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PPARα/PGC-1α信号通路在磷酸肌酸钠对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤中的作用
目的 探讨磷酸肌酸钠对阿霉素损伤H9c2心肌细胞的影响及对细胞PPARα/PGC-1α信号通路的影响.方法 实验分为3组:即对照组、阿霉素组(ADM)和磷酸肌酸钠预处理组(ADM+ CP).在使用药物处理后,使用阿霉素建立心肌损伤模型.用DCFH-DA标记细胞用荧光显微镜观察细胞中绿色荧光的含量来分析细胞中ROS的含量;RT-PCR检测H9c2心肌细胞PPARα、PGC-1α和P300mRNA的表达;Western blot检测H9c2心肌细胞内PPARα、PGC-1α和P300蛋白的表达;采用Gilson高效液相色谱系统测定H9c2心肌细胞腺嘌呤核苷酸的含量.结果 阿霉素处理H9c2心肌细胞后,细胞内ROS含量升高(P<0.05),当用磷酸肌酸钠预处理2h后,可明显降低阿霉素引起的ROS含量升高(P<0.05).与对照组相比,阿霉素可降低H9C2心肌细胞内PPARα、PGC-1α和P300mRNA及蛋白的表达(P<0.05).当用磷酸肌酸钠预处理2h后,可以增加阿霉素引起的PPARα、PGC-1α、P300mRNA及蛋白的表达(P<0.05).与对照组相比,阿霉素可降低H9c2心肌细胞内ATP、ADP和AMP的含量(P<0.05),而磷酸肌酸钠组的ATP、ADP和AMP的含量与阿霉素组相比明显升高(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在本试验条件下,一定剂量的磷酸肌酸钠可在一定程度上抑制阿霉素引起的心肌细胞的损伤,激活PPARα/PGC-1α信号通路,改善阿霉索引起腺苷酸含量减少.
关键词: 磷酸肌酸钠 阿霉素 PPARα/PGC-1α 腺苷酸 -
ATP及P2X7受体在三伏灸治疗支气管哮喘的作用机制研究
目的 观察三伏灸治疗对支气管哮喘新西兰兔大椎穴和肺俞穴透析液腺苷酸含量及肺组织P2X7受体mRNA表达的影响.方法 选取新西兰雄性兔子18只,随机分为3组.进行支气管哮喘气道重塑模型造模后,于“三伏天”以隔姜灸加中药贴敷法干预,疗程结束后,采用微透析的方法提取大椎穴、肺俞穴的透析液,再用超高效液相色谱法测定透析液中腺苷酸的含量.取新西兰兔肺组织,采用荧光定量PCR法观察各组肺组织P2X7受体mRNA表达的变化.结果 与空白组相比,模型组大椎穴和肺俞穴的ATP浓度均明显升高(P<0.05),与模型组相比,治疗组的大椎穴和肺俞穴的ATP浓度均明显下降(P<0.05):模型组新西兰兔肺组织P2X7受体mRNA的表达较空白组明显升高(P<0.05),治疗组P2X7受体mRNA的表达较模型组明显下降(P<0.05).结论 ATP可能通过P2X7受体参与了支气管哮喘的发生发展过程,三伏灸可通过下调局部穴位ATP的浓度,进而调整肺组织P2X7受体的表达量,达到治疗效果.
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Has-miR-204的生物学信息分析及研究进展
MicroRNA(miRNA)是一类由 21 ~ 25 个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子 RNA,它们广泛存在于真核生物中,在物种进化中相当保守,其表达具有组织特异性和阶段特异性.miRNA 基因通常位于基因间或内含子区域,在核内由 RNA 聚合酶 II 转录产生具有帽子结构多聚腺苷酸尾巴的初级 miRNA(primary miRNA,Pri-miRNA).
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FHIT基因研究进展
早在1979年,Cohen等就发现一家族性早发、双侧、多灶的肾透明细胞癌与t(3:8)染色体易位有关.此后,人们在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中观察到3号染色体短臂的高频率缺失,提示在3p上可能存在抑癌基因.1996年,Ohta等[1]用差异显示分析探针和外显子捕获法在3p14.2上确定了一个新的基因,由该基因cDNA推算的蛋白质与具有3价组氨酸结构域的HIT蛋白质家族高度同源,又因为此基因跨越脆性位点(fragile site),故将之命名为FHIT(fragile histidine triad)基因.FHIT基因全长超过1 Mb,为一高度保守的基因序列,其mRNA全长约1.1 kb,包含10个外显子,由第5~9外显子编码一个相对分子质量约为16 800的蛋白.Barnes等[2]通过蛋白质活性分析证实,人类FHIT蛋白是一典型的二腺苷酸三磷酸水解酶(Ap3A),催化Ap3A水解为ADP和AMP,FHIT蛋白质水解酶活性丧失将导致Ap3A水平升高.
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垂体腺苷酸环化酶激活多肽对胰腺癌的调控初探
垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP),早是由下丘脑分离出的一种具有很强刺激作用的多肽[1].它有两种活性形式,PACAP-38和PACAP-27.结构上,PACAP同属于血清素-胰高血糖素-舒血管肠肽类多肽家族.除垂体外,广泛分布于全身.PACAP可能是胃肠运动的主要抑制性因子,包括松驰食道下段括约肌和结肠肌条,刺激胰腺腺泡分泌淀粉酶,且呈剂量相关性.PACAP还是细胞增殖、神经元生长和蛋白合成的激动剂,它能刺激人非小细胞肺癌[2]和鼠胰腺癌细胞株AR4-2J的生长[3].我们通过观察PACAP1-38对人胰腺癌细胞株HS766T的生长调控作用,探讨其作用机制以及受体后信息传导途径.
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干扰素及其临床应用(续)十二干扰素诱生剂
干扰素诱生剂是一种能促进干扰素的产生和释放的物质.其种类很多:包括促细胞分裂剂、脂多糖和人工合成的多聚体,如poly I:C和poly A:U(聚腺苷酸-聚尿苷酸)和磷酸多糖;病毒、细菌和寄生虫都被证明可以诱生干扰素,还有许多低分子物质如Tirolone等.在1986年重组人干扰素被美国FDA批准投放市场以前,干扰素诱生剂曾经是研究的热点之一,研究多的是聚肌胞(poly I:C).但由于毒性大,未被批准投放市场,同时随着重组干扰素的上市,聚肌胞的市场在逐渐萎缩.但近年来干扰素诱生剂的研究和开发又在不断取得新进展,尤其是以下几种引起国内外学者的广泛关注.
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丙型肝炎病毒与PKR信号转导系统
0引言在病毒感染真核细胞的过程中,干扰素(IFN)诱导细胞的抗病毒机制是机体防御感染的第一道防线.在病毒感染过程中,分泌的干扰素主要用于保护邻近细胞免受感染,限制病毒扩散[1].Ⅰ型IFN由IFN-α、IFN-β两种亚型组成,IFN-α主要由白细胞分泌产生,IFN-β主要由成纤维细胞、上皮细胞产生.Ⅰ型IFN与相应的受体结合,激活信号级联反应,从而调节至少30个基因的转录翻译水平,其中包括双链RNA激活的蛋白激酶(double-stranded RNA-activated protein kinase,PKR)和2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylates synthesis),这两种酶的激活均需要病毒复制过程中产生的双链RNA[2,3].PKR参与机体的抗病毒机制,与细胞凋亡密切相关,从而受到越来越多的关注.
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2型糖尿病患者氧化应激状态与红细胞腺苷酸代谢的关系
目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者氧化应激状态与红细胞腺内苷酸代谢的关系. 方法 应用高效液相色谱法和比色酶法分别测定104例T2DM和32例正常对照者(NC)组红细胞内ATP、ADP、AMP含量和SOD、GSH-Px、CAT,anti-ROS、MDA活性,分析二者的关系. 结果 (1)T2DM组较NC组,SOD、GSH-Px、CAT、Anti-ROS活力和ATP、ATP/ADP、SOD/MDA下降,MDA、ADP含量升高(P均<0.05).(2)T2DM组内,ATP含量与SOD活性、SOD/MDA正相关;ADP与SOD、抗ROS活性负相关;AMP与GSH-Px正相关;ATP/ADP与SOD、GSH-Px、SOD/MDA正相关,(P均<0.05).结论 T2DM患者体内氧化应激水平的升高与腺苷酸代谢异常相关.
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?专家答疑?
问:硝酸酯类代谢很快,为什么引起的头痛却持续很久?
答:硝酸酯类药物能够扩张脑血管,引起患者明显的头痛。这种不良反应的具体机制不明确,但是有研究发现,血管性头痛发作时,脑循环中降钙素基因相关肽(calcitonin gene - related peptide ,CGRP )、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide ,VIP )、垂体腺苷酸环化酶激活多肽( pituitary adenylate cyclase activating polypeptides , PACAP)、P 物质(substance P ,SP)和痛敏肽(nociceptin)的信使 RNA(mRNA)表达水平明显增高。 -
腺苷在心血管病诊治中的应用前景
腺苷(adenosine)是一种嘌呤核苷,由糖苷键连接腺嘌呤和核糖而成.它是腺苷酸的前体,又是其代谢产物.许多细胞能"出产"腺苷,同时也有腺苷的受体.受体的激活通常可降低这些细胞或器官的总体作功和耗氧,因而腺苷是一种"报复性代谢产物"[1].
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多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶抑制剂的放射增敏作用及机制研究
放疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一,临床上约70%的恶性肿瘤患者在治疗不同阶段需接受放疗.多种细胞毒药物被用于放疗联合治疗以增加对肿瘤的治疗疗效,如氟尿嘧啶、顺铂、卡铂和丝链霉素C等,然而它们往往在增加肿瘤细胞杀伤的同时也加重了正常组织损伤,因此寻找特异性针对肿瘤的放射增敏剂是放疗研究的方向.近年来针对多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶[ poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]这一修复蛋白的一些研究提示它可能是有效的肿瘤治疗靶点.由于细胞的损伤修复也是影响放射敏感性的重要因素之一,PARP也是放射增敏的潜在靶点,因此对PARP抑制剂( PARP inhibitor,PARPi)的放射增敏作用及其机制进行综述.
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NMDA-Ca2+-NO路径与阿片戒断综合征
有关阿片类毒品戒断综合征机理的研究,虽有进展,但目前仍尚未完全明了.阿片类药物可引起细胞信使传导系统的改变,包括阿片受体脱敏和下调及与G蛋白偶联、不同亚基G蛋白的上调或下调、腺苷酸环化酶活性的变化、转录因子的激活等[1],尤其是兴奋性氨基酸(EEA)、N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)受体、Ca2+、一氧化氮(NO)和环鸟苷酸(cGMP),在吗啡依赖形成及产生戒断综合征中起十分重要的作用.
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高效液相色谱测定大鼠心肌组织腺苷酸含量
目的:优化高效液相色谱(HPLC)法检测大鼠心肌组织腺苷酸的含量.方法:ODS HYPERSIL C18分析柱,检测波长254 nm,流动相为50 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 6.5).结果:心肌三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)平均回收率分别为99%~107%,96%~104%和95%~119%;日内和日间相对标准偏差(RSD)分别在1.5%和5.1%以下.结论:优化高效液相色谱法快速准确、简便易行.
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液相色谱法测定小鼠脑组织中ATP、ADP及AMP含量
建立小鼠脑组织中腺苷酸含量测定的高效液相色谱(high performance liquid chromatogram,HPLC)-可变波长检测法.方法应用酸沉淀蛋白、Agilent1200高效液相色谱系统、Supelco Discovery C18(150 mm ×4.6 mm,5μm)反相色谱柱及相同填充材料的预柱,对小鼠脑组织样品中腺苷酸进行分离分析,波长为254nm,流动相为30 mmol/L K2HP04-KH2PO4(含5%甲醇),pH5.85,流速为1.0 mL/min,进样体积为20μL,柱温为30℃.结果腺苷酸ATP、ADP及AMP在10 ~ 100 mg/L范围,线性关系良好,线性方程为ATP:A=28.924C+ 14.144,γ=0.99990;ADP:A =31.504C - 12.608,γ=0.99992;AMP:A =46.539C -5.255,γ=0.99995.平均回收率为95.3%~103.2%;日内和日间相对标准差(RSD)分别为1.14%~1.75%、2.45% ~3.97%.结论高效液相色谱-可变波长检测法可以简便、准确、有效地测定急性重复低氧小鼠脑组织中ATP、ADP和AMP的含量.
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前列腺素E1在临床上的应用
前列腺素E1(前列地尔、PGE1),为外周血管疾病用药.它能激活血小板膜的腺苷酸环化酶的活性,使血小板中的环磷酸腺苷的含量升高,从而抑制血栓素A1(TXA2)的释放,抑制血小板黏附率.还可以通过抑制血管交感神经末梢释放去甲肾上腺素,具有强烈扩张血管、抑制血小板聚集及增强心肌收缩力等作用,在临床上有广泛的用途.现主要介绍如下:
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药物对缺血心肌能量的保护
心肌在缺血缺氧后,产生能量代谢障碍研究表明,心肌在缺血后,三磷酸腺苷(ATP)明显下降,单磷酸腺苷(AMP)腺苷酸、肌苷、次黄嘌呤、黄嘌呤明显增加.
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前列腺癌相关microRNA的研究进展
microRNA(miRNA)是近年来研究活跃的细胞调控因子.和传统的蛋白因子不同,miRNA是一种19到22个核苷酸之间的非编码RNA,能在转录和翻译水平上调控基因表达.其作用机理为:在细胞核内,miRNA基因经RNA聚合酶Ⅱ转录出具有帽子结构和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的原初miRNA(pri-miRNA),pri-miRNA被核酸酶Drosha切断,生成70个核苷酸的具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNA).
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模拟高原缺氧复合梭曼中毒时脑腺苷酸含量的变化
目的:探讨模拟高原缺氧复合梭曼中毒时脑损伤机制,为临床救治脑损伤提供理论依据.方法:测定大鼠模拟高原4 000 m梭曼(72μg·kg-1)中毒后不同时间脑组织含水率,并采用高效液相色谱法测定腺苷酸(ATP、ADP、AMP)含量的变化.结果:缺氧复合梭曼中毒后,脑组织含水率随时间延长而递增,在中毒后48 h含水率为(80.97±1.83)%,高于正常对照组的(76.77±1.57)%,(P<0.01)以及平原中毒组的(78.46±1.96)%,(P<0.05).缺氧复合梭曼中毒后脑ATP含量明显降低,在中毒后48 h为(1.36±0.45)mg·g湿组织-,而正常对照组为(3.63±0.46)mg·g湿组织-,(P<0.01),平原中毒组为(3.49±0.37)mg·g湿组织-,(P<0.01),高原对照组为(1.78±0.37)mg·g湿组织-.结论:缺氧复合梭曼中毒时脑组织损伤加重,其损伤机理可能与能量代谢受抑制有关.
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反相高效液相色谱分析大鼠脑组织腺苷酸
目的:介绍Wistar大鼠脑组织腺苷酸(ATP、ADP、AMP)的高效液相色谱分析,为腺苷酸的实验研究建立了更加简便、快速、可靠、实验费用低、适用的高效液相色谱分析法.方法:脑组织用高氯酸沉淀蛋白提取腺苷酸.Hypersil BDS C18柱(5 um,4.0×250 mm)进行分析,流动相为20.00mmol·L-1磷酸钠缓冲液,pH为5.95、流速0.9ml·min-1、紫外检测波长254 nm,柱温25℃.结果:腺苷酸在1.00~400.00μg·ml-1浓度范围内,有较好的线性关系(r>0.9992).ATP、ADP、AMP的平均回收率分别是97.89、95.83、93.40%.相对标准差分别是2.95、4.73、1.76%(n=6).结论:该实验方法简便,分析时间短,重现性好,在分析脑组织腺苷酸的实验中获得较好的结果.
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聚ADP核糖聚合酶1与DNA甲基化的关系及其可能的机制
聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]是一类存在于多数真核细胞中的蛋白质翻译后修饰酶,主要存在于细胞核内,少量存在于细胞浆内[1],具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用.尽管目前PARP家族至少有18名成员,但研究表明,PARP-1活力占所有PARP蛋白活力的90%以上.PARP-1在绝大多数组织中为组成型表达,但受到DNA链断裂等损伤激活后,其活力会立即上升500倍以上[2-3].PARP-1是该家族中重要的一员,具有保持染色体结构完整、参与DNA复制和转录的功能[4-6],在维持基因组稳定和细胞死亡及调控基因组的甲基化模式的过程中发挥着重要作用[7-9].