首页 > 文献资料
-
纳洛酮和内毒素对大鼠支气管平滑肌细胞内皮素-1和内皮素A受体基因表达的影响
目的观察纳洛酮对内毒素刺激的大鼠离体支气管平滑肌细胞内皮素-1和内皮素A受体基因表达的影响.方法分别用大肠杆菌内毒素O111:B4、内毒素和纳洛酮联合刺激离体培养的大鼠气管平滑肌细胞8 h后,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其内皮素-1和内皮素A受体mRNA基因表达水平.结果大鼠离体支气管平滑肌细胞在内毒素的作用下内皮素A受体mRNA基因高表达,同时还有一定量的内皮素-1mRNA基因表达;纳洛酮组大鼠离体支气管平滑肌细胞内皮素-1和内皮素A受体基因表达均明显减少.结论内毒素可刺激大鼠支气管平滑肌细胞高表达内皮素-1和内皮素A受体基因;纳洛酮对内毒素刺激的大鼠离体支气管平滑肌细胞内皮素-1和内皮素A受体基因表达有一定的抑制作用.
-
钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌电压依赖性钾通道的作用
采用膜片钳技术探讨哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞(BSMCs)电压依赖性钾离子通道(Ik)特性的变化和钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞膜Ik的作用。 材料与方法健康豚鼠25只,雌雄不限,体重约300~400 g,分为(1)哮喘组5只(25例细胞);正常对照组7只(28例细胞),行外向峰值钾电流测定;(2)哮喘组6只(24例细胞);正常对照组7只(25例细胞),应用钾通道开放剂(Cromakalim)前后钾通道动力学特性变化测定。 支气管平滑肌细胞分离:将两肺组织中3~4级支气管剪成碎块,加入0.25% 胰蛋白酶,洗涤后再加入0.1% 胶原酶消化,用尖端抛光的Pasteur吸管吹打,用200目不锈钢网滤过,用DMEM培养液反复冲洗,即可得到富含支气管平滑肌细胞的细胞悬液。将细胞悬液分装到涂有多聚赖氨酸的小平皿内,静置20 min,选择细胞膜完整、有立体感,胞体呈梭形的细胞用作通道记录。 离子通道记录:采用膜片钳技术的细胞贴附式和全细胞记录式。细胞外液(mmol/L):NaCl 135、KCl 5、MgCl2 l、CaCl2 l、HEPES缓冲盐水10。记录用微电极电阻约为3 MΩ,单通道电流经膜片钳放大器放大,探头反馈电阻为10 MΩ。低通滤波器滤波频率为3 KHz。全细胞式记录采用负压抽吸式打通膜片。
-
支气管哮喘的肾上腺素能受体及其药物治疗
目前已知呼吸道内至少有4种受体,即α受体、β受体、Η受体和Μ受体,这4种受体都与呼吸功能有关。β2受体的基因已被克隆和序列化,目前已被证实,人类β2受体基本结构中存在的遗传多态性(genetic polymorphism),不仅能引起β2受体表型功能的改变,而且影响哮喘的发生及对治疗的反应。β受体和Η2受体兴奋时通过细胞内环磷酸腺苷(c-AMP)含量增高,导致支气管平滑肌松弛,并拮抗其它收缩物质的作用。α受体和Μ受体与相应的激活剂结合,分别通过降低c-AMP水平和升高环磷酸鸟苷(c-GMP)含量,使支气管平滑肌痉挛。Η1受体则接受肥大细胞释放的组织胺,使支气管痉挛和水肿。正常情况下,呼吸道存在的受体主要是β受体,从气管到末梢细支气管平滑肌细胞上的受体密度越来越高,而且90%以上的受体是β2亚型。因此,支气管平滑肌细胞主要靠β受体接受循环血中儿茶酚胺类β受体激动剂的刺激,以维持气道的舒张状态。由此可见,肾上腺素能受体与支气管哮喘的关系为密切。
-
人气管平滑肌细胞培养
支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关,如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等.目前国内研究这些疾病的细胞材料多采用豚鼠和大鼠等动物的支气管平滑肌细胞,这与人气管平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的生理病理特征有很大的差距.我们在多年的实验过程中建立了一套人ASMCs的培养方法,介绍如下.
-
氯胺酮对大鼠气管平滑肌细胞ATP敏感钾电流的影响
氯胺酮是常用的强效静脉麻醉药,具有很强的气管舒张作用,其舒张气管平滑肌的机制与抑制迷走神经神经反射、促进内源性儿茶酚胺释放、激动气管平滑肌细胞β受体及抑制气管平滑肌细胞L-型钙通道,降低细胞内钙离子浓度有关[1].ATP敏感钾通道(KATP通道)广泛存在于多种组织细胞中,气管平滑肌的KATP通道对维持细胞膜电位和产生复极或超极化电流起重要作用[2].有研究表明在动物哮喘模型中KATP通道开放剂可以降低气道高反应性,缓解气道痉挛[3].氯胺酮对气管平滑肌细胞KATP通道的作用目前尚无定论.本研究旨在观察氯胺酮对大鼠气管平滑肌细胞ATP敏感钾电流(IKATP)的影响.
-
短波紫外线照射诱导培养的人气管平滑肌细胞凋亡
气管平滑肌细胞(ASMCs)的增殖与临床许多病理过程有关,ASMCs的增殖是引起气道重塑的重要因素。而ASMCs的凋亡和增殖之间的动态平衡制约着这些疾病的发展。我们用短波紫外线(UVC)照射体外传代培养的人ASMCs,观察对其凋亡的影响。现报告如下。
-
钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌电压依赖性钾通道的作用
采用膜片钳技术探讨哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞(BSMCs)电压依赖性钾离子通道(Ⅸ)特性的变化和钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞IK的作用.
-
氯胺酮对哮喘大鼠气管平滑肌细胞ATP敏感钾电流的影响
目的研究氯胺酮对哮喘大鼠单一气管平滑肌细胞ATP敏感钾电流(IKATP)的作用.方法急性分离哮喘大鼠气管,利用膜片钳制技术全细胞记录法观察氯胺酮对哮喘大鼠单一气管平滑肌细胞IKATP的作用.结果氯胺酮开放气管平滑肌细胞ATP敏感钾通道(KATP通道),且具有剂量依赖关系.指令电位在+50 mV时,4种浓度氯胺酮(1×10-7,1×10-6,1×10-5,1×10-4 mol*L-1)可使IKATP由53.72±15.60 pA/pF增加到给药后的63.86±19.33 pA/pF(n=8,P<0.05),69.98±18.44 pA/pF(P<0.01),75.64±19.64 pA/pF(P<0.01)和78.37±19.40 pA/pF(P<0.01).其开放率分别为118.73%±22.01%(P<0.05),135.18%±27.79%(P<0.05),147.07%±33.25%(P<0.05)和153.62%±37.59%(P<0.05).其它指令电位下的IKATP改变也符合此趋势.结论氯胺酮剂量依赖性的开放哮喘大鼠单一气管平滑肌细胞ATP敏感钾通道,这可能是其舒张气管平滑肌的机制之一.
-
腺苷A2b受体通过各种效应细胞介导肺部炎症反应的作用机制
哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等肺部炎症反应是一个由多种炎性细胞、炎性介质和细胞因子共同参与相互作用介导的过程.尽管在过去的几十年里,科学进步促进我们对肺部炎症反应机制的理解及应用,但是我们仍然还有很多需要进一步探索的空间.目前研究已经证实在肺部炎症反应中,腺苷是一种重要的信号转导分子,腺苷受体包括4种类型,分别是A1、A2a、A2b和A3,其中A2b受体可以通过作用在肥大细胞、树突细胞、中性粒细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞以及支气管平滑肌细胞,促进支气管的高反应性、炎症和气道重塑等一系列炎症反应过程.本文综述腺苷A2b受体通过各种效应细胞介导肺部炎症反应.
-
孟鲁司特对不同阶段大鼠气管平滑肌细胞Ⅲ型胶原蛋白功能的影响
目的:探讨大鼠哮喘气道重塑过程中不同阶段气管平滑肌细胞(ASMC)分泌的Ⅲ型胶原蛋白功能的变化及孟鲁司特对Ⅲ型胶原蛋白的影响.方法:应用卵蛋白致敏激发建立哮喘气道重塑大鼠模型,原代培养ASMC,通过免疫组织化学方法检测ASMC中Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:哮喘组Ⅲ型胶原蛋白平均灰度值均高于对照组,以卵蛋白激发8周组高,差异有统计学意义(P均<0.01);孟鲁司特干预组Ⅲ型胶原蛋白平均灰度值明显低于哮喘气道重塑组,尤以孟鲁司特干预2周及4周组差异更显著(P<0.01).结论:孟鲁司特通过抑制ASMC分泌的Ⅲ型胶原蛋白合成能力而减轻气道重塑.
-
普鲁托品对气管平滑肌的作用及其机理研究
目的观察普鲁托品(Pro)对气管平滑肌的影响,并探讨其作用机理.方法1、离体实验,观察不同浓度Pro、氨茶碱、以及两者合并应用对组织胺、乙酰胆碱预收缩的豚鼠离体气管螺旋条的舒张作用及其量效反应.2、在体实验,以0.1%磷酸组胺雾化吸入1os引喘,记录不同浓度的Pro、氨茶碱及两者合并应用对豚鼠引喘潜伏期的影响.3、放射免疫法测定Pro对家兔气管平滑肌中环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)水平的影响.4、应用高效液相色谱(HPLC)法检测Pro对豚鼠气管平滑肌磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)活性的影响.结果1、Pro能明显抑制组织胺、乙酰胆碱引起的豚鼠离体气管条收缩,与氨茶碱作用相似.Pro使组织胺、乙酰胆碱的量效曲线右移,大反应压低,呈非竞争性拮抗.pD2/分别为3.76、4.16 Pro与氨茶碱合并应用对组胺引起的豚鼠离体气管条收缩具有协同的抑制作用.2、0.1%磷酸组胺10秒雾化吸入引起的豚鼠哮喘模型中,Pro 16mg. kg-1、32mg. kg-1、64mg.kg-1腹腔注射呈剂量依赖性延长组胺诱发的引喘潜伏期,抽搐动物数亦随剂量增加而减少,与氨茶碱作用相似,但二药合用与一药单用相比,其引喘潜伏期无显著性差异.3、Pro能增加家兔气管平滑肌中cAMP、cGMP水平.4、Pro 30μmol/L、100μmol/L能浓度依赖性的抑制PDE活性.结论Pro可抑制豚鼠气管平滑肌的收缩产生一定的平喘效果,但与氨茶碱小剂量合用,其协同作用尚不能肯定.其作用机制之一可能为Pro抑制气管平滑肌PDE活性,提高气管平滑肌细胞中cAMP、cGMP水平,进而松弛气管平滑肌.
-
异丙托溴铵对慢性缺氧大鼠气管平滑肌细胞钙激活钾通道的作用