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钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌电压依赖性钾通道的作用
采用膜片钳技术探讨哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞（BSMCs）电压依赖性钾离子通道（Ik）特性的变化和钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞膜Ik的作用。 材料与方法健康豚鼠25只，雌雄不限，体重约300～400 g，分为（1）哮喘组5只（25例细胞）；正常对照组7只（28例细胞），行外向峰值钾电流测定；（2）哮喘组6只（24例细胞）；正常对照组7只（25例细胞），应用钾通道开放剂（Cromakalim）前后钾通道动力学特性变化测定。 支气管平滑肌细胞分离：将两肺组织中3～4级支气管剪成碎块，加入0.25% 胰蛋白酶，洗涤后再加入0.1% 胶原酶消化，用尖端抛光的Pasteur吸管吹打，用200目不锈钢网滤过，用DMEM培养液反复冲洗，即可得到富含支气管平滑肌细胞的细胞悬液。将细胞悬液分装到涂有多聚赖氨酸的小平皿内，静置20 min，选择细胞膜完整、有立体感，胞体呈梭形的细胞用作通道记录。 离子通道记录：采用膜片钳技术的细胞贴附式和全细胞记录式。细胞外液（mmol/L）:NaCl 135、KCl 5、MgCl2 l、CaCl2 l、HEPES缓冲盐水10。记录用微电极电阻约为3 MΩ，单通道电流经膜片钳放大器放大，探头反馈电阻为10 MΩ。低通滤波器滤波频率为3 KHz。全细胞式记录采用负压抽吸式打通膜片。
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大鼠大脑皮层神经元上的延迟整流型钾离子单通道
延迟整流型钾通道在动作电位的复极化和时程控制以及绝对不应期的形成中充当重要角色.本文用细胞贴附式和内面向外式膜片箝技术研究了急性分离的SD大鼠大脑皮层神经元上延迟整流型钾通道的特性和阻断剂对其的作用,对推动钾通道的研究,了解皮层神经元电活动的规律有重要意义.
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豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的研究
哺乳动物耳蜗具有超常的敏感性和频率分析能力，这依赖于感觉细胞基底膜的微机械反 应。豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜存在电压依赖性K+通道、 Ca2+激活K+通道和内向 钙通道等。文献报道牛蛙壶腹嵴毛细胞有瞬息 K+电流(IA)，然而豚鼠耳蜗外毛细胞是 否存在IA，迄今未见报道。来自脑干的内侧橄榄耳蜗束传出神经纤维大量分布于外毛细胞 ，调控着外毛细胞的功能，一般认为乙酰胆碱是耳蜗传出神经递质，此外三磷酸腺苷(ATP) 对外毛细胞具有神经递质和神经调质双重作用，那么是否还有其他的递质发挥作用呢?我们 应用全细胞膜片钳技术观察了豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜的外向钾电流及乙酰胆碱和去甲肾上 腺素对Ca2+敏感的外向K+电流(Ik(ca))的影响。1 材料与方法 (1)豚鼠耳蜗外毛细胞的分离 选用耳廓反射正常的杂色豚鼠25只，雌雄不限，体重200～31 0 g。单离外毛细胞的制备参照Ashmore等的方法，将豚鼠迅速断头，取出两侧骨大泡，在人 工外淋巴液中打开听泡，剔除耳蜗骨壳，切下二至顶转耳蜗，放入含木瓜蛋白酶(Papain，0 ．5 g／L)的无钙人工外淋巴液中，在室温20～25℃条件下消化20 min，人工外淋巴液反复 冲洗二次以终止消化。在解剖显微镜下用不锈钢针将基底膜从蜗轴分离，此时单离毛细胞即 坠入液体中，静置20 min细胞贴附于浴槽底的盖玻片上。 (2)溶液及药品 人工外淋巴液(mmol/L)：NaCl 137；KCl 5．4；MgCl2 1．8；CaCl2 1．3；HEPES 5．0；Glucose 5．0。KOH调pH至7．2。 电极内液(mmol／L)：KCl l35；CaCl 2 0．1；HEPES 10；Glucose 10。用KOH调pH至7．3。实验在室温20～25℃进行。Papai n(Wako Pure Chemical lndustries，LTD)，tetraethylammonium(TEA，sigma公司)，4-a minopyridine(4-AP，sigma公司)。
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尼古丁和烟草浸提液对人牙龈成纤维细胞生长和贴附能力的影响
目的:体外观察尼古丁和烟草浸提液(ST)对人牙龈成纤维细胞的生长和贴附影响.方法:用不同浓度的尼古丁和ST作用于人牙龈成纤维细胞,用MTT法检测细胞的生长和贴附情况.结果:随尼古丁和ST浓度的增加,细胞的生长率逐渐下降,尼古丁和ST对细胞生长半抑制浓度(IC50)分别为 0.095 g/L和11.88 g/L; 与对照组相比,当尼古丁及ST浓度分别大于0.01 g/L和6.2 g/L时差异有显著意义.而对细胞贴附的影响表明,随着尼古丁和ST浓度的增加,细胞的贴附率逐渐下降,尼古丁和ST对细胞贴附的IC50分别是0.6 g/L和10.33 g/L;与对照组相比,当尼古丁及ST浓度分别大于0.1 g/L和12.4 g/L时差异有显著意义.结论:尼古丁和浸提取液均可抑制人牙龈成纤维细胞的生长和贴附,提示尼古丁和烟草在牙周病发病中起作用.
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高分子聚合材料表面润湿性对成纤维细胞贴附能力的影响
目的:研究高分子聚合体表面润湿性对成纤维细胞初期贴附能力的影响.方法:使用薄膜等离子体聚合法在圆形盖玻片表面生成六甲基二硅氧烷(Hexamethyldisiloxane,HMDSO)薄膜聚合体,然后用低温氧等离子体轰击聚合体表面,根据轰击时间的不同形成一系列的不同润湿性表面,将成纤维细胞系L929接种于不同润湿性表面,现察6h,12h时细胞的贴附率,并观察细胞的形态.结果:随着氧等离子体轰击时间的增加,HMDSO聚合体表面接触角从106°下降为0°,显示表面由高度憎水变为高度亲水.成纤维细胞在亲水表面较憎水表面有更高的早期贴附率,细胞伸展更充分.结论:高分子聚合体的表面润湿性对成纤维细胞的早期贴附和伸展有显著的影响.亲水性表面更有利于细胞的早期贴附和伸展.
