: 热诱导 BcaCD885细胞 凋亡 Bcl-xl -
人膀胱癌细胞株EJ中热休克蛋白70的热诱导表达及其意义
目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)在膀胱癌细胞株EJ中的热诱导表达及其意义。方法106/ml EJ置于1.5 ml Eppendorf管中,将它们在不同温度水浴分别加热诱导2 h、4 h、6 h、8 h。5%CO2孵箱中(37℃)恢复2 h。流式细胞术(FCM)和蛋白印迹法检测HSP70,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70 mRNA, SPSS16.0统计软件处理数据。结果人膀胱癌细胞株EJ中HSP70随着温度的增高表达增多,差异有统计学意义(P<0.05),但温度超过43℃时,细胞死亡率增高;随着热诱导时间的延长而增多,差异有统计学意义(P<0.05),超过8 h EJ中HSP70不再增高。结论人膀胱癌细胞株EJ中HSP70热诱导表达的适条件是43℃、6 h ,这对基于HSP70膀胱肿瘤的瘤苗制作提供一定的实验基础。
关键词: HSP70热休克蛋白质类 膀胱肿瘤 EJ细胞株 热诱导 -
热诱导延迟损伤大鼠心肌细胞凋亡机理的探讨
目的探讨热诱导延迟过氧化氢(H2O2)造成大鼠心肌细胞凋亡机理.方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生热休克蛋白70(HSP70),用H2O2造成心肌细胞损伤.采用Western Blotting、流式细胞仪、Bcl-2原位杂交、免疫组化检测Caspase-3等作为检测指标,观察心肌细胞损伤,以及HSP70对心肌细胞的保护作用.结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达,保护组凋亡率显著低于损伤组,Bcl-2和Caspase-3在损伤组大量表达.结论 HSP70可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用.
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热激蛋白70B'启动子调控的热诱导型载体pHSP-shTERT的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞的抑制效应
目的:构建靶向端粒酶逆转录酶(telomerose reverse transcriptas,TERT)的热激蛋白(heat shock protein,HSP)70B'启动子调控的热诱导型RNAi表达载体,观察热诱导条件下其在人乳腺癌MCF-7细胞内的RNAi效应及其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法:PCR扩增HSP70B'启动子序列,用其构建热诱导型靶向TERT的重组载体并转染MCF-7细胞,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测GFP的表达,优化转染和热诱导条件;以未经热诱导的转染细胞为对照组,RT-PCR和Western blotting检测重组载体转染与热诱导对MCF-7细胞内GFP与TERT的mRNA和蛋白表达的影响;MTT实验和流式细胞术分别检测对MCF-7细胞增殖与凋亡的影响.结果:成功构建热诱导型重组载体pHSP-GFP、pHSP-shGFP和pHSP-shTERT;在适热诱导条件(42℃、40 min)下,共转染质粒pHSP-shGFP和pCMV-GFP的MCF-7细胞中GFP表达量显著低于对照组(t=-48.35,P=0.000 43).pHSP-shTERT转染组MCF-7细胞内TERT mRNA[(12.24±1.96)%vs (80.18±2.28)%;t=-286.5,P=0.000 012]和蛋白[(1.64±0.42)%vs(63.45±3.12)%;t=-31.37,P=0.001]的表达均显著下调,细胞存活率显著下降[(58.93±2.95)%vs(91.22±4.16)%;t=15.747,P=0.004],细胞凋亡率显著提高[(40.97±4.80)% vs(8.33±1.14)%;t=-11.672,P=0.007].结论:靶向TERT的pHSP-shTERT载体可以在热诱导条件下实现MCF-7细胞内靶基因的沉默,从而抑制MCF-7细胞的生长、诱导该细胞的凋亡.
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热诱导HeLa细胞中HSP70蛋白的动态变化
目的研究不同温度热诱导后HeLa细胞热休克蛋白(heat shock protein70,HSP70)蛋白动态表达.方法 HeLa细胞经过不同温热(41℃ 1h、42℃ 1h、43℃ 1h、45℃ 30min)的诱导,以SDS-PAGE及Western印迹方法检测细胞裂解液中HSP70蛋白表达.结果热诱导后HSP70蛋白表达的高峰出现时间随诱导温度的提高逐渐后移(如:41℃ 8h、43℃ 16h),且41℃、42℃热诱导后蛋白表达于诱导后8~16h期间有持续高水平表达,而45℃ 30min热诱导细胞大部分于诱导后即时死亡,且仅有低水平的HSP70表达;高表达后HSP70一般于诱导后24~32h始恢复至正常细胞表达水平.结论温热诱导(41℃ 1h)短时间内即可产生高表达量HSP70,而较激烈热诱导(43℃ 1h、45℃ 30min)仅产生少量延迟表达的HSP70蛋白,且导致大量HeLa细胞死亡,此为临床肿瘤温热治疗提供了理论依据.
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瞬时受体电位通道(TRPV1)在热性惊厥中的作用及其机制研究
目的:通过分析C57BL/6野生型小鼠和TRPV1基因敲除鼠热性惊厥行为学、脑内炎性因子表达变化,探讨TRPV1对热性惊厥发生及复发的致病机制。方法:高热诱导C57BL/6野生型小鼠和TRPV1基因敲除鼠热性惊厥后:比较两组间热性惊厥行为学、脑电图及核心温度的差异;ELISA检测两组间大脑及经辣椒素和高热处理后BV2细胞中炎性因子的表达差异。结果:(1)行为学评分显示,与野生型小鼠相比:TRPV1基因敲除鼠经高热诱导惊厥后,其潜伏期延长,惊厥持续时间缩短,发作等级降低;TRPV1基因敲除鼠热性惊厥发作时无明显惊厥脑电棘波;TRPV1基因敲除鼠惊厥发作时核心温度升高;(2)野生型小鼠大脑海马和皮质中炎性因子的表达水平较常温对照组明显升高,TRPV1基因敲除鼠中未检测到类似结果;(3)经辣椒素、高热处理后,永生小胶质细胞系BV2分泌炎性因子的水平显著增加。结论:激活TRPV1可刺激炎性因子分泌,促进反复热性惊厥的发生,提示TRPV1通道可能是热性惊厥发生的潜在易感基因。
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人肿瘤坏死因子α单链抗体的原核表达和活性分析
目的 在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体(ScFv),并分析 它的结合活性和中和活性. 方法 在获 得抗人TNF-α E6ScFv的基础上,用热诱导载体pBV220在大肠杆菌中表达E6ScFv蛋白. ELIS A测定抗体的结合活性,实时BIA技术确定亲和常数,L929 细胞毒试验分析其中和活性. 结果 克隆了抗人TNF-α E6ScFv基因的热 诱导载体pBV220在大 肠杆菌中,经42℃热诱导,得到了相对分子质量(Mr)约为27 000的重组蛋白质,表达 量占菌体 总蛋白的18%. 对在大肠杆菌中表达的E6ScFv进行了复性和亲和层析纯化,并进一步证实: ①E6ScFv具有与hTNF-α结合的活性,其结合表位与亲本抗E6单克隆抗体(mAb)相同;②E6S cFv与hTNF-α的亲和常数为3.71×104 M-1;③E6ScFv具有中和hTNF-α细胞毒作 用的活性. 结论 以上结果有助于ScFv拮抗TNF-α的治疗.