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2.143黄连素对豚鼠结肠平滑肌细胞膜钙离子激活钾通道和延迟整流钾通道的影响
目的探讨黄连素治疗运动性腹泻的机制.方法取EWG/B豚鼠,体重250g~350g,雌雄不拘,于实验前24h禁食,12h禁水.击枕处死动物,取近端结肠约5cm,分离黏膜层和浆膜层得到肌条.将肌条剪成2mm×4mm小块,用含1%Ⅱ型胶原酶、1%胰蛋白酶抑制剂、2%牛血清白蛋白的消化液于37℃消化15min左右后洗净消化酶,实验前反复吹打得单个豚鼠结肠平滑肌细胞.
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钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌电压依赖性钾通道的作用
采用膜片钳技术探讨哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞(BSMCs)电压依赖性钾离子通道(Ik)特性的变化和钾通道开放剂对哮喘豚鼠支气管平滑肌细胞膜Ik的作用。 材料与方法健康豚鼠25只,雌雄不限,体重约300~400 g,分为(1)哮喘组5只(25例细胞);正常对照组7只(28例细胞),行外向峰值钾电流测定;(2)哮喘组6只(24例细胞);正常对照组7只(25例细胞),应用钾通道开放剂(Cromakalim)前后钾通道动力学特性变化测定。 支气管平滑肌细胞分离:将两肺组织中3~4级支气管剪成碎块,加入0.25% 胰蛋白酶,洗涤后再加入0.1% 胶原酶消化,用尖端抛光的Pasteur吸管吹打,用200目不锈钢网滤过,用DMEM培养液反复冲洗,即可得到富含支气管平滑肌细胞的细胞悬液。将细胞悬液分装到涂有多聚赖氨酸的小平皿内,静置20 min,选择细胞膜完整、有立体感,胞体呈梭形的细胞用作通道记录。 离子通道记录:采用膜片钳技术的细胞贴附式和全细胞记录式。细胞外液(mmol/L):NaCl 135、KCl 5、MgCl2 l、CaCl2 l、HEPES缓冲盐水10。记录用微电极电阻约为3 MΩ,单通道电流经膜片钳放大器放大,探头反馈电阻为10 MΩ。低通滤波器滤波频率为3 KHz。全细胞式记录采用负压抽吸式打通膜片。
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妊娠晚期子宫平滑肌细胞融合体的形成
分娩期子宫平滑肌作为一个整体,收缩与舒张协调地交替进行,形成功能上的合胞体[1],但其结构上是否形成细胞融合体,鲜见报道 .在以往研究子宫平滑肌细胞膜缝隙连接(gap junctions,GJS)及细胞膜通透性变化时,曾观察到子宫体部平滑肌细胞有融合体形成[2,3],提示我们进行子宫平滑肌细胞融合体的研究,并探讨其与分娩发动的关系.
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氯离子通道与肺动脉血管张力
肺血管张力的变化直接影响着肺循环的压力,具有十分重要的生理和病理生理学意义.血管张力的维持与血管平滑肌细胞膜的离子通道密切相关.肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)膜上主要分布有四种离子通道[1] 如钾、钠、钙及氯离子通道.这些离子通道均参与和决定了平滑肌细胞膜的膜电位,而膜电位不仅是调节钙离子经由电压依赖性(或电压门控)钙通道(voltage-dependent Ca2+ channels,VDC)内流,而且也是影响细胞内库存钙离子释放和平滑肌收缩装置对钙离子敏感性的关键的调节因素.通过调控钙离子的运输和膜电位,离子通道参与了产生和调节血管张力的各个方面[2].现就PASMCs(个别研究选自其他平滑肌组织)氯离子通道的生物物理和药理学特点及其在生理及病理情况下对肺动脉张力的影响加以综述.
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异丙酚对人动脉平滑肌细胞膜大电导钙激活钾通道的影响
异丙酚引起低血压的电生理机制有两种可能,一种可能是抑制交感神经肌接头活动,降低血浆儿茶酚胺的浓度,从而降低血管外周阻力[1-3];另一种可能是对内皮的影响和对血管平滑肌细胞的直接作用[4],Wallersted等[5]在器官水平上证实了异丙酚扩张血管可能与大电导钙激活钾通道(BKCa)有关.本研究拟观察不同浓度异丙酚对人肠系膜动脉血管平滑肌细胞膜BKCa的影响,从分子水平探讨其扩张血管的机制.
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结肠平滑肌细胞膜L型钙通道电流及马来酸曲美布汀的影响
L型钙通道广泛存在于胃肠道平滑肌细胞膜上,其在动作电位形成、肌肉收缩中起重要作用.而马来酸曲美布汀作为一种胃肠运动节律调节剂,用于改善肠易激综合征(IBS)患者的腹泻、便秘等症状.本研究主要通过膜片钳技术观察豚鼠结肠平滑肌细胞膜L型钙通道电流的特性及不同浓度曲美布汀对电流的影响,进一步阐述药物对离子通道的作用.
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小檗碱对豚鼠结肠平滑肌细胞膜离子通道的影响
小檗碱(黄连素,Ber)是从毛茛科黄连属植物根状茎中提取的一种异喹啉生物碱,在中国及印度被用作止泻药已有三千余年的历史.传统上Ber主要用于治疗感染性腹泻,近年来国内外学者研究发现,Ber具有抑制小肠黏膜分泌作用[1].为了进一步探讨Ber对动力性腹泻的作用,采用膜片钳技术研究Ber对豚鼠结肠平滑肌细胞膜钙离子激活钾通道[IK(Ca)]和延迟整流钾通道[IK(V)]的影响,探讨其治疗运动性腹泻的机制.
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改进硝苯地平缓释片的制备工艺研究
硝苯地平是一种钙通道阻滞剂,阻滞钙离子经过心肌细胞膜或血管平滑肌细胞膜进入细胞内,由此引起周身血管张力减弱,因而降低血压.药物动力学表明该药生物半衰期比较短,血药浓度波动大.为了减少用药次数,使用药更安全,扬子江药业集团研制了硝苯地平缓释片剂.本文是在反复试验的基础上,对影响其溶出度的诸因素进行研究,制订出佳制备工艺.
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内源性硫化氢在血管性疾病中的变化和作用研究进展
1996年,Abe等[1]首次通过实验证明,内源性硫化氢(H2S)可能作为一种神经活性物质而存在,特别是对海马的功能具有调节作用,近期发现血管平滑肌细胞有胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)基因表达,并且内源性H2S可以直接开放血管平滑肌细胞膜KATP通道,实现对血管张力的调节[2].
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钙激活钾通道参与重症失血性体克大鼠肠系膜细动脉平滑肌细胞膜的超极化
目的:血压降低、血管反应性低下是导致创伤、脓毒性等休克病 人死亡的重要原因之一。我 室曾提出了致血管反应性降低的细胞膜超极化理论,并报道了ATP敏感钾通道在血管反应性 低下中的作用:认为随着休克的发展,组织细胞缺血、缺氧加重,ATP耗竭,细胞内乳酸堆 积,从而激活了ATP敏感钾通道,使细胞膜超极化,血管舒张。除ATP敏感钾通道外,在微动 脉平滑肌细胞中还有两种钾通道,即:内向整流钾通道(Kir)和钙激活钾通道(Kca)。 其中钙激活钾通道(Kca)在血管平滑肌细胞上尤其丰富,而且在血管平滑肌细胞的肌 源性调节中起着重 要的作用。本文目的在于进一步阐明钙激活钾通道在休克大鼠肠系膜细动脉平滑肌细胞膜超 极化中的作用,从而为临床治疗提供理论基础。 方法:实验用Wistar大鼠,雌雄兼有,体重200+10 g。大鼠以13.3%乌拉坦+0. 5 %氯醛糖肌肉麻醉,双侧股动脉插管,一侧用于测量血压,另侧用于放血,血压维持在38-40 mmHg 2 h,复制失血性休克大鼠模型。对照组只做手术,不放血。手术毕的动物放血除死 ,立即取 肠系膜动脉置于0℃的HPSS(mmol/L:NaCl l30,KCl 5,CaCl2 l.5,MgCl2 l.2,HEP ES l0,G1ucose l0,pH 7.2-7.4)液中,小心剥去周围脂肪组织,分离出肠系膜A2、A3 动脉(直径约 80-150 μm),平衡30 min后,用1 g/L Pronase E 37 ℃温浴消化15-30 min,机械吹 打出单个平 滑肌细胞。细胞悬液滴入17 mm×17 mm的盖玻片上,细胞贴壁后,将盛有细胞的盖玻片用浴 槽液 冲洗后放入浴槽中,选用舒张态、边缘清晰的细胞进行膜片钳实验。膜片钳实验采用细胞贴 附式和内面向外式的单通道电流记录法。电极液成分为mmol/L:KCl l40,MgCl2 l.0, HE PES l0,EGTA 0.5,CdCl2 0.3,pH7.2-7.4,根据需要加入不同的CaCl2以调节自 由Ca 2+浓度;浴槽液用生理的HPSS液。由于电极液与细胞内液无K+浓度梯度,而浴槽液为 生理溶液,根据公 式I=g(Vm-Vp)(其中I为单通道电流,g为电导,Vp为电极电压,Vm为静息膜电位),用细胞 贴附式记录时,当电流为零时,Vp等于Vm,即可通过所给予的电极电压算出细胞的膜电位。 实验采用的电极电阻为8-10 MΩ,封接电阻大于2 GΩ,放大器(CEZ-2400,NIHON KOHDEN , 日本)探头反馈电阻为50 G,低通滤波频率为2 kHz,实验数据记录和分析用Pclamp7.0(A xon ,美国)。结果:1.Kca通道的鉴定:实验记录的通道具有电压依 赖性、高度的K+选择性、对胞外TEA 的敏感性和胞内Ca2+浓度的依赖性,据此可以鉴定实验中所记录的通道为钙激活钾通 道。2. Kca通道的变化与休克后细胞膜电位超极化:对照组(n=7)的I-Vp曲线 方程式 为I=0.073Vp+2.8528;而休克组(n=8)为I=0.058Vp+4.5672,由此算出正常组肠系 膜平 滑肌细胞膜电位为-39.0 mV,休克组为-78.4 mV。静息(钳制电压为零)时,休克组KC a通道电流(3.36±l.17 pA)明显高于对照组(2.27±l.86 pA)。结论和讨论:由以上实验结果可以得出:1.在重症失血性休克时,大鼠肠 系膜细动脉平滑肌细胞膜发生了超极化:2.Kca通道参与了休克时细胞膜的超极化 。 测量膜电位的方法有多种,如细胞内直接记录法、荧光标记法等。曾有报道在脓毒性休 克和失血性休克时动脉平滑肌细胞膜发生了超极化,我室前期工作也证明失血性休克大鼠肠 系膜平滑肌细胞膜发生了超极化,但对于超极化产生的直接原因一直没有阐明。本文采用的 膜电位记录法不仅阐明了休克后细胞膜电位产生了超极化,从而引起血管平滑肌反应性降低 ,同时也证明,Kca在休克后膜电位的变化中起着一定的作用。