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ELISA法研究四种金属烤瓷冠对人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2的影响
目的 观察镍铬等四种烤瓷冠基底合金浸提液对人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2的影响.方法 在人牙龈成纤维细胞体外培养系统中加入镍铬合金、钴铬合金、纯钛、金合金的浸提液,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞在浸提液中培养1、6、12、24h细胞分泌PGE2的量.结果 前列腺素E2在镍铬合金、钴铬合金组表达水平高于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；在纯钛、金合金组表达与阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镍铬合金、钴铬合金促进人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2,而纯钛、金合金不影响其分泌.
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烤瓷牙基底冠合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-13表达的实验研究
目的 观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP -2、MMP - 13表达水平的影响.方法 制备镍铬、钴铬、纯钛和金合金浸提液,改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞,1、6、12、24h分别收集四种浸提液处理后的细胞上清液,ELISA法测定MMP - 13表达水平.结果 镍铬合金、钴铬合金组MMP - 13表达水平高于其他实验组和阴性对照组(P＜0.05),差异有统计学意义；纯钛、金合金组MMP - 13表达水平与阴性对照组比较(p＞0.05)差异无统计学意义.结论 镍铬合金、钴铬合金上调MMP - 13表达水平,对人牙龈成纤维细胞损伤大；纯钛、金合金具有良好的生物相容性.
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EGFR在人牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的研究
成纤维细胞是人牙龈及牙周膜中的主要细胞类型, 在维持牙龈组织的结构完整、牙周膜的更新、牙周组织损伤后的再生及牙周组织自身结构的稳定等方面具有重要作用.两种部位来源的成纤维细胞虽然形态相似, 但功能上明显不同, 目前尚无明确鉴定它们的细胞标记物.为此,我们研究了表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在人牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast, GF)和牙周韧带细胞(periodontal ligament cell, PDLC)中的不同表达.
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人牙龈成纤维细胞对甲硝唑的跨膜转运
目的:研究人牙龈成纤维细胞对甲硝唑的跨膜转运,并初步探讨转运的影响因素及牙周局部给药和人工种植牙给药的可行性.方法:将人牙龈成纤维细胞与甲硝唑共同孵育1、5、10、15min后,弃去细胞外药液,收集各时间点细胞,用高效液相色谱法测定细胞内药物含量,用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果:(1)人牙龈成纤维细胞内甲硝唑含量分别为0.940±0.408 ng/μg(药物浓度:20ug/ml)和1.977±0.266 ng/μg(药物浓度:40 μg/ml).不同加药浓度和孵育时间下,甲硝唑的转运量差异有显著性(P＜0.01).(2)高效液相色谱法可以准确测定细胞内甲硝唑的含量.结论:(1)人牙龈成纤维细胞具有转运甲硝唑的能力,药物浓度和药物孵育时间会影响转运量,这证实了牙周局部给药和人工种植牙给药的可行性.(2)高效液相色谱法可以准确,灵敏地测定细胞内药物的含量.
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有机离子转运体mRNA在人牙龈成纤维细胞上的表达
目的:检测有机阳离子转运家族及有机阴离子转运家族在人牙龈成纤维细胞的表达,并探讨其在人牙龈成纤维细胞主动转运中的作用.方法:采用RT-PCR法检测有机阳离子转运体家族成员OCT1-3,OCT6,OCTN1-2及有机阴离子转运体家族成员OAT1-4的mRNA在人牙龈成纤维细胞上的表达,其中检测OAT1-4时以人肾组织作阳性对照.结果:人牙龈成纤维细胞有OCT1、OCT2、OCTN1及OAT1-4mRNA的表达.结论:证实了人牙龈成纤维细胞存在有机阳离子转运体及有机阴离子转运体的推测.
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人牙龈成纤维细胞和牙周膜韧带细胞多向分化潜能的比较
目的 体外培养人牙周膜韧带细胞(HPDLCs)和人牙龈成纤维细胞(HGFs),对比两者成骨、成软骨以及成脂的多向分化潜能的差异.方法 运用酶消化结合组织块法体外培养HPDLCs和HGFs,选择生长状态良好的3~4代HPDLCs和HGFs,进行成骨、成软骨、成脂诱导,未分化诱导的细胞作为对照组.分别用茜素红染色、油红O染色以及阿利新蓝染色分别检测两种细胞的成骨、成软骨及成脂分化能力.半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLCs和HGFs中相关标志基因骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col 1)、runt相关转录因子2(RUNX2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)、X型胶原蛋白(Col 10)mRNA的表达.结果 成骨诱导两种细胞培养至28 d时,细胞周围均有红染钙结节形成,HPDLCs形成的钙结节明显多于HGFs;成软骨诱导两种细胞14 d时均可见胞质蓝染的细胞,HGFs较HPDLCs明显;成脂诱导两种细胞21 d时,可见红色脂肪滴形成,HPDLCs形成的脂肪颗粒明显少于HGFs.HGFs和HPDLCs分化培养7 d和14 d后,均有OCN、Col 1、RUNX2、PPARγ2和Col 10的表达,在14 d时的表达均高于 7 d;HPDLCs 中 OCN、Col 1、RUNX2 的表达高于 HGFs,PPARγ2、Col 10 的表达低于 HGFs(均 P<0.05).结论 HPDLCs的成骨能力较HGFs强,成软骨和成脂能力较HGFs弱.
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体外诱导人牙龈成纤维细胞多向分化潜能的实验研究
目的：探索人牙龈成纤维细胞（hGFs）是否具有多向分化潜能，为组织工程学提供新的细胞来源。方法经志愿者知情同意后收集健康牙龈组织，组织块法培养hGFs。取第3代hGFs进行成骨、成软骨和成脂诱导，未分化诱导的细胞为对照组。分别用碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色、阿利新蓝染色、油红O染色检测细胞成骨、成软骨和成脂能力。实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中成骨分化标志基因ALP、runt相关转录因子2（Runx2）、成软骨分化标志基因聚集蛋白聚糖（AGR）和成脂分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）的表达。结果成骨诱导组培养至7 d时ALP染色可见大量的蓝紫色沉淀，28 d时细胞周围有大量红染的钙结节沉积，而对照组无钙结节,培养至14 d细胞中ALP和Runx2表达明显高于对照组（P<0.01）。14 d时成软骨诱导组阿利新蓝阳性，成脂诱导组可见红色的脂肪滴，而对照组2种染色为阴性，AGR、PPARγ2表达均明显高于对照组（P<0.01）。结论 hGFs具有成骨、成软骨和成脂分化的多向分化潜能。
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钴铬合金与钛合金修复材料的细胞相容性研究
目的 研究2种牙科金属材料钴铬合金、钛合金浸提液对人牙龈成纤维(HGF)细胞的细胞相容性.方法 以钴铬合金、钛合金的浸提液培养HGF细胞,以含10%胎牛血清的DMEM培养基作为空白对照.采用MTT法在细胞水平评价2种牙科金属材料的细胞毒性,使用试剂盒检测细胞中还原型谷胱甘肽(rGSH)的含量,采用ELISA法检测2种牙科金属材料浸提液对HGF细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌的影响,采用实时PCR(real-time PCR)在基因水平检测2种牙科金属材料浸提液对HGF细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达的影响.结果 钴铬合金组抑制了HGF细胞增殖,与空白对照组差异有统计学意义,钛合金组促进了HGF细胞增殖.与空白对照相比,钴铬合金组抑制了HGF细胞rGSH的产生(P＜0.05),促进了HGF细胞TNF-α的分泌(P＜0.05),而钛合金对HGF细胞rGSH产生、TNF-α分泌没有明显影响;钴铬合金组caspase-3的基因表达高于空白对照组(P＜0.05),而钛合金对caspase-3基因表达无明显影响.结论 钴铬合金对HGF细胞具有一定的细胞毒性,而钛合金细胞相容性良好.
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内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶的影响
目的 观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶-1,3量的影响,探讨基质金属蛋白酶在牙周炎致病机制中的可能作用.方法 通过改良酶消化组织块法进行牙龈成纤维细胞的原代培养,用内毒素对其进行刺激,运用MTT法观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性的影响,通过免疫组化法检测内毒素对牙龈成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1,3的影响.结果 MTT结果显示,低浓度内毒素在短期内可以促进牙龈成纤维细胞的增殖,但随着时间的延长,也表现为对细胞的毒性作用,抑制其增殖;高浓度内毒素抑制牙龈成纤维细胞的增殖;免疫组化研究结果表明,未受LPS刺激的牙龈成纤维细胞MMP-1,3表达弱阳性,受刺激后阳性表达增强,在12h时达到顶峰,且MMP-3的整体表达较MMP-1弱.结论 LPS可以影响牙龈成纤维细胞的增殖活性;LPS可以促进牙龈成纤维细胞对基质金属蛋白酶的分泌,加快牙周细胞外基质的降解,加速牙周炎的进程.
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富自体CGF纤维蛋白膜对人牙龈成纤维细胞黏附及增殖的影响
目的 观察富自体CGF纤维蛋白膜对人牙龈成纤维细胞黏附及增殖的影响,探讨CGF纤维蛋白膜作为生物膜和组织工程支架材料的可能性.方法 于河北医科大学口腔医院口腔颌面外科门诊切取人正常牙龈组织,组织块贴壁培养法原代培养,鼠抗人波形蛋白、角蛋白鉴定.取第3代人牙龈成纤维细胞分别接种于富自体CGF纤维蛋白膜及Bio-Gide膜上培养.接种培养2天、5天MTT法测定人牙龈成纤维细胞增殖,接种培养5天后HE染色组织学观察、扫描电镜观察.结果 人牙龈成纤维细胞在两种膜上均能黏附、增殖;接种培养第5天,人牙龈成纤维细胞在富自体CGF纤维蛋白膜上较Bio-Gide膜增殖明显(P＜0.05).结论 富自体CGF纤维蛋白膜有利于人牙龈成纤维细胞黏附,能明显促进其增殖,有望成为组织缺损修复的生物膜及组织工程支架材料.
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纯钛表面不同处理对人牙龈成纤维细胞增殖的影响
目的 通过比较不同处理纯钛表面对人牙龈成纤维细胞粘附及增殖的影响,探讨更有利于其附着的种植体颈部表面处理方法.方法 制备直径10mm、厚度1mm,Ra 0.8μm的纯钛片,按表面处理方法分为三组,A组:TiO2喷砂双重酸蚀组,B组:Al2O3喷砂双重酸蚀组,C组:光滑组.将体外培养的人牙龈成纤维细胞分别接种于各组钛片表面,扫描电镜观察人牙龈成纤维细胞形态与分布,MTT法测定各组钛片表面人牙龈成纤维细胞的增殖活性.结果 AB两组纯钛表面细胞密集,胞体丰满,伸展良好,伪足多而长,粗糙表面布满细胞外基质.MTT测得光密度值A组＞B组＞C组(P＜0.05),差异有统计学意义,且每两组间均有差异.结论 喷砂粗化双重酸蚀表面处理的纯铁表面有利于人牙龈成纤维细胞的粘附生长且TiO2喷砂处理更优.
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三种药物对牙龈成纤维细胞的毒性研究
目的 研究不同排龈药物对人牙龈成纤维细胞(HGF)的毒性作用.方法 将3种排龈药物(20％硫酸铝、15.5％硫酸铁、0.1％盐酸肾上腺素)分别作用于体外培养的HGF,MTT比色测定细胞活性.结果 抑制增殖能力由大到小分别是13.3％硫酸铁、5％硫酸铝、0.01％盐酸肾上腺素.结论 硫酸铁细胞毒性大,0.01％盐酸肾上腺素细胞毒性作用小.
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高糖状态下人牙龈成纤维细胞增殖与分泌功能的相关性研究
目前，种植修复是牙齿缺失的首选治疗方法。种植体的长期稳定性不仅要求有良好稳定的骨结合，种植体颈部的牙龈组织结合界面亦是维持长期稳定性的关键。种植体-牙龈组织界面有类似天然牙上皮附着的结构，形成紧密的上皮结合，成为一种功能性生物封闭屏障，通常认为这一屏障主要是由牙龈结合上皮、牙龈纤维黏附于种植体表面而形成［1］。人牙龈成纤维细胞是人体牙龈组织的主要构成细胞，参与牙周组织的形成与再生，维护牙周组织的完整性与功能，其分泌Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白和纤维黏连蛋白是牙龈软组织附着于种植体表面的重要黏连蛋白［2］。
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不同葡萄糖浓度对人牙龈成纤维细胞在钛表面附着和生长的影响
随着人们经济水平的大幅提高和糖尿病发病率的增长，在要求种植修复缺失牙齿的人群中糖尿病患者的比例不断提高，而糖尿病是影响种植修复成功的风险因素之一［1］。以往学者［2］研究糖尿病对种植修复的影响大多集中在骨整合方面，而糖尿病对牙龈组织在种植体表面黏附结合的影响的相关研究却鲜有报道。本研究在体外模拟高血糖环境，配制不同葡萄糖浓度细胞培养液培养人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGFs）并接种于纯钛表面，观察不同培养时间HGFs的附着数量和生长形态的变化，以期指导口腔医师在临床实践中为糖尿病患者选择正确的种植修复时机提供理论参考。
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IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞TRAF6表达
目的 观察白细胞介素1β(IL-1β)干预人牙龈成纤维细胞中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达水平,为研究细胞因子对牙周组织的调控作用提供理论依据.方法 采用原代培养的人牙龈成纤维细胞,取3～8代细胞以不同浓度IL-1β进行于预,24 h后观察干预后人牙龈成纤维细胞形态学变化,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在各组细胞中的表达:结果IL-1β干颅后,人牙龈成纤维细胞形态改变不明显;免疫组化结果显示,以0.1、0.5、1、5、10 ng/mL的IL-1β干预后,细胞中TRAF6呈阳性表达.并且随IL-1β干预浓度升高而增强,TRAF6蛋白表达量吸光度分别为(0.15±0.012)、(0.19±0.010)、(0.20±0.008)、(0.24±0.010)、(0.27±0.011).两两比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 TRAF6表达水平变化提示,TRAF6可能是参与牙龈成纤维细胞功能调控的重要信号分子.
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骨形态发生蛋白2联合地塞米松对人牙龈成纤维细胞增殖及成骨分化的影响
背景：利用人牙龈成纤维细胞和细胞因子相结合是修复牙周组织缺损的一个新的研究热点。
目的：观察骨形态发生蛋白2联合地塞米松对体外培养的人牙龈成纤维细胞的细胞增殖及成骨分化的影响。方法：培养至第3代的人牙龈成纤维细胞分5组培养：DMEM组、基础骨诱导组、基础骨诱导+地塞米松组、骨诱导+骨形态发生蛋白2组，骨诱导+地塞米松+骨形态发生蛋白2组。MTT法检测各组细胞增殖情况，碱性磷酸酶染色、茜素红染色及反转录多聚酶链反应检测各组细胞的成骨分化情况。
结果和结论：人牙龈成纤维细胞具有成骨分化的潜能，骨形态发生蛋白2、地塞米松对人牙龈成纤维细胞的细胞增殖无明显影响，单独及联合应用地塞米松、骨形态发生蛋白2能够促进人牙龈成纤维细胞的碱性磷酸酶活性和钙结节的形成，其中两者联合的作用更强，而且后者能明显促进成骨相关基因的表达，提示两者联合更有效地促进人牙龈成纤维细胞成骨分化。 -
4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达
背景:研究显示,纯钛材料对人牙龈成纤维细胞的影响不明显,而镍铬合金、含钛镍铬合金明显影响了细胞的炎性表达.目的:比较4种烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的影响.方法:用组织块法分离培养人牙龈成纤维细胞,实验组分别用4种烤瓷冠基底合金浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养液中,空白对照组用含体积分数10%小牛血清的DMEM培养液,Western-blot法检测人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的改变.结果与结论:金合金组对Bcl-2和Bax表达的影响接近空白对照组,纯钛组和钴铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响较小,镍铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响大,与其他各组相比差异有显著性意义(P < 0.05).提示镍铬合金可通过影响Bcl-2与Bax的表达水平,抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,促进细胞凋亡.
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葡萄糖浓度对人牙龈成纤维细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及纤维粘连蛋白影响研究
目的 探讨不同浓度葡萄糖对人牙龈成纤维细胞分泌Ⅰ (COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3)及纤维粘连蛋白(FN)的影响.方法 分别于5.5、7.0、8.8、10.0、15.0、20.0 mmol/L的葡萄糖溶液中培养人牙龈成纤维细胞3～7d,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定其分泌COL1、COL3及FN的量.结果 人牙龈成纤维细胞培养3d后,葡萄糖浓度高于10.0 mmol/L时,COL1的分泌量减少;高于15.0 mmol/L时,COL3的分泌量减少;FN与COL3情况相似.培养7 d后,葡萄糖浓度高于10.0 mmol/L时,COL1、COL3及FN的分泌量均减少.结论 随着葡萄糖浓度的增高,人牙龈成纤维细胞分泌COL1、COL3及FN的量均有减少趋势,且高糖条件下更为明显.
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金属基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-3表达的实验研究
目的 观察不同种类烤瓷冠金属基底合金浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP-1、MMP-3表达水平的影响.方法 制备镍铬合金、纯钛、金铂合金金属浸提液,组织块法培养人牙龈成纤维细胞,等量金属浸提液置换细胞培养液24 h,分别在1、6、13、24 h收集上清液,ELISA法测定MMP-1、MMP-3表达水平.结果 (1)MMP-1、MMP-3在镍铬合金组的表达水平明显高于其他实验组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)MMP-1、MMP-3在纯钛、金铂合金组的表达水平与空白组有差异,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镍铬合金对人牙龈成纤维细胞损伤大,纯钛、金铂合金具有良好的生物相容性.
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丹皮酚对TNF-α诱导的人牙龈成纤维细胞黏附分子表达水平的影响
目的:研究丹皮酚(Paeonol,Pae)对TNF-α诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)黏附分子表达水平的影响.方法:使用50 ng/mL的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α诱导刺激人牙龈成纤维细胞,后分别加入浓度为0、50、100、200 mmol/L的Pae孵育培养2、4、6天后,用Western blot法检测细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM)-1以及血管细胞黏附分子(vascularcell adhesion molecule,VCAM)-1的蛋白表达水平,用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测黏附分子的mRNA表达水平.结果:TNF-α诱导的人牙龈成纤维细胞ICAM-1和VCAM-1的蛋白和mRNA表达水平均显著高于空白对照组(P＜0.05);不同浓度的丹皮酚可显著降低TNF-α诱导的人牙龈成纤维细胞ICAM-1和VCAM-1的蛋白和mRNA表达(P＜0.05),且随Pae浓度的升高逐渐减少.当Pae浓度达到100 mmol/L,蛋白和mRNA表达水平的抑制效果达到稳定程度(P＞0.05),当Pae浓度达到200 mmol/L时,ICAM-1和VCAM-1 mRNA抑制效果达到诱导前的水平(P＞0.05).诱导时间的长短对蛋白和mRNA表达水平抑制效果没有显著影响(P＞0.05).结论:丹皮酚可显著降低TNF-α诱导的人牙龈成纤维细胞黏附分子表达水平.
