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干扰素治疗慢性乙型肝炎患者B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系
目的 初步探讨聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞和mDCs上共刺激分子B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系.方法 纵向观察接受聚乙二醇干扰素α-2a治疗的28例CHB患者其mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达变化,分析B7-H1/PD-1表达与聚乙二醇干扰素α-2a治疗效果之间的关系.结果 聚乙二醇干扰素α-2a治疗12周时,早期病毒学应答组患者B7-H1在CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、mDC上表达及PD-1在CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞上表达水平均明显低于非早期病毒学应答组患者,两组差异显著,P值分别为0.009,0.009,0.009,0.042,0.004,0.017,0.004.结论 聚乙二醇干扰素α-2a抗病毒疗效可能与CHB患者mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达相关.
关键词： 慢性乙型肝炎 B7-H1 PD-1 共刺激分子 聚乙二醇干扰素α-2a -
B7-H1启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测
目的 构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体,转染肝癌HepG2细胞进行活性检测.方法 PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段,并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子,经双酶切和测序鉴定后,将重组子转染HepG2细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶表达活性.结果 成功地构建了6种不同长度的PGL3-B7-H1-Luc荧光素酶表达质粒,分别命名为P88、P175、P203、P398、P723和P960.瞬时转染HepG2后经报告基因检测,P175、P203、P398、P723和P960所含5段启动子均具有转录活性,IFN-y作用后启动子活性明显增强,而P88转染组IFN-y作用后,荧光素酶活性无显著变化.结论 成功构建了B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体.
关键词： B7-H1 启动子 双荧光素酶报告基因检测 活性测定 -
共刺激分子B7-H1在胃癌中表达上调
目的 了解胃癌患者胃黏膜组织中共刺激分子B7-H1的表达情况及其与肿瘤转移和预后的关系.方法 应用流式细胞技术、免疫化学染色、免疫荧光染色与Western blot检测胃癌细胞系SGC-7901与新鲜切除的胃癌组织、癌旁组织及其远端正常胃黏膜组织中B7-H1的表达,并对相关数据进行相应的统计学分析,确定B7-H1表达水平与患者临床病理指标的关系.结果 SGC-7901细胞中有B7-H1蛋白表达,主要分布在细胞膜,细胞质中少量;胃癌组织中B7-H1阳性表达率为(13/21)62%,癌旁组织中为(7/21)33%,而正常胃黏膜组织中没有B7-H1表达.统计分析显示,胃癌组织中B7-H1表达与肿瘤的浸润深度、周围淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关(P<0.05).结论 B7-H1分子可作为胃癌早期诊断与预后判断的新指标.
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不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位
目的 通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法 上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度.结果 B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中.结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致.结论 B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达.
关键词： B7-H1 多药耐药 逆转录-聚合酶链反应 胃癌细胞系 -
共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达水平和分布特征
目的:探讨3种共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在人类血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达及分布特征.方法:分别采用RT-PCR、qPCR、Western blot和流式细胞术检测13株血液肿瘤细胞中B7-H1、B7-H3和B7-H4的表达及亚细胞定位情况,设12例志愿者外周血单个核细胞(PB MNC)为对照.结果:3种共刺激分子的mRNA在12例志愿者PB MNC和13株血液肿瘤细胞中广泛表达,其中B7-H4表达水平相对偏低;3种共刺激分子分别在Maver、Z138和HL-60中表达高,B7-H3和B7-H4在CZ1中不表达.3种共刺激分子的胞核及胞浆蛋白仅在恶性血液肿瘤细胞中异常高表达,分别在U937、Z138和Raji细胞中表达高,B7-H3和B7-H4在CZ1细胞中不表达.在同一肿瘤来源的细胞株中,3种共刺激分子的mRNA和胞核及胞浆蛋白表达均存在差异,且差异不全一致.B7-H3膜蛋白在U937、Maver和Z138中表达丰度较高;B7-H1和B7-H4的膜蛋白在13株细胞中呈不表达或低表达.结论:共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在mRNA水平均广泛表达,但蛋白水平仅在血液肿瘤细胞中异常高表达,且亚细胞定位多在胞核及胞浆,膜蛋白水平普遍低表达或不表达.同一肿瘤来源的细胞株中3种共刺激分子的表达可存在差异.
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B7-H1在人骨髓间充质干细胞上的表达及其对T淋巴细胞增殖的影响
目前关于人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)的免疫调节机制尚不完全清楚.为探讨B7-H1在hBMSC上的表达水平及hBMMSC的免疫调节机制是否与B7-H1介导的信号通路(B7-H1/PD-1)有关,首先分离、培养、鉴定hBMMSC,采用流式细胞术、RT-PCR、Western-blot检测B7-H1在hBMMSC上的表达水平.进一步采用混合淋巴细胞培养法(MLC)观察hBMMSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用,然后使用功能级的抗B7-H1单克隆抗体阻断B7-H1,用CCK-8试剂盒检测阻断前后T淋巴细胞增殖活性.结果表明:hBMMSC高表达B7-H1分子;表达B7-H1的hBMMSC能有效地抑制T淋巴细胞的增殖,其抑制作用与hBMMSC数量呈剂量依赖性;使用抗B7-H1单克隆抗体阻断B7-H1后hBMMSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用显著降低,抑制率由64.1%降低至38.75%.结论:B7-H1在hBMMSC上高表达,B7-H1介导的信号通路(B7-H1/PD-1)参与了hBMMSC的免疫调节作用.
关键词： 骨髓间充质干细胞 免疫调节 B7-H1 B7-H1/PD-1信号通路 -
IFN-γ经共抑制分子B7-H1正向调控小鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制的研究
目的 探讨IFN-γ通过137-H1/PD-1通路正向调节骨髓问充质干细胞(MSC)免疫抑 制作用机制,为MSC用于治疗免疫性疾病提供新的理论依据.方法 首先体外获得纯化鼠源MSC 并进行三向分化鉴定;间充质干细胞和淋巴细胞反应体系进行共培养,3H掺入试验测定细胞增殖水 平;ELISA检测共培养上清中IFN-γ、TGF-β、TNF-α、IL-10因子的表达水平;流式检测共培养中MSC B7-H1分子的变化;siRNA干扰MSC B7-H1后,3H掺入试验测淋巴细胞增殖水平的改变,采用Tr-answell培养方法 确认MSC通过细胞间接触发挥作用.结果 体外鼠源MSC经过5代的反复贴壁纯化之后,形态均一纯度高,并具有向脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞分化的能力;MSC与混合淋巴细胞反应、Con A刺激的淋巴细胞反应以及anti-CD3/CD28刺激活化的淋巴细胞反应混合共堵养,3H掺入试验结果 均显示增殖反应被抑制(P=0.0167,0.0081,<0.0001),其抑制作用呈现对MSC细胞的剂量依赖;共培养上清中细胞因子IFN-γTNF-α均显著升高,而TGF-β、IL-10未检测到,同时共培养中MSC表面B7-H1分子明显表达上调(P<0.05);经B7-H1特异siRNA干扰MSC后,共培养并检测淋巴细胞增殖反应,细胞增殖水平明显较干扰前提高(P<0.05),Transwell膜分隔后MSC抑制干细胞活化明显减弱(P<0.05).结论 MSC经共培养环境中IFN-γ刺激后,表面B7一H1分子的表达上调并通过B7-H1/PD-1通路抑制T细胞活化增殖.将来这种MSC可以用于治疗多种自身免疫性疾病.
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B7-2和PD-L1 mRNA表达在慢性乙型肝炎免疫耐受中的意义
T淋巴细胞介导的细胞免疫反应是乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要免疫反应,而T细胞的活化依赖于双信号的刺激,第一信号来自抗原,第二信号由共刺激分子提供.B7-2(CD86)和PD-L1(B7-H1)是正负共刺激分子的代表,B7-2组成型表达于抗原提呈细胞上,上调速度非常快,迅速促进T细胞的分化和产生效应[1];PD-L1被广泛地诱导性表达在身体各器官组织中,对免疫应答起负性调控作用,减弱T细胞的免疫应答,是诱导免疫耐受和T细胞凋亡的主要共刺激分子[2].
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B7-H1/PD-1共刺激途径对慢性乙型肝炎患者HBV特异性T淋巴细胞功能的影响
目的 研究B7-H1/PD-1共刺激信号途径对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者HBV特异性T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 流式细胞术检测CHB患者和健康人外周血髓样树突细胞(myeloid dendritic cells,mDC)上B7-H1及T淋巴细胞上PD-1的表达水平,并分析患者B7-H1和PD-1的表达水平与ALT水平的相关性;体外培养CHB患者单核细胞来源的树突细胞(monocyte-derived cells,MoDC),HBcAg负载后用"细胞因子鸡尾酒"(TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE2)促成熟.MoDC和自体T淋巴细胞混合培养,并对B7-H1/PD-1途径进行阻断处理,3H-TdR掺入法检测HBV特异性T淋巴细胞增殖的能力;ELISA法检测混合淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度;ELISPOT法检测分泌IFN-γ的T淋巴细胞频数.结果 B7-H1及受体PD-1在CHB患者外周血mDC和T淋巴细胞上的表达水平明显升高,且B7-H1和PD-1的表达水平与患者的ALT水平呈明显的正相关;阻断B7-HI/PD-1共刺激途径,不但能够促进HBV特异性T淋巴细胞的增殖和Ⅰ型细胞因子分泌,同时可以提高分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞的频数.结论 CHB患者B7-H1和PD-1表达水平的升高,降低了HBV特异性T淋巴细胞免疫功能.
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共刺激分子B7-H4与自身免疫病
T细胞激活需要两种信号途径:一种是通过T细胞表面受体(TCR)-人类主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物特异性抗原信号,第二种是通过抗原提呈细胞(APC)表面分子提供的共刺激信号.后者需要共刺激分子的参与,B7家族就是这一类分子,包括B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC和B7-H4.B7类分子主要与T细胞表面相应受体结合,在抗原特异性免疫应答过程中发挥正向或负向调控作用[1].
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B7-H1和B7-H4在卵巢癌组织中表达的临床意义
目的：探讨协同刺激分子B7-H1和B7-H4在卵巢癌组织中表达的临床意义。方法收集2005年2月至2009年12月在我院收治的112例上皮性卵巢癌及10例良性卵巢囊肿的组织蜡块制作成组织芯片，免疫组化检测芯片B7-H1和B7-H4的表达，χ2检验分析其表达水平和患者临床病理参数之间的关系。采用Kaplan-Meier和Log-rank检验及多因素Cox回归进行生存分析。结果B7-H1和B7-H4在10例良性卵巢囊肿中均为低表达，在112例卵巢癌组织中高表达，所占百分比分别为55.4%（62/112）和37.5%（42/112）；两者同时高表达率为31.3%（35/112）。两者共同高表达者相对其余患者无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）差异均有统计学意义（χ2值分别为45.60和37.99，P值均＜0.001）。Cox多因素分析结果显示，B7-H1和B7-H4的表达情况是影响患者生存的独立预后因素。结论卵巢癌组织中B7-H1和B7-H4共同高表达与预后差和生存期短相关，可为卵巢癌的免疫靶向治疗提供思路。
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B7-H1与胃肠道肿瘤
恶性肿瘤发生发展过程中会产生突变蛋白,可作为抗原而被免疫系统识别.然而机体往往难以产生有效控制肿瘤的免疫反应,即形成所谓肿瘤的免疫逃逸状态.B7-H1是表达在免疫和肿瘤细胞中的B7家族分子,被发现是维持免疫逃逸的重要机制.B7-H1作为共刺激分子,能够在T细胞免疫起始和效应阶段下调抗肿瘤免疫反应;又参与调节肿瘤细胞自身增殖、凋亡和侵袭等生物学行为.阻断B7-H1,在临床前肿瘤模型和临床试验中显现出巨大的抗肿瘤效应.B7-Hl阻断可能为胃肠道肿瘤提供新的治疗途径.本文就B7-Hl参与肿瘤免疫逃逸的机制及在胃肠道肿瘤中的研究进展作一综述.
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B7-H1在HBV感染导致肝细胞癌中的调控作用
目的：探讨B7-H1（B7-homolog 1）在乙型肝炎病毒（HBV）感染导致的肝细胞癌（HCC）中的作用机制。方法通过慢病毒lentivirus-B7-H1转染人正常肝细胞系L02、人肝癌细胞系HepG2、HepG2.2.15后，应用MTT法观察细胞活性，流式细胞仪检测细胞的凋亡情况，Western blot技术检测蛋白B7-H1、Survivin蛋白的变化情况。结果抑制B7-H1表达水平后，通过MTT检测表明细胞系HepG2.2.15细胞活性比HepG2细胞、L02细胞活性降低，流式细胞仪检测凋亡增加，同时Western blot显示Survivin蛋白的表达减少。结论通过慢病毒转染抑制B7-H1的表达可以促进细胞系HepG2.2.15凋亡，B7-H1可能是通过调控Survivin的变化影响HBV感染的肿瘤细胞的增殖与凋亡。
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B7-H1与移植免疫
B7-homolog 1(B7-H1)是迄今发现的B7家族中较新的共刺激分子.它对T细胞具有双重效应,可以激活初始T细胞,抑制活化的效应T细胞.参与多种免疫过程的发生.在一些动物器官移植模型研究中,发现B7-H1在抑制免疫排斥,诱导免疫耐受,保护移植物中有重要的作用.以B7-H1为靶点的干预方法在未来可能成为器官移植后免疫抑制治疗的有效方法.本文就B7-H1在移植免疫中作用的研究进展做一综述.
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B7-H1与肾癌免疫治疗
B7-H1是近年新发现的免疫分子,是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一.也是肾痛破坏宿主T细胞调节抗肿瘤免疫的机制之一.本文综述了该分子及其受体的结构、分布及功能,探讨其在肾癌免疫治疗中可能的重要作用.
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膀胱癌组织中B7-H1表达水平及其对经尿道膀胱肿瘤电切术后膀胱灌注治疗效果的影响
目的 探讨膀胱癌组织中B7-H1表达水平及其对经尿道膀胱肿瘤电切术后膀胱灌注治疗效果的影响.方法 选取20例膀胱癌患者作为研究对象,采用回顾性分析法分析所有患者的临床资料,所有膀胱癌患者均行经尿道膀胱肿瘤电切术且术后均行膀胱灌注治疗,将膀胱癌组织作为A组,将癌旁正常组织作为B组.根据资料结果比较所有研究对象的B7-H1水平以及所有膀胱癌手术患者的术后治疗情况及效果.结果 A组膀胱癌组织中B7-H1表达水平明显高于B组正常膀胱组织(P﹤0.05);不同临床分期和病理分级膀胱癌患者间B7-H1表达水平比较,差异有统计学意义,且随着临床分期和病理分级越高其B7-H1表达水平越高(P﹤0.05);膀胱癌组织B7-H1表达水平与临床分期和病理分级呈正相关(r=0.684、0.762,P﹤0.05).结论 B7-H1在膀胱癌组织中以高水平表达,且临床分期和病理分级越高B7-H1表达水平越高,可考虑作为预测膀胱癌病情发展的指标.
关键词： 膀胱癌组织 B7-H1 表达水平 经尿道膀胱肿瘤电切术 膀胱灌注治疗 -
B7-H1与免疫逃逸及肿瘤耐药
肿瘤对多种药物产生抵抗(即耐药)是治疗失败的主要原因之一,同时也一直是肿瘤治疗领域的重要问题之一.肿瘤耐药的产生与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因、耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)、肺耐药相关蛋白(lung resistance protein,LRP)等的过度表达有关.
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TLR4信号通路参与膀胱癌免疫逃逸机制的研究
目的:研究T24膀胱癌细胞中Toll样受体4(Toll like receptor-4,TLR4)信号通路活化对B7-H1表达的影响,并探讨其参与膀胱癌免疫逃逸的可能机制.方法:培养膀胱肿瘤T24细胞系,以脂多糖(lipopolysaecharides,LPS)模拟TLR4在体内的激活过程,分别用1μg/mL的LPS刺激T24细胞0、2、4、6、8和12 h,流式细胞技术检测T24细胞表面TLR4的表达,RT-PCR技术检测T24细胞中B7-H1 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测T24细胞中B7-H1蛋白的表达.结果:流式细胞学检测结果显示,以1 μg/mL的LPS刺激不同时间T24细胞TLR4表达的阳性率,0h为(3.34士0.86)％,2h为(6.71±1.38)％,4h为(9.71士1.24)％,6h为(11.57±0.91)％,8h为(25.24士5.32)％,12 h为(21.67士1.81)％,组间差异均有统计学意义,F=83.049,P＜0.05.RT-PCR检测结果显示,LPS刺激0h时B7-H1 mRNA的相对表达量为0.86士0.06,2h为1.30±0.11,4h为1.67±0.20,6h为1.99±0.10,8h为2.57±0.23,12 h为1.51士0.04,组间差异均有统计学意义,F=84.719,P＜0.05.蛋白质印迹检测结果显示,LPS刺激0h时B7-H1蛋白质相对表达量为0.66±0.08,2h为0.65±0.10,4h为0.87士0.11,6h为1.07±0.23,8h为1.45±0.19,12 h为1.13士0.06,组间差异均有统计学意义,F=195.258,P＜0.05.TLR4表达分别与B7-H1 mRNA(r1 =0.753)及蛋白(r2=0.836)表达显著正相关,P＜0.05.结论:通过LPS激活TLR4信号通路可以上调B7-H1 mRNA及蛋白的表达,而这有可能是TLR4信号通路参与膀胱癌免疫逃逸的机制之一.
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胆囊癌患者癌组织中共刺激因子B7-H1和B7-H3的表达水平及意义
目的 探讨共刺激因子B7-H1和B7-H3在胆囊癌患者癌组织中的表达及临床意义.方法 选取2006年8月至2010年8月间陕西省第二人民医院收治的40例胆囊癌患者,取手术切除的癌组织标本为观察组,取癌旁正常组织20例作为对照组,采用免疫组织化学SP法检测两组标本中B7-H1和B7-H3蛋白的表达水平.结果 观察组标本中B7-H1和B7-H3蛋白的表达水平显著高于对照组标本.在观察组标本中表达定位主要浸润胞浆位置,染色呈淡黄色、棕黄色和棕褐色,观察组标本中B7-H1表达阳性细胞以高度浸润为主.胆囊癌(I+Ⅱ)期中B7-H1蛋白表达阳性率高于胆囊癌(Ⅲ+Ⅳ)期,差异有统计学意义(x2 =5.714,P=0.02),胆囊癌(Ⅰ+Ⅱ)期中B7-H3蛋白表达阳性率高于胆囊癌(Ⅲ+Ⅳ)期,差异有统计学意义(x2=4.224,P=0.04).胆囊癌患者B7-H1和B7-H3的阳性表达组,其术后总生存率低于阴性表达组.结论 B7-H1和B7-H3的表达水平有助于胆囊癌的早期诊断,同时其含量可能是胆囊癌预后的独立预测因子之一.
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B7-H1及其受体PD-1在胃癌组织中的表达与意义
目的 探讨B7-H1和PD-1信号通路与胃癌发生的关系.方法 利用免疫组化技术和ANAE染色技术检测胃组织中B7-H1和PD-1的原位表达及肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)浸润情况,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胃癌组织中B7-H1和PD-1 mRNA的表达,利用Western blot技术检测B7-H1蛋白的表达.结果 B7-H1和PD-1在胃癌组织中表达升高,阳性率分别为64.4%和43.8%,而在正常胃组织中不表达.胃癌组织中,B7-H1表达与TIL浸润负相关.B7-H1表达与胃癌的浸润深度、周围淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关,而PD-1与其无关.结论 胃癌组织中B7-H1和PD-1表达升高,B7-H1/PD-1信号通路可能抑制抗肿瘤免疫.B7-H1的表达与胃癌的病程有关,有可能作为判断胃癌预后的指标和胃癌治疗的靶点.
