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全蝎-蜈蚣对 CIA 大鼠外周血协同刺激分子 B7-1,B7-2表达的影响
目的:观察全蝎-蜈蚣对胶原免疫性关节炎( collagen-induced arthritis,CIA)大鼠外周血协同刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表达的影响.方法:Wistar大白鼠60只,随机分成6组,即正常组,模型组,全蝎-蜈蚣高,中,低剂量组,Ⅱ型胶原蛋白( typeⅡcollagen,CⅡ)组.采用Ⅱ型胶原蛋白诱导法复制大鼠关节炎模型,并ig给予全蝎-蜈蚣混悬液(0.4,0.2,0.1 g·kg-1)进行干预,CⅡ组予CⅡ白冻干粉60 μg· kg -1 ig进行对照,共计40 d.并采用流式细胞术检测大鼠外周血单核细胞表达CD80,CD86情况.结果:与正常组大鼠外周血 CD80+(44.8±11.61)％ CD80+CD86-(32.4±9.18)％比较,模型组大鼠外周血CD80+细胞(55.7±6.31)％及CD80+ CD86 -细胞(43.7±10.26)％水平显著升高(P＜0.05)；与模型组比较,全蝎-蜈蚣中、低剂量组大鼠外周血CD80+细胞(46.6±6.34)％,(30.8±15.14)％明显降低(P＜0.05),及且全蝎-蜈蚣低剂量组大鼠外周血CD80+ CD86 -细胞(25.3±12.67)％水平显著下降(P＜0.05).结论:全蝎-蜈蚣药对治疗CIA大鼠的作用机制可能与降低外周血单核细胞表达CD80+及CD80+ CD86 -分子表达水平相关.
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B7-1与B7-2对调节人IL-2基因的转录因子NF-κB和AP-1的相同作用
为了解B7共刺激对细胞因子,特别是对IL-2 mRNA及转录因子NF-κB出和AP-1的影响,探讨B7介导的IL-2调节的分子机制,在异基因混合淋巴细胞反应(MLR)体系中分别或联合加入抗B7-1、抗B7-2单克隆抗体和CTLA-4 Ig以阻断B7/CD28信号传导,通过竞争性PCR定量检测其对IL-2和IL-4 mRNA的影响,并初步测定IFN-γ mRNA的改变,同时用转染MHCⅡ类分子及联合转染等量B7-1或B7-2的NIH3T3转基因细胞tDR7,tDR7/B7-1和tDR7/B7-2刺激CD28+T细胞,通过DNA-蛋白结合实验观察B7对IL-2转录因子NF-出和AP-1的影响.结果表明:抗B7-2单抗和CTLA-4 Ig可明显抑制B7介导的IL-2和IL-4 mRNA合成,而抗B7-1单抗仅有轻度抑制作用,2种或3种抗体联合应用时抑制作用相加.MLR 1-6小时,单独tDR7即可诱导NF-κB的表达,联合转染B7早期对其结合活力无明显影响,6小时后tDR7诱导作用减弱,B7却可显著延长tDR7的诱导作用至72小时.tDR7早期同样可诱导AP-1的表达,联合转染B7分子在24小时内对其有一定的抑制作用,而在反应后期可延长tDR7对AP-1的上调作用,B7-1与B7-2间作用未见明显不同.结论:B7通过减少IL-2 mRNA降解和影响基因转录而上调IL-2分泌,并可同时影响多种细胞因子分泌;在转录水平B7-1与B7-2作用未见明显不同,提示两者的功能差异可能与细胞表达和时间动力学不同有关.详细了解B7介导的T细胞免疫耐受的分子机制有助于设计更好的临床方案预防移植排斥和GVHD.
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B7-2和PD-L1 mRNA表达在慢性乙型肝炎免疫耐受中的意义
T淋巴细胞介导的细胞免疫反应是乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要免疫反应,而T细胞的活化依赖于双信号的刺激,第一信号来自抗原,第二信号由共刺激分子提供.B7-2(CD86)和PD-L1(B7-H1)是正负共刺激分子的代表,B7-2组成型表达于抗原提呈细胞上,上调速度非常快,迅速促进T细胞的分化和产生效应[1];PD-L1被广泛地诱导性表达在身体各器官组织中,对免疫应答起负性调控作用,减弱T细胞的免疫应答,是诱导免疫耐受和T细胞凋亡的主要共刺激分子[2].
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B7-2(CD86)协调刺激因子在急性实验性变态反应性脑脊髓炎(AEAE)发挥主导作用
目的探讨协调刺激分子B7-1(CD80)和B7-2(CD86)在急性EAE发病过程中的作用.方法观察抗B7-1和B7-2抗体在体外对淋巴细胞抗原特异性增殖反应和细胞因子分泌的抑制作用和在体内对EAE发生过程的影响.结果抗B7-2抗体抑制PLP136-150抗原引起的特异性细胞增殖和IL-2产生,抗B7-2抗体处理过的淋巴母细胞诱导轻症被动EAE;在主动EAE诱导的早期抗B7-2抗体虽能延缓发病时间但加重病情,可能与IL-4分泌不足有关;当临床EAE首发症状出现时,抗B7-2抗体减轻其临床表现.结论协调刺激分子B7-2在AEAE发生过程中发挥重要作用.
关键词： 多发性硬化 实验性变态反应性脑脊髓炎 协调刺激分子B7-1 B7-2 -
B7-1及B7-2绒毛共刺激分子习惯性流产不明原因患者体内分子的表达研究
目的：探讨不明原因习惯性流产（UHA）患者体内绒毛共刺激分子B7-1和B7-2的表达情况。方法：分别选取35例UHA患者作为病例组，50例正常妊娠组和50例正常未妊娠组，采用Epics-XLII型流式细胞仪记录单核细胞中的B7-1和B7-2阳性细胞百分比。结果：3组的B7-1水平差异有统计学意义（F＝23.725，P＝0.000），病例组高于正常妊娠组和正常未孕组（P＜0.05）；3组的B7-2水平差异有统计学意义（F＝19.807，P＝0.001），病例组低于其他两组（P＜0.05）；相关性分析：B7-1与不明原因习惯性流产疾病呈正相关关系，r＝0.832（t＝5.632，P＝0.012）；B7-2与不明原因习惯性流产疾病呈负相关， r＝-0.745（t＝6.032，P＝0.009）。结论：不明原因习惯性流产患者体内B7-1较高，B7-2较低，通过选择性的减弱B7-1水平，增强B7-2水平或可改善不明原因习惯性流产患者病情。
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X射线全身照射对免疫细胞共刺激分子表达的影响
目的探讨低剂量电离辐射对免疫细胞表面分子的影响.方法用流式细胞术FITC-CD28/PE-CTLA-4双染法观察了小鼠胸腺和脾细胞的CD28和CTLA-4表达变化,用免疫细胞化学(ABC)法观察了小鼠腹腔巨噬细胞B7-1和B7-2的表达变化.结果低剂量电离辐射和较高剂量电离辐射均能增强腹腔巨噬细胞B7分子的表达;同时发现,低剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CD28的表达,而CTLA-4的表达降低,脾细胞较胸腺细胞更明显.较高剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CTLA-4的表达,同时抑制两种细胞CD28的表达,以脾细胞为更显著.结论共刺激分子CD28和B7的表达上调可能是低剂量电离辐射免疫兴奋效应机理中的重要因素.
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吸烟对大鼠肺组织B7-1/B7-2及其相关配体表达的影响
目的 通过研究吸烟对大鼠肺组织B7-1/B7-2及其相关配体表达的影响,探讨专职抗原提呈细胞(APC)在吸烟所致肺部慢性炎症发生发展中的作用.方法 将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为不吸烟组、吸烟6周组和吸烟12周组,每组10只.采用免疫组化半定量法测定大鼠气道周围肺间质中慢性炎症细胞胞膜B7-1B7-2、CD28和CTLA-4的表达水平.结果 吸烟6周组与吸烟12周组大鼠肺组织B7-1、B7-2、CD28和CTLA-4表达量较不吸烟组均显著增高(P＜0.01),吸烟12周组较吸烟6周组表达量也均增高(P＜0.01),随吸烟时间的延长各指标表达量均呈上升趋势.结论 吸烟可引起大鼠肺组织B7/CD28/CTLA-4表达水平的增高,提示APC可能在吸烟所致肺部慢性炎症发生发展中起重要作用.
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肾移植的临床进展第五节肾移植免疫现状(下)
3T淋巴细胞的共刺激位于巨噬细胞、树突状细胞及激活的B细胞表面参与共刺激的蛋白称为B7.而在T淋巴细胞表面则有B7的受体CD28.B7-CD28的结合对T细胞具有共刺激作用,辅助T细胞繁衍、分化、成熟.如B7-CD28被阻断,T细胞表现无反应.激活的人类B细胞,有B7-1、B7-2、B7-3三种表达.即使B细胞未受到刺激,B7-2的mRNA亦有表达,而B7-1一般于刺激,后4小时始出现,24小时后才能充分表达,故B7-2能较早地传导重要的共刺激信号.
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人B7-1和B7-2 cDNA的克隆及鉴定
目的:为探索性构建全新型重组人B7-PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中克隆N-末端分别缺失34和16个氨基酸的人B7-1和B7-2基因胞外区,并构建含此基因的重组质粒.方法:根据B7-1和B7-2基因序列设计合成可扩增B7-1和B7-2 cDNA的特异性引物,用RT-PCR的方法从Raji细胞总RNA中扩增B7-1和B7-2 cDNA,并克隆至pGEM-T载体中,经酶切鉴定后再进行序列分析.结果和结论:从Raji细胞中扩增出预期的624和675bp的B7-1和B7-2 cDNA,将其克隆至pGEM-T载体中,分别经EcoRI/HindⅢ和BamHI/Sphl双酶切电泳和序列分析确证,为进一步构建人B7-PE40外毒素融合蛋白奠定了基础.
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排斥反应时移植肾组织B7-2的表达
[目的]检测排斥反应时移植肾组织内B7-2的表达情况.[方法]对同种异体移植肾患者行经皮肾穿刺活检获取术前(供肾修整结束时)、术后7 d、1、6个月、1年或以上的植肾组织,用免疫组化方法检测活检组织中B7-2的表达情况.[结果]53例肾移植受体共行肾活检198次,B7-2阳性表达主要见于上皮细胞和炎性浸润细胞.移植后7 d阳性表达率显著上升,1个月后下降至术前水平;急性排斥反应时阳性表达率明显上升,抗排斥治疗1周后下降至术前水平;急性排斥反应组的阳性表达率显著高于非急性排斥反应组.系膜细胞,肾小管上皮细胞和血管内皮细胞表达均阴性.[结论]B7-2分子表达与排斥反应的发生密切相关.
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妊娠期高血压疾病患者胎盘共刺激分子 B7-1和B7-2的研究
目的：探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘巨噬细胞共刺激分子B7-1、B7-2的表达水平，探讨B7-1、B7-2和B7-1/B7-2在发病中的作用。方法采集28例子痫前期患者（包括12例轻度和16例重度），12例妊娠期高血压患者，12例正常妊娠妇女的胎盘巨噬细胞，用流式细胞技术分别测B7-1、B7-2的表达率。结果子痫前期患者B7-1/B7-2（0．75±0．13）均高于其余各组（ P ＜0．05），子痫前期组胎盘B7-1（19．50±4．05％）高于其它各组（ P ＜0．05），结论妊娠期高血压疾病患者胎盘局部B7-1的过度表达及B7-2和B7-1/B7-2失衡可能是其发生的重要原因。
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原因不明复发性流产患者外周血Th1/Th2与共刺激分子B7-1、B7-2的关系
目的 探讨原因不明复发性流产患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2、辅助性T淋巴细胞1(Th1)及辅助性T淋巴细胞2(Th2)的表达水平,分析B7-1、B7-2与Th1/Th2比率的关系.方法 流式法检测20例原因不明复发性流产女性(流产组)、19例正常妊娠女性(正常妊娠组)和15例正常未孕女性(正常未孕组)的Th1/Th2和B7-1、B7-2的表达水平.结果 流产组Th1/Th2(15.8±4.2)、B7-1的表达水平(11.4±1.6)%,显著高于其余2组(P<0.01);流产组B7-2的表达水平(17.5±2.0)%,显著低于其余2组(P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-1的表达水平之间存在显著正相关(r=0.9136,P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-2的表达水平之间存在显著负相关(r=-9571,P<0.01).结论 原因不明复发性流产患者B7-1、B7-2、Th1及Th2的表达水平显著异常,B7-1、B7-2与Th1/Th2比率显著相关,可能是原因不明复发性流产发生的重要原因.
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原因不明习惯性流产患者绒毛共刺激分子B7-1和B7-2的表达水平变化
近年来,国内外对原因不明习惯性流产病因的研究取得了很大进展,其病因十分复杂,涉及遗传、内分泌、免疫学机制、解剖和感染等诸多因素,已有研究证明80%的原因不明习惯性流产与免疫学机制有关[1,2],其中淋巴细胞亚群及其相关细胞因子与原因不明习惯性流产关系更是目前研究的新热点.研究发现辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2(Th1/Th2)比值失衡与原因不明习惯性流产有密切关系[3].但导致其失衡的原因和机制尚不清楚,B7-1,B7-2是B7家族中重要的共刺激分子,有研究表明,B7家族介导的免疫应答反应参与T淋巴细胞的活化[4].有关B7-1,B7-2在原因不明习惯性流产患者绒毛中表达的研究尚未见报道.本文运用流式细胞技术,首次检测原因不明习惯性流产患者绒毛B7-1、B7-2表达水平变化.
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急性心肌梗死患者外周血B7-1、B7-2的临床意义
急性心肌梗死(AMI)的发病与炎症有密切关系[1].本研究通过检测AMI患者发病时外周血B7-1、B7-2的表达水平,探讨其在AMI发病和损伤中的作用.
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蜕膜共刺激分子B7-1和B7-2与原因不明习惯性流产的关系
原因不明习惯性流产是妇产科常见疾病,其病因至今尚未阐明.蜕膜是母胎直接接触的界面,是母体产生免疫应答的重要部位.研究表明,蜕膜辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2(Th1/Th2)比值失衡与原因不明习惯性流产有密切关系[1],共刺激分子B7-1和B7-2在调控Th分化发挥了重要作用[2].本文运用流式细胞技术,测定蜕膜巨噬细胞表面B7-1和B7-2的表达水平,了解B7-1和B7-2在原因不明习惯性流产发生中的作用和意义.
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B7-1、B7-2单抗对狼疮肾炎小鼠模型的免疫干预及机制研究
目的 探讨B7-1、B7-2单克隆抗体分别通过阻断或削弱B7/CD28协同刺激分子信号通路对SLE小鼠模型的免疫干预效应以及可能的分子机制.方法 C57BL/J6×BALB/c杂交F1代小鼠,取60只雌性F1代小鼠分成4组:正常对照组,模型组,B7-1干预组,B7-2干预组.B7-1干预组在淋巴细胞注射完后的第1、3、5、8、15、30、60天,通过尾静脉分别注射B7-1单抗(克隆4E5),每只小鼠注射抗体量为8 mg/kg,B7-2干预组在相同时间给予B7-2单抗(克隆1D1),模型组相同时间给予等剂量的小鼠Ig同型对照.分析自身抗体、尿蛋白、免疫复合物和肾脏组织改变情况等指标.结果 模型组小鼠第2周就能检测到dsDNA的表达,4周能检测到ANA的表达.B7-1干预组、B7-2干预组能检测到dsDNA和ANA的时间晚于模型组,而且抗体滴度都低于模型组.第12周,模型组小鼠均出现蛋白尿.B7-1干预组和B7-2干预组分别有50％、40％的小鼠出现蛋白尿,蛋白量低于模型组.模型组小鼠肾脏组织HE染色可见肾小球组织病理病变明显,结构紊乱,免疫荧光染色显示肾小球部位可见颗粒状或线性的荧光.电子显微镜扫描可见肾小球脏层上皮细胞和基底膜之间存在大量电子致密物,基底膜节段性增厚.B7-1干预组、B7-2干预组肾小球病理改变较轻,肾小球部位可见少量荧光,肾小球脏层上皮细胞和基底膜之间可见少量电子致密物,基底膜厚度也没有明显增厚.结论 B7-1、B7-2单抗干预都能阻断或削弱B7/CD28共刺激信号通路,减少自身抗体的生成,从而能减轻免疫复合物对狼疮小鼠肾功能的损伤.B7-2单抗能更特异性地减少自身抗体的产生,因此对SLE小鼠肾炎的发生发展有更好的延缓作用.提示阻断协同刺激分子的方法有望为SLE等自身免疫性疾病提供高效低毒的生物疗法.
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川芎嗪和地塞米松对类风湿关节炎患者免疫细胞膜分子表达的研究
目的 探讨川芎嗪和地塞米松对活动期类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC) B7-1和B7-2 mRNA表达的影响,为临床使用川芎嗪治疗RA提供理论依据.方法 取活动期RA患者PBMC培养,分别以川芎嗪、地塞米松和川芎嗪+地塞米松进行处理,以PBS对照,采用半定量逆转录PCR的方法,检测PBMC B7-1和B7-2 mRNA表达.结果 与对照组相比,川芎嗪组和地塞米松组均能明显抑制B7-2 mRNA表达(P＜0.05),而川芎嗪+地塞米松组对B7-2 mRNA表达的抑制更加明显(P＜0.01).各组对B7-1 mRNA表达均无显著影响(P＞0.05).结论 川芎嗪能下调活动期患者PBMC B7-2 mRNA表达,合并使用地塞米松能更好地抑制B7-2 mRNA表达.
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X射线对小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-1和B7-2的影响
目的:观察X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-1和B7-2的影响。方法:采用免疫组织化学法（ABC法）。结果:小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-2达到高峰的时间早于B7-1，而且B7-2表达幅度也高于B7 -1。剂量-效应关系的研究表明, B7-1 和B7-2的表达均在0.07 5 Gy剂量点出现峰值，而在较大剂量照射时也出现一个峰值。但在不同分度分析结果中发现 ，低剂量X射线照射组的高密度细胞百分数比较大剂量组多。结论: B7分子的表达上调可能是参与低剂量电离辐射免疫增强效应的重要因素。
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鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及生物学特性研究
以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5.快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类.经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠.经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml.采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%.将6A5(终浓度为5 μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P＜0.05).以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养.经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P＜0.05).提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值.
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阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤
目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用.方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2 mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响.CytoTox 96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响.结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39∶1～25∶1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显.结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用.
