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ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞增殖、分化和凋亡的影响
目的 研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响并分析可能的作用机制.方法 采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸转染HDPC后对细胞生物学特性的影响.结果 ADAM28 AS-ODN组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著降低,凋亡细胞百分比明显上升.结论 ADAM28 反义核酸可显著抑制HDPC的增殖和ALP的活性,显著诱导HDPC的凋亡并影响细胞周期的变化.
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ADAM28反义核酸对人牙髓干细胞生物学特性的影响
目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙髓干细胞(HDPSCs)增殖、分化、凋亡特性的影响并分析可能的作用机制.方法:体外分离培养、鉴定HDPSCs,将FITC荧光标记的ADAM28反义核酸(AS-ODN)和正义对照(S-ODN)分别转染HDPSCs,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测ADAM28 AS--ODN转染48h后的封闭效率,应用四唑盐(M1vr)比色法,酶动力学法和流式细胞术(FCM)分别检测实验各组HDPSCs的增殖活性、碱性磷酸酶(AKP)的分泌活性以及细胞周期分布和凋亡百分比.采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析.结果:AS-ODN转染组ADAM28mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05),细胞增殖活性、增殖指数明显降低(P<0.05),碱性磷酸酶(AKP)分泌水平和细胞凋亡率显著增高(P<0.05).结论:ADAM28 AS-ODN可显著抑制HDPSCs的增殖并影响细胞周期的变化,促进AKP的分泌活性并诱导HDPSCs的凋亡.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 人牙髓干细胞 增殖 分化 凋亡 -
ADAM28反义核酸对人牙龈成纤维细胞生物学功能的影响
目的:研究金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase 28,ADAM28)反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)增殖、分化、凋亡的影响,并分析可能的作用机制.方法:采用细胞培养、基因转染、四甲基唑蓝(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸转染HGFs后对细胞生物学特性的影响.采用SPSS16.0软件包中的SNK检验对数据进行统计学分析.结果:ADAM28 AS-ODN组HGFs的增殖活性显著降低.AS-ODN组HGFs处于S期的细胞百分比显著低于S-ODN组和未转染组,G2+M期的细胞百分比显著低于未转染组,AS-ODN组的细胞增殖指数(PI=S+G2M)显著低于其他2组,差异显著.AS-ODN组碱性磷酸酶(ALP)分泌活性、凋亡细胞百分比显著升高.结论:ADAM28反义核酸可显著抑制HGFs的增殖,并影响细胞周期的变化,促进其分化,显著诱导HGFs的凋亡.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 人牙龈成纤维细胞 -
ADAM28反义核酸对人牙周膜干细胞增殖、分化和凋亡的影响
目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙周膜干细胞(HPDISC)增殖、分化、凋亡特性的影响和可能的作用机制.方法:体外分离培养、鉴定HPDISC,将设计合成的ADAM28反义核酸和正义对照(S-ODN)分别转染HPDLSC,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸对HPDLSC生物学特性的影响.采用SPSS13.0软件包中的SNK检验进行统计学分析.结果:ADAM28 AS-ODN组HPDLSC的增殖活性、增殖指数显著低于S-ODN组和未转染组,碱性磷酸酶(ALP)分泌水平及凋亡细胞百分比明显上升,差异显著(P<0.01).结论:ADAM28 AS-ODN可显著抑制HPDLSC的增殖并影响细胞周期的变化,促进ALP的分泌活性,显著诱导HPDLSC的凋亡.
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金属蛋白酶解离素28对人牙乳头细胞生物学特性的影响
目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:应用细胞培养、基因转染、MTT、流式细胞术(FCM)和酶动力学等方法,探讨ADAM28基因对HDPC生物学特性的影响,采用SPSS12.0软件包中的SNK检验进行统计学分析.结果:成功转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著高于空载体组、未转染组,而凋亡细胞百分比显著低于两对照组,P<0.01.结论:ADAM28可显著促进HDPC的增殖和ALP的分泌,显著抑制HDPC的凋亡.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 人牙乳头细胞 增殖 分化 凋亡 -
ADAM28真核表达质粒的构建及转染人牙囊细胞后的表达分析
目的:构建金属蛋白酶解离素28(ADAM28)真核表达质粒,转染人牙囊细胞(HDFC)后检测ADAM28在HDFC中的表达分布.方法:采用基因重组技术构建ADAM28真核表达质粒,通过细胞培养、脂质体Lipofectamine2000介导转染HDFC后,应用免疫荧光、RT-PCR及Western印迹检测ADAM28在HDFC中的表达.结果:成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDFC 72h后,检测证实真核质粒转染组的HDFC表达ADAM28蛋白,而2个对照组均无表达.结论:ADAM28在HDFC内能被正确翻译和表达,为进一步探讨其在牙源性细胞中的生物学功能奠定了基础.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 牙囊细胞 真核表达质粒 基因转染 -
ADAM28反义核酸对人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶的影响
目的:研究ADAM28反义核酸(AS-ODN)对人牙囊细胞(HDFCs)增殖和碱性磷酸酶(AKPase)活性的影响.方法:采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法和酶动力学方法,检测ADAM28反义核酸对牙囊细胞增殖、分化和影响碱性磷酸酶活性的可能机制.实验数据采用单因素方差分析的q检验(SNK)进行统计学分析.结果:ADAM28反义核酸成功转染人牙囊细胞,MTT和AKPase活性检测显示:ADAM28 AS-ODN组细胞增殖和AKPase活性均显著低于S-ODN组和空白对照组,其中MTT检测的组间P值分别为0.0002、0.0001,P均＜0.01;AKPase检测的组间P值分别为0.0007、0.0003,P均＜0.01,即ADAM28反义核酸可显著抑制HDFCs的增殖和AKPase的活性.结论:ADAM28可能通过参与Notch信号途径来促进牙囊细胞的增殖和分化.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 牙囊细胞 碱性磷酸酶 四唑盐比色法 -
ADAM28反义核酸对人牙囊细胞内ADAM28表达的影响
目的 探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙囊细胞(HDFC)内ADAM28蛋白表达的影响.方法 应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDFC后,通过免疫细胞化学、RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异.结果 ADAM28 AS-ODN转染HDFC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P＜0.01).结论 ADAM28 AS-ODN可有效封闭HDFC内ADAM28的表达.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 人牙囊细胞 表达差异 -
牙齿发育相关基因ADAM28在人牙乳头细胞中的定位分布研究
目的 探讨牙齿发育相关基因金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase 28,ADAM28)在人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)中的定位分布及作用.方法 应用基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ADAM28,通过细胞培养、基因转染HDPC后,采用免疫荧光、RT-PcR及Western blot检测ADAM28在HDPC中的表达分布.结果 成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDPC 72h后,HDPC的胞质和胞膜上均表达ADAM28蛋白,而两对照组均无表达.结论 ADAM28在HDPC内能被正确地翻译、表达,可能作为一种胞质蛋白调控着牙源性间充质细胞的增殖和分化.
关键词： 牙齿发育 金属蛋白酶解离素28 人牙乳头细胞 定位分布 真核表达 -
ADAM28反义核酸对体外培养小鼠牙胚发育的影响
目的 探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对体外培养的小鼠牙胚发育的影响.方法 建立Balb/c小鼠牙胚体外培养模型,利用ADAM28 AS-ODN抑制小鼠牙胚中ADAM28 mRNA的翻译,采用组织学和Western blot检测该抑制反应对牙胚发育的影响.结果 AS-ODN组部分成牙本质细胞出现坏死崩解、排列紊乱,髓腔内胶原纤维分泌较少.牙胚组织巾ADAM28的表达明显减弱.结论 ADAM28反义核酸可显著抑制发育牙胚的间充质细胞的增殖、成熟与分化,有效封闭牙胚组织中ADAM28的表达.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 牙胚发育 -
ADAM28对人牙龈成纤维细胞表达CAP、OPN的影响
目的：研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS?ODN）和正义对照（S?ODN）对人牙龈成纤维细胞（ HGFs）表达牙骨质附着蛋白（ CAP）和骨桥蛋白（ OPN）的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28对HGFs表达CAP、OPN的影响。结果：ADAM28 AS?ODN转染HGFs后，细胞内CAP、OPN的表达显著降低（P＜0.05），ADAM28 S?ODN转染HGFs后，细胞内CAP、OPN的表达显著升高（P＜0.05）。结论：ADAM28 AS?ODN可有效封闭HGFs内CAP、OPN的表达。
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 人牙龈成纤维细胞 免疫细胞化学 -
ADAM28反义核酸治疗牙根发育不良疾病的实验研究
目的:探讨金属蛋白酶解离素28 (ADAM28)反义核酸(AS-ODN)治疗牙根发育不良疾病(CHTR)的可行性和效果.方法:应用反义核酸技术、基因重组、动物实验和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测ADAM28 AS-ODN、S-ODN和真核质粒对CHTR的不同效应.结果:用药后AS-ODN组患牙松动度明显减轻,牙周袋深度显著变浅,COL-Ⅱ、IL-1β、PGE2水平均显著下降,呈现炎症愈合趋势；S-ODN组和真核质粒组各项检测结果正相反,炎症呈显著上升趋势.结论:应用ADAM28 AS-ODN (200 μmol/L)可有效治疗牙根发育不良疾病,但佳药物浓度和用药时间还需进一步探讨.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 牙根发育不良 -
ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞内ADAM28表达的影响
目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙乳头细胞(HDPC)内ADAM28蛋白表达的影响.方法:应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDPC后,通过免疫细胞化学、RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异.结果:ADAM28 AS-ODN转染HDPC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.01).结论:应用ADAM28 AS-ODN可有效封闭HDPC内ADAM28的表达,为进一步研究反义核酸在牙胚组织和细胞中的功能提供实验和理论依据.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 人牙乳头细胞 -
ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响
目的:研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)转染人牙乳头细胞(HDPC)后,对其表达多种细胞外基质蛋白(BSP、OPN、DSPP、CollagenⅠ/Ⅲ)的影响.方法:采用细胞培养、基凼转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测)ADAM28反义核睃对HDPC表达上述基质蛋白的影响.结果:ADAM28反义核酸转染HDPC后BSP、DSPP、Collagen Ⅰ的表达明显减弱(P＜0.01),OPN、CollagenⅢ的表达无明显变化(P＞0.05).结论:ADAM28反义核酸可有效封闭人牙乳头细胞内BSP、DSPP、Collagen Ⅰ的表达,ADAM28基冈对BSP、DSPP、Collagen Ⅰ的表达起显著的正向调节作用.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 人牙乳头细胞 免疫细胞化学 -
ADAM28基因在牙源性细胞中的表达分布
目的:探讨ADAM28在牙源性上皮和间充质细胞中的表达差异,明确其亚细胞定位情况.方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光和RT-PCR技术,从蛋白和基因水平检测ADAM28在人牙乳头细胞(HDPC)、牙囊细胞(HDFC)、牙髓干细胞(HDPSC)、牙周膜细胞(HPDLC)和颈环上皮细胞(HDCLEC)的表达分布.结果:ADAM28在上述五种细胞的胞浆和胞膜上均有强弱不等的阳性表达.结论:ADAM28可能作为一种胞浆蛋白调控着牙源性细胞的增殖与分化,在牙胚发育中起重要作用.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 牙源性细胞 免疫荧光 牙胚发育 -
持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28表达的影响
目的:研究持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28(ADAM28)表达的影响.方法:通过自制的细胞体外加载装置,将MG3T3-E1成骨样细胞分别施加50、100、150 kPa的持续静压力1 h,再分别培养24 h、48 h后,观察细胞在形态上的相应变化,并用免疫组织化学染色的方法检测受力作用后ADAM28的染色情况.结果:细胞受力后,其ADAM28免疫组化染色强度随压力值的增大而明显降低;加压后细胞培养24h和48h两组染色强度无明显差异.结论:不同大小的静压力可以影响成骨细胞系MC373-E1上ADAM28金属蛋白酶解离素28表达强度,进而影响骨改建.
关键词： 成骨细胞 持续静压力 金属蛋白酶解离素28
