首页 > 文献资料
-
反义CⅡTA基因转移对MHCⅡ类分子表达的抑制作用
主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子可将外源性抗原提呈给T辅助细胞.MHCⅡ类的组成型表达仅限于"专职性"抗原提呈细胞,但细胞因子如IFN-γ可引起诱导型Ⅱ类分子表达.无论是组成型还是诱导型Ⅱ类分子表达,MHCⅡ类分子转录活化因子(CⅡTA)都是绝对必需的.
-
B7-2和PD-L1 mRNA表达在慢性乙型肝炎免疫耐受中的意义
T淋巴细胞介导的细胞免疫反应是乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要免疫反应,而T细胞的活化依赖于双信号的刺激,第一信号来自抗原,第二信号由共刺激分子提供.B7-2(CD86)和PD-L1(B7-H1)是正负共刺激分子的代表,B7-2组成型表达于抗原提呈细胞上,上调速度非常快,迅速促进T细胞的分化和产生效应[1];PD-L1被广泛地诱导性表达在身体各器官组织中,对免疫应答起负性调控作用,减弱T细胞的免疫应答,是诱导免疫耐受和T细胞凋亡的主要共刺激分子[2].
-
一氧化碳生物学作用的研究进展
一氧化碳(CO)是一种惰性气体,但由于其能与氧气竞争性结合血红蛋白,所以在过去的很长一段时间里被认为是一种有毒气体.生物体内存在一类能够产生内源性CO的酶系统,即血红素加氧酶(HO),HO催化血红素降解为Fe2+、胆绿素和CO气体.HO主要分为HO-1、HO-2和HO-3这3种亚型,其中HO-2、HO-3在生物体内组成型表达,表达量不受外界刺激影响,而HO-1在应激状态下表达量增高[1].1991年,Mark等[2]发现,在生物体内,CO气体参与多种病理生理过程,从而揭开了人们对CO的生物学作用的研究热潮.随着研究的不断深入,人们发现CO在生物体内是一种重要的气体信号分子.本文就CO在生物体内功能的研究进展综述如下.
-
葡萄糖碳源对组成型表达重组人C-反应蛋白的影响
目的 探讨不同浓度的葡萄糖对Pichia pastoris组成型表达重组人C-反应蛋白(rhCRP)的影响并筛选出优葡萄糖碳源.方法 分别以浓度为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%(w/v)的葡萄糖作为碳源,利用毕赤酵母菌株组成型表达rhCRP.取不同表达时间的培养基上清进行Western blot检测及灰度比较分析.结果 毕赤酵母菌株X-33 (pGAPZαA/rhCRP)以葡萄糖作碳源组成型表达rhCRP时,1.0%(w/v)的葡萄糖为优碳源.结论 葡萄糖碳源的浓度可影响Pichia pastoris组成型表达rhCRP的水平.本研究结果将为rhCRP的进一步优化表达及大规模生产提供有力的实验依据.
关键词: C-反应蛋白 葡萄糖 碳源 组成型表达 Pichia pastoris -
聚ADP核糖聚合酶1与DNA甲基化的关系及其可能的机制
聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]是一类存在于多数真核细胞中的蛋白质翻译后修饰酶,主要存在于细胞核内,少量存在于细胞浆内[1],具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用.尽管目前PARP家族至少有18名成员,但研究表明,PARP-1活力占所有PARP蛋白活力的90%以上.PARP-1在绝大多数组织中为组成型表达,但受到DNA链断裂等损伤激活后,其活力会立即上升500倍以上[2-3].PARP-1是该家族中重要的一员,具有保持染色体结构完整、参与DNA复制和转录的功能[4-6],在维持基因组稳定和细胞死亡及调控基因组的甲基化模式的过程中发挥着重要作用[7-9].
-
毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价
目的 构建毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶(staphylococcus nuclease,SNase,NucA),以评价其表达外源蛋白的能力.方法 从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP)片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经Sac Ⅰ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性.结果 组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的蛋白相对分子质量约为17 000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显著的核酸酶活性.结论 成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础.
关键词: 毕赤酵母 甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子 组成型表达 葡萄球菌核酸酶 -
人内皮抑素在毕赤酵母中的组成型表达及其活性检测
为获得大量具有生物学活性的重组人内皮抑素(Endostatin),在毕赤酵母中进行组成型表达的研究.将由毕赤酵母偏爱密码子组成的Endostatin cDNA插入组成型载体pGAPZαA中,构建表达载体pGAPZαA-ENDO,并转化到毕赤酵母X-33中.重组菌株在甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP)启动子的调控作用下,进行组成型表达Endostatin蛋白.重组人Endostatin产量达到102mg/L.Western blot显示:表达蛋白能与兔抗Endostatin的多克隆抗体特异性结合.纯化后的重组Endostatin具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞增殖的活性.利用毕赤酵母组成型表达系统能获得大量具有生物活性的Endostatin蛋白.
-
人脐静脉内皮细胞表达蛋白酶激活受体
目的 研究蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)在人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein cndothelial cells,HUVECs)上的组成型表达.方法 采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术,检测PARs的mRNA和蛋白质表达.结果 未经任何激活剂处理的HUVECs表达PAR1、PAR2和PAR3 mRNA.PAR1、PAR2和PAR3的阳性细胞率分别为43.3%、49.2%和56.7%,其平均荧光强度分别为42.1、22.5和24.3.结论 HUVECs组成型表达PAR1、PAR2和PAR3,以为PARs的生理和病理生理功能研究提供依据.