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哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常的离子作用靶点
目的观察哇巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌单细胞离子通道的作用,确定两药诱发心律失常时离子靶点和佳靶点,建立细胞水平的心律失常模型.方法用全细胞膜片钳技术记录哇巴因和乌头碱对酶解法分离的豚鼠和大鼠心肌细胞离子通道的作用.结果 5μmol·L-1哇巴因使豚鼠心肌细胞APD延长、ICa-1增加、Ik减少、Ik1减少;1μmol·L-1乌头碱使大鼠心肌细胞APD延长、ICa-1增加、Ito减少、Ik1增加.结论哇巴因和乌头碱诱发心律失常的离子靶点有APD,ICa-1,Ik,Ito和Ik1,而佳靶点应为APD,ICa-1,Ik和Ito.在单细胞水平分别应用哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常,具有稳定性高、条件可控、重复性好等优点,可用于药物筛选和机制研究.
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豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的研究
哺乳动物耳蜗具有超常的敏感性和频率分析能力，这依赖于感觉细胞基底膜的微机械反 应。豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜存在电压依赖性K+通道、 Ca2+激活K+通道和内向 钙通道等。文献报道牛蛙壶腹嵴毛细胞有瞬息 K+电流(IA)，然而豚鼠耳蜗外毛细胞是 否存在IA，迄今未见报道。来自脑干的内侧橄榄耳蜗束传出神经纤维大量分布于外毛细胞 ，调控着外毛细胞的功能，一般认为乙酰胆碱是耳蜗传出神经递质，此外三磷酸腺苷(ATP) 对外毛细胞具有神经递质和神经调质双重作用，那么是否还有其他的递质发挥作用呢?我们 应用全细胞膜片钳技术观察了豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜的外向钾电流及乙酰胆碱和去甲肾上 腺素对Ca2+敏感的外向K+电流(Ik(ca))的影响。1 材料与方法 (1)豚鼠耳蜗外毛细胞的分离 选用耳廓反射正常的杂色豚鼠25只，雌雄不限，体重200～31 0 g。单离外毛细胞的制备参照Ashmore等的方法，将豚鼠迅速断头，取出两侧骨大泡，在人 工外淋巴液中打开听泡，剔除耳蜗骨壳，切下二至顶转耳蜗，放入含木瓜蛋白酶(Papain，0 ．5 g／L)的无钙人工外淋巴液中，在室温20～25℃条件下消化20 min，人工外淋巴液反复 冲洗二次以终止消化。在解剖显微镜下用不锈钢针将基底膜从蜗轴分离，此时单离毛细胞即 坠入液体中，静置20 min细胞贴附于浴槽底的盖玻片上。 (2)溶液及药品 人工外淋巴液(mmol/L)：NaCl 137；KCl 5．4；MgCl2 1．8；CaCl2 1．3；HEPES 5．0；Glucose 5．0。KOH调pH至7．2。 电极内液(mmol／L)：KCl l35；CaCl 2 0．1；HEPES 10；Glucose 10。用KOH调pH至7．3。实验在室温20～25℃进行。Papai n(Wako Pure Chemical lndustries，LTD)，tetraethylammonium(TEA，sigma公司)，4-a minopyridine(4-AP，sigma公司)。
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腺苷对正常人房室结的影响
腺苷是一种具有强大电生理作用的内源性嘌呤核苷,经磷酸化后参与心肌能量代谢抑制心肌收缩力及心率,腺苷通过作用于腺苷受体(A1)、激活外向钾电流,延长动作电位和静息膜电位的时间使窦性心律减慢以及房室传导阻滞.我们观察了56例健康受试者,研究其对正常人房室结的影响,现报告如下.
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慢性心房颤动对心房肌细胞外向钾电流及L型钙电流的影响
近年来动物实验和人体研究表明[1,2],心房颤动(AF)能引起使AF容易发生和维持的心房电生理功能改变,该过程被称为心房电重构(AER),AER中心房肌有效不应期的缩短在房颤的发生和维持中起到重要作用,但心房电重构的离子机制却少有报道,本文在风湿性心脏病(RHD)患者中,研究慢性AF对心房肌细胞外向钾电流及L型钙电流(Ica)的影响,探讨钾电流及Ica的变化在AER中的作用.
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链霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞钙敏感外向钾电流的影响
目的：研究链霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜K+电流的影响，以进一步揭示氨基甙类抗生素耳毒性的离子机制。方法：全细胞膜片钳制技术。结果：记录到Ca2+敏感的外向K+电流［Ik(Ca)］；分别观察了0.1，1，10，100，1 000 μmol/L链霉素对Ca2+敏感的外向K+电流的影响。在指令电位+80 mV时，链霉素的抑制率分别为0，(6.72±4.42)%，(15.54±5.43)%，(18.02±5.32)%，(30.86±11.21)%。结论：链霉素以浓度依赖方式抑制Ca2+敏感的外向K+电流，这可能是其急性耳毒性机制之一。
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甲基汞对豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的影响
目的:观察甲基汞对豚鼠耳蜗外毛细胞侧膜K+电流的影响,探讨甲基汞耳毒性的离子机制.方法:采用全细胞膜片钳技术分别观察汞污染度为1/1000 LD50 、1/100 LD50、1/10 LD50对外毛细胞Ca2+敏感外向IK(Ca)电流的影响.结果:汞中毒后IK(Ca)幅值分别为(1.48±0.28)、(1.36±0.16) 和(1.22±0.13)nA,与正常对照组相比分别下降了8%、16%和25%(P＜0.05).结论:甲基汞以浓度依赖方式抑制Ca2+敏感的外向K+电流,使IK(Ca)幅值降低,后导致听觉机能下降.这可能是甲基汞中毒的耳毒性机制之一.
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二氧化硫衍生物对大鼠海马神经元外向钾电流特性的影响
[目的] 研究大鼠海马神经元去极化激活的外向钾电流的特征,并在此基础上初步探讨SO2衍生物对此外向电流的影响.[方法] 利用全细胞膜片钳技术.[结果] 短时去极化至-60 mV以上电位可引发快速上升的外向电流,之后缓慢衰减至一平台.当保持电位改变时,该峰电流与平台电流的幅度均会发生变化,但前者较后者变化显著.试验中测得峰电流与平台电流的翻转电位分别为(-76.1±5.97)mV和(-83.6±4.13)mV,与用Nerst方程计算出的本试验细胞外液与电极内液的钾离子平衡电位EK=-88 mV接近,说明该外向电流是钾电流,且提示此外向电流包括两种成分,即峰电流IA和平台电流IK.SO2衍生物可剂量依赖地增大此两种成分的外向钾电流,使二者增大50%的SO2衍生物剂量分别为26.19 μmol/L和14.50 μmol/L.[结论] 大气SO2污染可能与一些中枢神经系统疾病的发生以及衰老有关.
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外向钾电流在谷氨酸引起的神经元损伤中的作用
目的:探讨谷氨酸通过(NMDA)受体对外向钾电流的影响以及引起神经元损伤的作用机制.方法:以分离出的孕18d SD大鼠胎鼠的皮层神经元作为实验对象,分为对照组和谷氨酸处理组,利用全细胞膜片钳的方法记录外向钾电流的变化,通过细胞形态学和TUNEL的方法分别观察谷氨酸处理后神经元的损伤情况.结果:谷氨酸能明显引起外向钾电流的增大,而NMDA受体抑制剂MK-801明显抑制由谷氨酸引起的外向钾电流的增大.形态学以及TUNEL实验研究表明,谷氨酸明显引起神经元的损伤(P＜0.01),而MK-801、钾通道抑制剂TEA以及高浓度的外钾溶液能明显减缓由谷氨酸引起的细胞损伤(P＜0.01).结论:外向钾电流参与了谷氨酸引起的神经元的损伤,但其机制仍需进一步的探讨.
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BmKNJX10对大鼠背根神经节神经元外向钾电流的影响
目的:作者运用柱层析和高效液相色谱的方法,从东亚钳蝎毒素中分离纯化获得一个长链组分BmKNJX10,质谱报告结果显示其相对分子质量为7214.本文研究其对神经元钾电流的影响. 方法:采用全细胞膜片钳技术,观察了BmKNJX10对大鼠背根神经节(DRG)神经元外向钾电流(IK)的作用. 结果:BmKNJX10以浓度依赖的方式对IK有明显的促进作用.在刺激电压为+20 mV 时,10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L和70 mg/L BmKNJX10对IK的增大率分别为(17.1±3.9)%(n=4)、(25.1±6.2)%(n=4)、(45.3±2.8)%(n=5)和(70.2±11.1)%(n=3). 结论:BmKNJX10具有开放钾通道的功能,可能属于一个新的钾通道毒素多肽.
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地昔帕明对大鼠海马神经元钾电流的影响
目的 研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠海马神经元钾电流的影响,初步探讨其抗抑郁的离子通道机制.方法 酶解法急性分离单个大鼠海马神经元,应用全细胞膜片钳技术记录DMI对海马神经元钾电流的影响.结果 不同浓度DMI均可抑制海马神经元延迟整流钾电流(IK)和瞬时外向钾电流(IA)的影响,其中,100 μmol·L-1 DMI明显下移IK和IA电流-电压曲线,同时,DMI对IK的抑制率明显高于IA.结论 DMI对大鼠海马神经元外向钾电流具有明显的抑制作用,提示这可能是其神经保护的机制之一.
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风湿性心脏病慢性心房颤动对心房肌细胞外向钾电流影响的研究
研究风湿性心脏病(RHD)慢性心房颤动(AF)对心房肌细胞外向钾(K+)电流影响,探讨钾电流的变化在心房电重构(AER)中的作用.采用酶解法获得人心房肌单个细胞,利用膜片钳技术的全细胞记录法,记录AF和窦性心律患者心房肌细胞外向性K+电流的两个主要组分:瞬时外向钾电流(Ito)和持续外向钾电流(IKSUS).结果发现AF患者心房肌细胞外向性K+电流的两个主要组分It.和IKsUs在不同去极化电压下均较窦性心律患者明显减小(P＜0.01).外向电流减小是延缓复极的因素,所以外向钾电流的变化可能在慢性AF引起的AER中不起主要作用..AER是多种离子流共同作用的结果.
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异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响
目的:研究异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响.方法:用酶消化法获得急性分离的人肠系膜小动脉平滑肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录外向钾通道电流.结果:在刺激电压(Vt)-70 mV～+70 mV条件下,引发一外向钾电流,该电流可被3 mmol/L TEA阻滞61%±5%,异丙酚(43 μmol/L、86 μmol/L)分别增加外向钾通道电流幅值达(13±3)%和(36±7)%.结论:异丙酚增强人肠系膜小动脉平滑肌细胞外向钾通道电流,提示钾通道开放增加可能介导异丙酚引发的血管扩张.
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风湿性心脏病心房纤颤和窦性心律患者心房肌细胞外向钾电流的比较
目的: 探讨外向钾(K+)电流的变化在风湿性心脏病(RHD)心房纤颤(AF)心房电重构(AER)中的作用.方法: 采用酶解法获得人心房肌单个细胞,利用膜片钳技术的全细胞记录法,记录RHD AF和窦性心律患者心房肌细胞外向性K+电流的两个主要组分瞬时外向钾电流(Ito)和持续外向钾电流(IKSUS).结果:AF患者心房肌细胞Ito和IKSUS在不同除极电压下均较窦性心律患者明显减小(P<0.01).结论: 外向电流减小是复极延缓的因素,外向钾电流的减小可能在慢性AF 引起AER中不起主要作用.
