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20～40nm银的体外生物安全性研究
目的:本课题组之前的实验结果提示纳米银具有强有力的杀菌作用,本实验将探讨纳米银的体外生物安全性.方法:将人牙龈成纤维细胞与0.1％、0.5％、1.0％、1.5％和2％的纳米银—PLGA载体共同培养一定的时间,利用MTT法检测人牙龈成纤维细胞的增殖情况,并在骨向诱导培养基条件下分析人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性.结果:与对照组相比,人牙龈成纤维细胞的增殖情况在不同浓度的纳米银—PLGA组未出现明显减少,各组间也无明显差异.在骨向诱导培养条件下,人牙龈成纤维细胞表现出一定碱性磷酸酶活性,并且该活性未收到各浓度纳米银的影响.结论:本研究所采用的20～40 nm银对人牙龈成纤维细胞具有良好的体外生物安全性.
关键词： 20～40纳米纳米银 人牙龈成纤维细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶 生物安全性 -
尼古丁和烟草浸提液对人牙龈成纤维细胞生长和贴附能力的影响
目的:体外观察尼古丁和烟草浸提液(ST)对人牙龈成纤维细胞的生长和贴附影响.方法:用不同浓度的尼古丁和ST作用于人牙龈成纤维细胞,用MTT法检测细胞的生长和贴附情况.结果:随尼古丁和ST浓度的增加,细胞的生长率逐渐下降,尼古丁和ST对细胞生长半抑制浓度(IC50)分别为 0.095 g/L和11.88 g/L; 与对照组相比,当尼古丁及ST浓度分别大于0.01 g/L和6.2 g/L时差异有显著意义.而对细胞贴附的影响表明,随着尼古丁和ST浓度的增加,细胞的贴附率逐渐下降,尼古丁和ST对细胞贴附的IC50分别是0.6 g/L和10.33 g/L;与对照组相比,当尼古丁及ST浓度分别大于0.1 g/L和12.4 g/L时差异有显著意义.结论:尼古丁和浸提取液均可抑制人牙龈成纤维细胞的生长和贴附,提示尼古丁和烟草在牙周病发病中起作用.
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人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征
目的:探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨.方法:分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞.通过倒置显微镜活体观察,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察.结果:消化培养法成功率低于组织块培养法.光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似.免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞.生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高.结论:组织块培养法适用于此二种细胞的培养.细胞生物学特征方面有许多相似形,提示这两种细胞来于同一个细胞群.
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Nd:YAG 激光与根面平整对牙龈成纤维细胞在根面附着的影响
目的:为探讨Nd:YAG激光照射对牙周病患牙根面的生物相容性影响.方法:应用体外细胞培养技术,观察激光照射等处理根面的不同方式对人牙龈成纤维细胞(Human gingival fibroblast, HGF)附着的影响.结果:Nd:YAG激光照射+根面平整组,成纤维细胞接种24h后的附着量明显高于单纯Nd:YAG激光照射组和单纯根面平整组(P<0.05).而单纯激光照射组(80mj/mm2)和单纯根面平整组细胞附着量又明显大于未处理组(P<0.05).结论:用一定能量密度的Nd:YAG激光照射与根面平整术联合应用可提高HGF在患牙根面上的附着量.
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ADAM28对人牙龈成纤维细胞表达CAP、OPN的影响
目的：研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS?ODN）和正义对照（S?ODN）对人牙龈成纤维细胞（ HGFs）表达牙骨质附着蛋白（ CAP）和骨桥蛋白（ OPN）的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28对HGFs表达CAP、OPN的影响。结果：ADAM28 AS?ODN转染HGFs后，细胞内CAP、OPN的表达显著降低（P＜0.05），ADAM28 S?ODN转染HGFs后，细胞内CAP、OPN的表达显著升高（P＜0.05）。结论：ADAM28 AS?ODN可有效封闭HGFs内CAP、OPN的表达。
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 人牙龈成纤维细胞 免疫细胞化学 -
淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对体外培养人牙龈成纤维细胞的作用
目的:探讨不同浓度淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素对细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)产生前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响.方法:以培养的人牙龈成纤维细胞为实验模型,用MTT试验检测淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对牙龈成纤维细胞毒性作用的效果,初步筛选其作用浓度;然后用酶联免疫法检测三种提取物对LPS刺激牙龈成纤维细胞产生重要的骨吸收因子PGE2的影响.结果:LPS对HGF有明显的细胞毒性,三种提取物均可显著提高细胞成活率.LPS作用6 h后培养上清中PGE2含量上升,而同时加入淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素各浓度组PGE2含量显著低于对照组(p<0.01).结论:淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素均可抑制LPS对HGF的细胞毒性作用,并且可抑制LPS刺激HGF产生PGE2.
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静磁场对人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响
目的:研究不同磁路设计的磁性附着体所产生静磁场对人牙龈成纤维细胞酶学的相关作用.方法:使用自主设计的磁场加载系统,产生不同强度的静磁场,对体外培养的人牙龈成纤维细胞进行不同时间的磁场加载.通过与对照组的比较,探讨磁场对该类细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:改变加载强度(120 mT、10 mT、0mT)或加载时间(1、3、5个加载周期),静磁场对人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性均无显著性影响(P＞0.05).结论:静磁场对牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性没有影响,初步提示开放及闭合磁路系统磁性附着体所产生静磁场,对牙龈成纤维细胞的相关酶不存在生物学效应.
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糖基化终产物对人牙龈成纤维细胞2种基质金属蛋白酶表达的影响
目的 研究糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)表达基质金属蛋白酶-1(matrix matelloproteinase-1,MMP-1)和基质金属蛋白酶-8(matrix matalloproteinase-8,MMP-8)的影响,探讨糖尿病加速牙周炎发展的可能机制.方法 将培养的HGF随机分成6组:空白对照组只加入培养液;阴性对照组仅加入含50 μg/mL人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的培养液;4个含AGE-HSA的实验组分别加入含0.5、5、50、100 μg/mL AGE-HSA的培养液.培养24、48、72 h后,分别应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,QPCR)检测细胞MMP-1、MMP-8的蛋白和mRNA表达.结果 100 μg/mL AGE-HSA组培养24、48和72 h后,MMP-1水平明显高于阴性对照组、空白对照组及0.5μg/mL AGE-HSA组,差异具有统计学意义(P＜0.05).各浓度AGE-HSA组MMP-1 mRNA水平均显著高于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).各浓度AGE-HSA组MMP-8水平与阴性对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05),MMP-8 mRNA表达均为阴性.结论 AGEs可能通过促进HGF合成MMP-1,介导胶原降解,从而加重糖尿病患者的牙周组织破坏,尚不能说AGEs影响MMP-8的表达.
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人牙髓细胞与牙龈成纤维细胞cDNA消减文库的构建
目的 建立人牙髓细胞(human dental pulp cell,HDPC)和人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)cDNA消减文库.方法 体外培养HDPC和HGF,分别提取mRNA并反转录为cDNA,应用基于PCR的改良消减杂交技术建立HDPC和HGF cDNA消减文库.结果 成功构建了HDPC和HGF cDNA消减文库,文库容量为4×102.结论 基于PCR的改良消减杂交技术是建立消减文库、寻找差异表达基因的一种高效方法,该消减文库的建立为进一步在分子水平研究牙髓细胞的生长、分化机理奠定了基础.
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重组质粒pcDNA3/sIL-1R(Ⅰ)转染牙龈成纤维细胞的瞬时表达检测
目的检测以sIL-1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3/sIL-1R(Ⅰ)对人牙龈成纤维细胞的转染效率及瞬时表达量,为pcDNA3/sIL-1R(Ⅰ)导入动物牙龈组织提供依据.方法人牙龈成纤维细胞体外原代培养并传代,重组质粒用脂质体包裹介导进行体外转染.ELISA法对重组质粒在人牙龈成纤维细胞的表达产物进行含量检测.结果 sIL-1R(Ⅰ)在基因转染24 h内开始表达,72 h高,转染组细胞培养液和细胞冻融液中sIL-1R表达量均显著高于对照组(P＜0.05),1周后表达逐渐减弱,2周后仍有少量表达.结论通过脂质体介导的基因转染方法,重组质粒pcDNA3/sIL-1R(Ⅰ)在人牙龈成纤维细胞系中具有表达功能,并且其胞外及胞内均具有特异性表达产物.
关键词： 人可溶性白细胞介素-1受体 人牙龈成纤维细胞 体外转染 -
rhBMP-2对人牙龈成纤维细胞体外矿化能力的影响
目的探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对人牙龈成纤维细胞(GF)体外矿化能力的影响.方法以组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞,分别以含或不含rhBMP-2的矿化培养液长期培养,以倒置显微镜观察细胞生长状况.于培养第7天检测碱性磷酸酶(ALP)活性.于培养第30天行von Kossa染色观察矿化结节.结果 rhBMP-2提高GF的ALP水平,呈剂量依赖性,并能够刺激GF在体外形成矿化结节.结论 rhBMP-2能够诱导人GF向成骨细胞表型分化.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 人牙龈成纤维细胞 碱性磷酸酶 成骨表型 -
人釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG在人牙龈成纤维细胞表达的研究
目的研究釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG在人牙龈成纤维细胞(GFB)中的表达,为牙周再生的基因治疗奠定基础.方法采用酶解-组织块法体外培养得到人牙龈成纤维细胞,用釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG瞬时转染牙龈成纤维细胞,分别在第48小时、第5天、第7天、第14天收集细胞及细胞液,经ELISA连续测定釉原蛋白的表达.结果转染后48小时即检测到表达产物,表达量在第5天和第7天达到高峰,持续到第14天仍可检测到釉原蛋白的表达.结论实验结果为利用牙龈成纤维细胞为靶细胞,将釉原蛋白基因直接导入牙龈成纤维细胞内实现牙周再生的体内基因治疗奠定了基础.
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结缔组织生长因子对支架中培养人牙龈成纤维细胞的作用
目的：探讨人牙龈成纤维细胞合成结缔组织生长因子对促进其分泌Ⅰ型胶原的作用。方法将人牙龈成纤维细胞与壳聚糖／明胶／卡拉胶支架材料复合培养，以培养基中是否加入抗结缔组织生长因子抗体分为实验组和对照组，采用ELISA法检测并比较两者培养孔中上清液Ⅰ型胶原和结缔组织生长因子的浓度。结果加入抗结缔组织生长因子抗体的实验组上清液中的Ⅰ型胶原含量和结缔组织生长因子含量均小于未加抗结缔组织生长因子抗体的对照组，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论人牙龈成纤维细胞与壳聚糖／明胶／卡拉胶支架复合培养时，可以通过分泌结缔组织生长因子来促进Ⅰ型胶原的产生。
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机械压应力对人牙龈成纤维细胞表达钙网蛋白的影响
目的:探究机械压应力作用下不同时间人牙龈成纤维细胞(HGFs)钙网蛋白(CALR)的表达.方法:采用组织块培养法培养HGFs,将细胞接种在PLGA膜上,采用重物加载方式对其施加25 g/cm2的压应力,按加力时间不同分为0h组(对照组)、6h组、24 h组、48 h组、72 h组,分别采用荧光定量PCR法(qPCR)和western blotting法检测各组CALR基因和蛋白表达量.结果:随着加力时间的延长,CALR基因和蛋白表达量升高,在24 h时升至高,随后逐渐降低.结论:机械压应力可使HGFs中CALR表达上调,且随着加力时间的延长CALR表达水平增高,到达峰值后下降.
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水蛭素对压应力作用下牙龈成纤维细胞胶原纤维Ⅰ和基质金属蛋白酶1表达的影响
目的:研究压应力对人牙龈成纤维细胞(HGFs)生物学行为的影响及不同浓度水蛭素对压应力作用下HGFs胶原纤维I(COL-I)和基质金属蛋白酶1(MMP 1)表达的影响.方法:建立HGFs压应力作用模型,MTT法检测压应力对细胞增殖活性的影响.采用RT-qPCR和ELISA两种方法检测不同压应力作用下的HGFs及不同浓度水蛭素作用下的HGFs受力后COL-I、MMP-1的表达.结果:3 g/cm2力值刺激细胞增殖效果为显著(P＜0.05).压应力作用HGFs后,上调COL-I和下调MMP-1的表达(P＜0.05).水蛭素作用压应力刺激的HGFs后,可抑制COL-I和促进MMP-1的表达(P＜0.05).结论:压应力刺激促进HGFs增殖,影响牙龈组织细胞外基质(ECM)的代谢.水蛭素抑制ECM胶原的沉积,促进胶原的降解,进而促进正畸牙移动过程中牙龈的改建.
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蜂胶与氢氧化钙单独用药的细胞毒性研究
目的:研究蜂胶与氢氧化钙(Ca(OH)2)对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性作用.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别评价蜂胶与Ca(OH)2溶液对人牙龈成纤维细胞相对增殖率的影响,用五级毒性分类法评级,并对结果进行统计分析.结果:0.1%～0.6%蜂胶与Ca(OH)2各稀释溶液毒性级均为1～2级,二者之间无显著性差异.结论:蜂胶与Ca(OH)2均对人牙龈成纤维细胞的毒性较小,是治疗口腔疾病的安全药物.
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超声微泡造影剂介导pEGFP-N_1质粒转染HGFs的实验研究
目的 探讨超声破坏微泡介导pEGFP-N_1质粒转染人牙龈成纤维细胞的可行性、优化转染的条件及转染效率.方法 体外原代培养HGFs.以pEGFP-N_1质粒为报告基因,微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N_1转染HGFs.实验组分为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组,超声+微泡+质粒组按不同的转染条件分成亚组.转染48 h后倒置荧光显微镜下观察GFP的表达,MTT检测HGFs活性.结果 超声微泡介导pEGFP-N_1质粒对HGFs的转染效率明显高于其他实验组(P<0.05).优化转染条件后,频率300 KHz,声强1.5 W/cm~2,连续波,辐照时间60 s,微泡浓度10%,质粒浓度6.67 μg/ml时,转染率较高.结论 在一定条件下,超声微泡造影剂能够促进外源基因对HGFs的转染.
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蜂胶对牙龈卟啉单胞菌及牙龈成纤维细胞的影响
目的 了解蜂胶对牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingival,Pg)生长的抑制作用及对人牙龈成纤维细胞的毒性作用.方法 采用液体稀释法测定蜂胶对Pg的小杀菌浓度(MBC),用MTT法测定不同浓度蜂胶作用24 h后牙龈成纤维细胞的细胞相对增殖率(RGR),了解蜂胶作用24 h后细胞连续7 d的增殖同复情况.结果 蜂胶对Pg的MBC为1.56 g/L,相当于0.125～0.25 mg/L的奥硝唑.蜂胶浓度为MBC时RGR达到70%以上;4 g/L蜂胶组的RGR为52.1%,作用细胞24 h后,连续7 d细胞数持续增加,吸光度逐渐接近阴性对照组.结论 蜂胶对Pg的生长有显著抑制作用,且细胞毒性较小,毒性作用可逆.
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热休克蛋白在白细胞介素-1β诱导人牙龈成纤维细胞损伤中的表达
目的：观察热休克蛋白（HSP）27、70和90在白细胞介素（IL）-1β诱导的人牙龈成纤维细胞（HGF）损伤过程中的表达。方法???原代培养人HGF，以蛋白质印迹技术检测不同质量浓度的IL-1β诱导后HSP27、HSP70、HSP90在HGF中的表达，运用细胞划痕实验观察HGF的体外迁移能力变化。结果???经IL-1β诱导后，HGF中HSP70和HSP90的表达量无明显变化，HSP27的表达量明显上调并随IL-1β诱导质量浓度的增加而增加。同时细胞划痕实验显示，随着HSP27表达量的增加，HGF的迁移能力明显降低。结论HSP在经IL-1β诱导的人HGF损伤过程中的表达情况各不相同，其中HSP27在IL-1β诱导的HGF炎症损伤中的表达升高，其表达量与HGF体外愈合能力呈负相关关系。HSP27在上皮炎症损伤中起着关键性的作用，但具体作用机制还有待进一步的研究。
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热休克蛋白27在烟草烟雾提取物介导的牙龈成纤维细胞损伤中的表达变化
目的：???观察在不同质量分数烟草烟雾提取物（CSE）干预下，热休克蛋白（HSP）27在人牙龈成纤维细胞（HGFs）损伤过程中的表达。方法???取原代培养并经过鉴定的3~8代HGFs，采用细胞划痕试验检测不同刺激质量分数（0、2.5%、5.0%、12.5%、25.0%、50.0%）的CSE对HGFs体外迁移的影响，并采用Western?blot方法检测HSP27在HGFs中的表达。结果???CSE质量分数越高，细胞的迁移能力越弱；HSP27在正常HGFs中呈弱阳性表达，在CSE刺激后的HGFs中呈强阳性表达，且随CSE质量分数的增高，HSP27的相对表达量有逐渐增高的趋势，与细胞迁移能力相反。结论???HSP27在CSE介导的HGFs损伤中表达升高，在CSE介导的上皮损伤中有重要作用。
