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加味丹参饮预处理诱导大鼠心肌细胞HSP70 mRNA的表达
目的 观察加味丹参饮预处理诱导大鼠缺氧/复氧心肌细胞热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达.方法 将培养72小时的乳鼠心肌细胞随机分6组,空白组正常培养;血清对照组加50%大鼠血清培养;含药血清组加50%含加味丹参饮的药物血清培养;缺氧/复氧组予缺氧再给氧.缺氧预处理组、加味丹参饮预处理组先给了;缺氧预处理和加味丹参饮预处理,24小时后再予缺氧再给氧.结果 加味丹参饮预处理和缺氧预处理24小时后心肌细胞存活率显著高于缺氧/复氧组(P<0.01),乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)显著低于缺氧/复氧组(P<0.01),HSPT0 mRNA表达显著高于缺氧/复氧组(P<0.01).结论 加味丹参饮预处理具有延迟保护作用,其机理与诱导细胞内HSP70 mRNA合成有关.
关键词： 加味丹参饮 预处理 延迟保护 心肌细胞 HSP70 mRNA -
白介素-1β预处理对心肌缺血再灌注损伤的影响
探讨低剂量白细胞介素-1β(IL-1β)预处理能否增强心肌在延迟相对抗缺血再灌注(I/R)损伤.在大鼠,观察注入IL-1β后即刻、12和24h末开始缺血(1h)再灌注(2 h)后心肌热休克蛋白72(HSP72)、IL-1β和超氧化物歧化酶(SOD)的变化,测定心梗面积,记录心功能和再灌注室性心律失常的发生率.与对照组和缺血再灌注组(I/R)比较,IL-1β预处理(ILPC)后24 h I/R末,HSP72表达增加,IL-1β表达减少,心梗面积下降(P＜0.05).与对照组比较,I/R和ILPC组各时相点左室舒张末压(LVDP)均有显著升高,而左室内压上升和下降速率(±dp/dt)及SOD含量显著下降(P＜0.05～0.01),但ILPC组24 h末的升幅和降幅均较小(P＜0.05),且再灌注室性心律失常的发生较I/R 组明显减少(P＜0.05);即刻和12 h,ILPC组与I/R组间无变化.说明低剂量IL-1β预处理可诱导心肌延迟保护作用,其机制与心肌氧化-抗氧化平衡和保护蛋白增加有关.
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氧自由基在心肌保护第二窗中的作用
目的:证实短暂、重复缺氧后即刻产生的氧自由基是否诱导了24小时后心肌抗氧化酶等保护蛋白增加而引起心肌延迟保护.方法:在大鼠培养心肌细胞缺氧预适应模型上,设正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应组、外源性超氧阴离子处理组(外源性O-/2处理组)和超氧化物歧化酶处理组(SOD处理组),用酶联免疫吸附试验法检测预适应后即刻和24小时末心肌细胞外源性超氧阴离子(O-/2)的产生量、热休克蛋白72(HSP72)表达及-氧化氮合酶(NOS)活性、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽和丙二醛含量及心肌细胞存活率.结果:与正常对照组比较,缺氧预适应后即刻O-/2产生量在缺氧预适应组和外源性O-/2处理组升高,有非常显著性差异(P＜0.01),缺氧复氧组和SOD处理组无显著变化;相反,缺氧预适应后24小时前2组O-/2的产生量较缺氧复氧组和SOD处理组显著减少,有非常显著性差异(P＜0.01),且与正常对照组比较无显著性差异(P＞0.05).且前2组HSP72和SOD比后2组增加,有非常显著性差异(P＜0.01);各组心肌细胞存活率、NOS活性及谷胱甘肽均有不同程度下降,丙二醛有不同程度增加,但前2组各指标降幅和增幅分别较后2组小,有显著性差异(P＜0.05).预适应后即刻,除O-/2的产生量外,各组无显著性差异(P＞0.05).结论:短暂、重复缺氧产生的氧自由基能增加心肌抗氧化酶活性及诱导HSP72表达而产生心肌延迟保护.
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腺苷预处理对心肌缺血/再灌注损伤的延迟保护作用及机制
目的 探讨ATP敏感性K+通道(KATP+)开放和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达上调在腺苷(ADO))预处理对心肌缺血/再灌注损伤延迟保护中的作用.方法 48只家兔随机分成4组,每组12只.对照组:心肌缺血前24h静注生理盐水0.5ml;CC-PA组:心肌缺血前24h静注OSPA(ADOA1受体激动剂)0.1mg/kg进行药物预处理;Gli组:心肌缺血前30rain静注格列苯脲(Gfi)0.3mg/kg,CCPA/Gli组:在CCPA组处理的基础上,心肌缺血前30min静注Gli.采用家兔离体工作心脏模型,各组动物心肌均缺血30min,复灌30min.观察缺血/再灌注前后血流动力学和心功能的变化.测定再灌注结束后冠脉流出液中乳酸脱氢酸(LDH)、肌酸激酶(CK)、一氧化氮(NO)和心肌组织ATP含量.氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法判断心肌梗死范围.RT-PCR测定iNOS mRNA表达水平.结果 与对照组比较,CCPA组心肌缺血/再灌注后心功能明显改善,冠脉流出液LDH水平降低(30.11±3.32U/Lvs89.43±5.76U/L,P＜0.01),CK含量减少(42.77±5.48U/L vs 143.76±11.20U/L,P＜0.01),心肌梗死范围明显缩小(13.4%±2.3% vs 32.1%±4.5%,P＜0.01),心肌组织ATP浓度明显增加(1.52±0.23μmol/L vs 0.44±0.08μmol/L,P＜0.01),Gli可拮抗这种保护作用.CCPA组心肌组织NO浓度较对照组升高(31.4±5.3μmol/L vs 24.6±3.3μmol/L.P＜0.01),且iNOS表达上调(1.68±0.22 vs 0.96±0.17,P＜0.01),此效应不受Gfi拮抗.结论 CCPA可以模拟缺血预处理的延迟保护效应;iNOS合成的NO可能激活KATP+,并使iNOS表达上调,在ADO预处理的延迟保护中具有重要作用.
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酪氨酸蛋白激酶在预处置中的作用
缺血预处置(ischemia preconditioning, IP)是指预先反复短暂缺血及再灌注提高心肌组织对随后持续缺血的耐受性,其保护作用包括缩小缺血再灌注 (ischemia/reperfusion,I/R)后心肌梗死范围、减少恶性心律失常发生和促进心脏功能恢复等.预处置的诱导方法很多,包括缺血预处置、快速起搏预处置、缺氧预处置、温度预处置、药物预处置等.预处置的保护作用在时间上呈现2个不连续的时相变化,即早期保护(early protection,EP)和延迟保护(delayed protection,DP).
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心肌预适应延迟保护的研究现状及应用前景
心肌缺血预适应(ischemic preconditioning，IPC)是指非致死性缺血应激将对随后更长时间心肌缺血再灌注损伤产生明显保护的一种适应性机制。
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丹酚酸B预处理的心脏微血管内皮细胞延迟保护作用研究
目的:探讨丹酚酸B通过保护心脏微血管内皮细胞(CMEC)抗心肌缺氧损伤作用机制.方法:基于缺血预适应延迟保护机制,通过缺氧/复氧的CMEC损伤模型,观察丹酚酸B预处理的CMEC保护作用.结果:丹酚酸B预处理与缺氧预处理作用相似,均可提高细胞存活率和SOD活性,降低LDH、NO水平.结论:丹酚酸B预处理可激活CMEC内源性延迟保护机制,发挥了拮抗心肌缺血缺氧损伤效应.
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电针内关穴对家兔心肌缺血的延迟保护作用
目的探讨针刺内关穴对家兔急性心肌缺血的延迟保护作用及和腺苷酸的关系. 方法电针家兔内关穴20min,24h后结扎家兔左冠状动脉前降支20min,再灌注40min,观察家兔心电图STⅡ及心肌组织腺苷酸含量的变化. 结果缺血再灌注模型组在冠脉结扎后STⅡ段明显抬高,腺苷酸(ATP,ADP,AMP)含量显著下降;针刺内关保护组腺苷酸含量无明显下降(P＞0.05),与空白组接近. 结论电针内关穴对心肌缺血具有24h的延迟保护作用,其机制与腺苷酸参与有密切关系.
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心肌超声造影评价蛋白激酶C在硝酸甘油诱导顿抑心肌微血管内皮功能延迟保护中的作用
本研究采用心肌超声造影技术(myocardial contrast echocardiography,MCE)定量评价蛋白激酶C(protem kinase C,PKC)在硝酸甘油诱导顿抑心肌延迟保护中的作用.
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芪参益气滴丸预适应诱导大鼠心肌延迟保护作用与降钙素基因相关肽表达的关系
目的：探讨芪参益气滴丸预适应大鼠心肌延迟保护作用与降钙素基因相关肽(CGRP)表达的关系。方法基于心肌缺血预适应原理，采用 RT PCR及ELISA方法，检测不同处理对CGRP表达的影响。随机将36只成年Wistar大鼠分成6组：正常组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、芪参益气滴丸预适应组(QS组)、缺血预适应组(DPC组)、阻断剂加缺血预适应(DPC+GAP组)、阻断剂加芪参益气滴丸预适应加缺血预适应组(DPC+CAP+QS组)，给予不同的处理。结果 QS组与 DPC组大鼠血清中 CGRP mRNA、CGRP蛋白含量升高，与 DPC组相比，加入辣椒素(CAP)后 CGRPmRNA表达、CGRP蛋白含量下调，而芪参益气滴丸预适应可以使降低的 CGRPmRNA表达、CGRP蛋白含量提高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论芪参益气滴丸预适应通过增高CGRP的表达发挥其延迟保护作用。
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加味丹参饮预处理对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用及对蛋白激酶C的影响
目的 观察加味丹参饮预处理对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用及对蛋白激酶C(PKC)的影响.方法 将培养72 h的乳鼠心肌细胞随机分为6组,空白组正常培养;血清对照组加50%大鼠血清培养;含药血清组加50%含加味丹参饮的药物血清培养;缺氧/复氧组予缺氧再给氧.缺氧预处理组、加味丹参饮预处理组先给予缺氧预处理和加味丹参饮预处理,24 h后再予缺氧再给氧.结果 加味丹参饮预处理24 h后可防止缺氧/复氧心肌细胞存活率的降低,防止乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性的升高(P＜0.01),提高蛋白激酶C活性(P＜0.01).结论 加味丹参饮预处理具有延迟保护作用.其机制与激发细胞内PKC信号转导通路有关.
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腺苷预适应对心肌的延迟保护研究
目的 旨在证实ATP敏感性钾通道(KATP)的开放和内源性一氧化氮合成酶(iNOS)表达上调介导了腺苷(ADO)预处理的延迟保护.方法 实验动物随机分成4组,对照组:心肌缺血前24 h静注生理盐水;ADOA_1受体激动剂(CCPA)组:心肌缺血前24 h静注CCPA进行药物预处理;格列苯脲(Gli)组:心肌缺血前30 min静注Gli;CCPA/Gli组:在CCPA组处理的基础上,心肌缺血前30 min静注Gli.采用家兔离体工作心脏模型,各组心肌均缺血30 min,复灌30 min.观察缺血/再灌注前后血流动力学和心功能变化.测定再灌注后冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)、一氧化氮(NO)和心肌组织三磷酸腺苷(ATP)含量.用氯化三苯基四氮唑(TTC)判断心肌梗死范围.逆转录酶链聚合法测定iNOSmRNA.结果 ①CCPA预处理明显改善心肌缺血/再灌注后心功能的恢复,且这种保护作用被Gli阻断;②CCPA预处理减少心肌缺血/再灌注后冠脉流出液LDH、CPK含量,且Gli可抑制这种保护效应;③CCPA预处理可缩小心肌梗死范围,且被Gli阻断;④CCPA预处理可增加心肌组织ATP浓度,Gli可拮抗这种保护作用;⑤CCPA预处理轻度提高心肌组织NO浓度,此效应不受Gli影响;⑥CCPA预处理上调心肌组织iNOS表达,此效应不受Gli拮抗.结论 iNOS合成的NO通过激活K_(ATP)介导ADO预处理的延迟保护效应.
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诱导型一氧化氮合酶在未成熟心肌缺血预处理延迟保护中的作用
目的 研究诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)在未成熟心肌缺血预处理(ischemic preconditioning, IP)延迟保护中的作用.方法 2～3周中国大白兔随机分为4组,即Ⅰ组:假手术、Ⅱ组:缺血再灌注、Ⅲ组:IP、Ⅳ组:IP+1400w; 观察(1)west-blot检测iNOS蛋白活性变化;(2)心肌血流动力学指标:左室发展压(LVDP),左室压上升及下降大速率(dp/dtmax,-dp/dt max,)变化;(3)血生化及组织生化:CK、LDH活性、MDA含量.结果 缺血再灌注1h后Ⅱ组、Ⅳ组LVDP、+dp/dtmax 、-dp/dtmax恢复率显著低于Ⅲ组(P＜0.01),Ⅲ组CK、LDH活性以及MDA含量较Ⅱ组和Ⅳ组显著降低(P＜0.01).结论 在未成熟兔心肌缺血预处理中诱导型一氧化氮对缺血再灌注损伤具有延迟保护作用.
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预处理介导心脏延迟保护的信号传递机制
心脏的多种预处理方法均可诱导出延迟保护(DP).全面了解DP的激发、信号传递过程将有助于探索DP的作用机制,找出诱导DP的方法和药物.
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单磷酰酯A预处理在缺血再灌注心肌中的保护作用
目的探讨单磷酰酯A(MLA)预处理在兔心肌缺血再灌注损伤中的保护作用.方法采用兔心肌缺血再灌注模型,实验组于实验前24小时注入35μg/kg的MLA作预处理,未预处理者作为对照,分别于灌注前、灌注后90分钟、灌注后180分钟采取兔血,用免疫组化法检测两组的血肌钙蛋白(cTn)、肌苷(Cr)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(MB)同工酶(CKMB)水平.结果实验组的cTn、Cr、LDH、CKMB与对照组相比,在灌注前、灌注后90分钟、灌注后180分钟均明显降低.结论 MLA预处理可明显减轻心肌缺血再灌注操作,并且具有延迟保护作用.
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腺苷受体介导心脏延迟预处理的研究状况
综述腺苷受体介导预处理延迟心肌保护的研究概况.激活心脏腺苷A1、A3受体触发延迟预处理的信号传递,诱导保护性蛋白质表达及离子通道开放,从而减轻心肌缺血-再灌注损伤.
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一氧化氮供体预处理对乳鼠心肌细胞的延迟保护作用及其机制
目的探讨一氧化氮模拟预处理延迟保护作用的机制.方法体外培养新生大鼠心肌细胞,实验分为:①阴性对照组(Normal组);②SNAP组:一氧化氮(nitric oxide,NO)供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(S-nitroso-N-acetyl-1,1-penicillamine, SNAP,500 μmol*L-1)与心肌细胞共育24 h;③Che+SNAP组:蛋白激酶C拮抗剂白屈菜季铵碱(chelerythrine chloride,Che,10 μmol*L-1)处理心肌细胞30 min后,加入SNAP与心肌细胞共育24 h;④PDTC+SNAP组:核因子κB(NF-κB)特异性阻断剂PDTC(100 μmol*L-1)处理心肌细胞30 min后,加入SNAP与心肌细胞共育24 h;⑤缺氧复氧损伤组(H/R组):心肌细胞缺氧6 h,复氧3 h.②～④组部分取细胞爬片以免疫组织化学法观察SNAP对热休克蛋白70(HSP70)表达的影响;其余细胞经历H/R损伤后,检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果在正常心肌细胞免疫组织化学法未检测到HSP70的表达,心肌细胞经过H/R损伤后,可检测到少量HSP70阳性细胞,其阳性染色A值为94.6±9.1,心肌细胞培养上清LDH活性为(2 190.5±151.7)U*L-1,细胞存活率为51.7%±4.6%,细胞损伤较正常组加重(P<0.01); SNAP处理细胞后24 h,HSP70阳性细胞数增多,其阳性染色A值为165.9±9.3,较单纯H/R损伤组增高(P<0.01);经历H/R损伤后LDH活性为(690.8±53.9)U*L-1,细胞存活率为88.9%±6.5%,心肌细胞损伤程度较H/R组细胞减轻(P<0.01);而Che和PDTC可使SNAP诱导的HSP70阳性细胞减少(P<0.01),并拮抗SNAP的心肌细胞保护作用,使心肌细胞LDH活性增高,细胞存活率下降(P<0.01).结论 NO供体SNAP通过激活PKC-NF-κB途径诱导HSP70蛋白表达而发挥对心肌细胞的延迟保护作用.
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加味丹参饮预处理对缺血再灌注损伤家兔心电图改变的影响
目的:探讨加味丹参饮预处理对缺血再灌注损伤家兔心电图的影响.方法:将健康家兔32只,随机分为假手术组(Shm)、缺血再灌注组(I/R)、药物预处理组(DP)和缺血预处理组(IP),每组8只,分别预处理24h后行心肌缺血60min、再灌注120min,观察家兔心率、Ⅱ导联心电图ST段等的变化.结果:I/R家兔标准Ⅱ导联心电图心率明显减慢、ST段明显抬高或T波倒置,并且绝大部分家兔出现心律失常(87.5%);而药物预处理和缺血预处理对ST段抬高或T波倒置以及心律失常有明显的改善作用(P＜0.05),对心率变化作用不明显(P＞0.05).结论:加味丹参饮预处理对家兔缺血再灌注损伤心肌有明显的延迟保护作用.
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加味丹参饮预处理对心肌细胞内钙超载的延迟保护作用
目的 现察加味丹参饮预处理对心肌细胞内钙超载的延迟保护作用.方法 将培养72 h的大鼠心肌细胞随机分6组,空白组正常培养;正常血清对照组加50%大鼠血清培养;含药血清组加50%含加味丹参饮的药物血清培养;缺氧再给氧组予缺氧3 h,再给氧1 h.缺氧预处理组、加味丹参饮预处理组分别给予缺氧顸处理、加味丹参饮预处理,24 h后再予缺氧3 h,给氧1 h.结果 缺氧再给氧组乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及细胞内钙离子浓度显著升高(P＜0.01),缺氧预处理和加味丹参饮预处理组LDH、CK及细胞内钙离子浓度显著低于缺氧再给氧组(P＜0.01),与空白组、血清对照组和含药血清对照组相似(P＞0.05).结论 加味丹参饮预处理的延迟保护作用可防止心肌细胞内钙离子超载,从而发挥细胞保护作用.
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缺血预处理对家兔缺血再灌注损伤心肌的延迟保护作用
目的探讨缺血预处理对家兔缺血再灌注损伤心肌的延迟保护作用.方法 24只健康家兔,随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)和缺血预处理组(IP),每组8只,分别预处理24h后行心肌缺血60min,再灌注120min,观察缺血心肌形态结构变化、缺血区面积和危险区面积、血清腺苷(Adenosine)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量.结果 I/R家兔部分心肌纤维断裂,有灶性出血,心肌间质大量炎性细胞浸润,血清腺苷和CGRP含量显著下降(P＜0.01);缺血预处理组部分心肌纤维呈波浪状,肌浆分布不匀,心肌间质无出血,有数量不等炎性细胞浸润,但心肌结构基本正常,仅少数线粒体有轻度水肿;并能显著缩小缺血再灌注损伤家兔心肌梗死危险区面积和心肌缺血梗死,血清腺苷和CGRP含量升高,与Sham组和I/R组比较,差异均有显著性意义(P＜0.01).结论缺血预处理对家兔缺血再灌注损伤心肌有明显的延迟保护作用,其机制与腺苷和降钙素基因相关肽作用有密切的关系.
