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蛋白酶激活受体-2与呼吸系统疾病
蛋白酶激活受体(protease-activated receptors,PARs)属于G蛋白偶联的受体家族,目前发现四个亚型,分别命名为:PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4.凝血酶可激活PAR-1、PAR-3及PAR-4;胰蛋白酶、纤维蛋白溶酶及TF/VIIa (组织因子/活化的凝血因子Ⅶ)复合物、活化的凝血因子X (Xa)等可以激活PAR-2.PAR-3和PAR-4主要表达于血小板膜表面,介导凝血酶反应,引起血小板激活、 血液凝固等反应;而PAR-1和PAR-2则表达于多种组织、细胞(包括肿瘤细胞),介导炎症反应、血管生长、动脉粥样硬化、恶性肿瘤侵袭与转移等过程.
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蛋白酶激活受体的研究进展
蛋白酶激活受体属于与G蛋白相偶联、有七个跨膜单位的受体家族,有四个成员:PAR-1,PAR-2,PAR-3和PAR-4.PAR-1是凝血酶受体,PAR-2是胰岛素、肥大细胞纤维蛋白溶酶、凝血因子Ⅶa和Xa和其他未知蛋白水解酶的受体.PAR-2可诱导唾液腺和胰腺的分泌.PAR-1和PAR-2都对胃黏膜有保护作用,但机制不尽相同.在肠黏膜,PAR-2有前炎性和抗炎性双重作用,其和PAR-1,PAR-4均可调节胃肠道平滑肌.蛋白酶激活受体,尤其是PAR-1和PAR-2对调节胃肠道功能有非常重要的作用.
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PARs与消化系肿瘤关系的研究进展
蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PARs)家族是一类与G蛋白相偶联、有7个跨膜单位的受体家族,广泛分布于消化系统脏器及组织.PARs与消化系肿瘤关系密切,主要表现在PARs在肿瘤组织中高表达,其表达与肿瘤的恶性程度及侵袭转移能力正相关性.体外研究表明,利用PARs的激动剂干预肿瘤细胞,可加强其增殖、侵袭转移能力.PARs对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的调控依赖于多种信号转导途径,其作用机制尚不明确,现就此作一综述.
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受体介导的凝血酶对成骨细胞增殖及分化的作用
目的 通过凝血酶对成骨细胞的增殖及分化作用的研究来探讨受体介导的凝血酶的功能.方法 原代成骨细胞分别取自于蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)-1敲除鼠和野生对照鼠的头颅骨.并利用凝血酶,人工合成的PAR-1或PAR-4特异性激活短肽对细胞进行处理,通过对5.溴-2-脱氧尿嘧啶的嵌入及细胞碱性磷酸酶活性的测定探讨PAR-1或PAR-4激活对细胞增殖和分化的影响.结果 在野生鼠成骨细胞,凝血酶及PAR-1激活肽均能促进的细胞增殖和降低碱性磷酸酶的活性,但PAR-4激活肽却无这些作用.然而在PAR-1 敲除鼠的成骨细胞无论是凝血酶还是PAR-4激活肽均不能改变细胞的增殖及碱性磷酸酶的活性.结论 本研究结果 表明凝血酶促进成骨细胞增殖及抑制其分化是通过PAR-1介导的.其他凝血酶受体并不具有此作用.
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蛋白酶激活受体在人单核细胞上的表达
目的 蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)表达于几乎所有的造血细胞上,PARs在单核细胞上的表达结果 不一致,我们用高纯化的人外周血单核细胞研究PARs在单核细胞的表达.方法 采用密度梯度离心法和磁激活细胞分选法分离人外周血单核细胞,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪分析单核细胞PARs的表达情况.结果 人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3和PAR-4但不表达PAR-2蛋白质,单核细胞表达PAR-1和PAR-3,但是不表达PAR-2和PAR-4 mRNA.结论 单核细胞表达PARs,这为进一步研究PARs在单核细胞的功能奠定了基础.
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人单核细胞表达蛋白酶激活受体
目的:使用高纯化的人外周血单核细胞研究蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)在单核细胞上的表达.方法:采用密度梯度离心法和磁激活细胞分选法分离人外周血单核细胞.采用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析单核细胞PARs表达情况.结果:流式细胞分析示人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3、PAR-4蛋白质,但不表达PAR-2蛋白质;RT-PCR示单核细胞表达PAR-1和PAR-3,但不表达PAR-2和PAR-4 mRNA.结论:单核细胞表达PARs,为进一步研究PARs在单核细胞上的功能提供依据.
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抗血小板剂在华专利概述
本文概述了近5年来涉及二磷酸腺苷(ADP)介导的信号传导、蛋白酶激活受体(PAR)1拮抗和整合素(integrin)αⅡbβ3拮抗等数个作用机制的抗血小板剂的在华专利.通过分析专利著录项目和发明内容,发现专利热点并展望未来的发展方向.分析表明,对用于治疗心血管疾病如心绞痛的抗血小板药物目前仍以ADP通路抑制剂为主,在今后的一段时间之内仍将是研究的主要方向.此外,国内研究者依托对中医中药研究、植物提取物方面的优势,在天然产物的结构上引入新的基团或小分子药物不失为一条创新的道路.
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血必净注射液与活化蛋白C对脂多糖诱导大鼠单核细胞组织因子干预效果的比较研究
目的 比较血必净注射液与活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)刺激大鼠单核细胞表达组织因子(TF)及蛋白酶激活受体1(PAR-1)的影响.方法采用黏附法分离正常大鼠外周血单核细胞后,按随机数字表法分为正常对照组、LPS刺激组、LPS+APC组和LPS+血必净组.分别于LPS刺激后12、24、48、72 h收集细胞,用流式细胞仪检测PAR-1表达的荧光强度;同时留取细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TF、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 LPS刺激组24 h后各时间点大鼠单核细胞PAR-1的荧光强度较正常对照组显著升高,各时间点上清液中TF、IL-6、TNF-α水平也明显高于正常对照组(P均<0.01).与LPS刺激组比较,LPS+APC组和LPS+血必净组PAR-1、TF、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);且LPS+血必净组24 h、48 h时PAR-1、TF、TNF-α水平均显著低于LPS+APC组(P<0.05或P<0.01).结论血必净注射液和APC均可显著降低LPS刺激大鼠单核细胞PAR-1表达,减少TF、IL-6、TNF-α分泌,血必净的作用较APC明显.
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蛋白酶激活受体在ALI/ARDS炎症反应中的作用研究进展
急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)目前仍是困扰医学界的复杂难题,其发病机制尚未完全阐明.蛋白酶激活受体(PARs)是新近发现的一种G蛋白偶联受体亚类,以其独特的激活方式通过细胞内复杂的信号转导,对ALI/ARDS的炎症过程发挥了重要的调节作用.本文简要叙述了PARs的结构、激活和灭活方式、细胞内信号转导及其效应,着重介绍了在ALI/ARDS中PARs四种亚型介导的炎症反应,以及炎性介质对PARs的调控,从而阐明PARs激活在推动肺部炎症病理过程发展中的作用.
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桃红四物汤对蛋白酶激活受体激活诱导血小板释放VEGF和Endostatin的影响
目的 考察桃红四物汤对蛋白酶激活受体( PARs)激动剂诱导人血小板聚集、释放血管内皮生长因子(VEGF)和内皮抑素(endostatin)以及释放液对内皮细胞增殖的作用.方法 人富血小板血浆和不同质量浓度的桃红四物汤(0.5～2.5mg/mL)孵育5min后,加入PAR1选择性激动剂(SFLLRN-NH2,10 μmol/L)或PAR4选择性激动剂(AYPGKF-NH2,200μmol/L)或凝血酶(1 U/mL),血小板聚集仪测定血小板聚集,ELISA测定血小板离心后上清中VEGF和endostatin,MTT测定释放液对内皮细胞增殖的作用.结果 桃红四物汤在质量浓度0.5～2.5 mg/mL剂量依赖性的抑制凝血酶和PARI-AP诱导的血小板聚集,但是对PAR4-AP诱导的血小板聚集没有显著的抑制作用；2.5 mg/mL桃红四物汤可抑制PAR1-AP诱导血小板释放VEGF以及PAR4-AP诱导endostatin释放；对PAR1-AP诱导释放液引起内皮细胞的增殖具有抑制作用,而对PAR4-AP诱导的释放液引起内皮细胞增殖减少具有促进作用.结论 桃红四物汤抑制PAR1 -AP诱导的血小板聚集,调节血小板释放VEGF和endostatin以及内皮细胞增殖可能是其发挥活血化瘀作用的机制之一.
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肥大细胞及类胰蛋白酶在肠易激综合征内脏敏感性中的作用
内脏高敏感性是肠易激综合征(IBS)目前广为接受的发病机制之一.类胰蛋白酶是蛋白酶激活受体的一种强激活剂.近年来肥大细胞及所分泌的类胰蛋白酶在IBS内脏高敏感性中的作用越来越受到重视.此文综合近期文献,从肥大细胞-类胰蛋白酶-(PAR-2)-肠伤害感受神经元超兴奋性-内脏高敏感性的发生这一角度探讨IBS患者内脏高敏感性的机制.
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蛋白酶激活受体2与表皮生长因子受体参与了人精子运动性的调控
目的:研究类胰蛋白酶诱导的精子活力下降的机制,并探讨表皮生长因子受体(EGF-R)和蛋白酶激活受体2(PAR-2)相关的信号通路是否参与此过程.方法:新鲜的精液采自健康捐精者(n=15).根据WHO标准评定精液的参数和质量.固定用上游法采得的精子,用特异抗体进行免疫组化和免疫电镜分析PAR-2和EGF-R;用两个受体的抗体通过Western blotting分析精子的蛋白抽提物;用计算机辅助的精液分析仪评定精子的运动性.结果:免疫组化结果表明PAR-2和EGF-R存在于大约30％的实验精子上.两个受体都定位于质膜上.与类胰蛋白酶相似,PAR-2合成的拮抗剂SLIGKV能降低精子的运动性,这种效果被两种特异的EGFR通路阻滞剂(AG1478和PD168393)抑制.结论:由类胰蛋白酶通过PAR-2受体调控的精子运动性的下降与EGF-R通路有关.
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脑出血24h后不同蛋白酶激活受体表达的初步筛查
目的 初步探讨脑出血后血肿周围组织的不同蛋白酶激活受体(PARs)的表达情况.方法 Wistar大鼠20只,随机分为脑出血组(采用2次注血/2次退针法建立脑出血大鼠模型,右侧尾状核注入自体血50μL)和对照组(右侧尾状核注入生理盐水50 μL).术后24 h将大鼠处死取脑,制作冰冻切片,采用免疫荧光染色(间接法)检测血肿周围组织PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4阳性细胞的表达情况.结果 ①脑出血组,出血后24h血肿周围组织PAR-1表达明显增多,与对照组比较P＜0.01.②脑出血组,出血后24 h PAR-2主要在血管内皮细胞表达,与对照组比较无明显差异.③脑出血组,出血后24 h无PAR-3、PAR-4荧光表达,与对照组比较无明显差异.结论 脑出血24h后血肿周围组织PAR-1表达增加.
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蛋白酶激活受体在鼠肥大细胞的表达
目的 检测蛋白酶激活受体(PARs)在鼠肥大细胞的表达.方法 用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription poly-merase chain reaction,RT-PCR)、流式细胞术及免疫荧光细胞染色分析方法,在mRNA水平和蛋白质水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在鼠肥大细胞P815和MC/9的表达.结果 肥大细胞P815和MC/9在mRNA水平和蛋白质水平均表达PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4.结论 肥大细胞表达PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4,为进一步研究肥大细胞PARs的功能奠定了基础.
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凝血酶与卒中
凝血酶具有血管内和血管外作用.在血管内,凝血酶具有促凝和抗凝的双重功能,可调节血栓形成与止血.近年来,随着蛋白酶激活受体的发现,凝血酶血管外作用的相关研究也不断深入,特别是对于神经系统,凝血酶具有随浓度而改变的双重作用,低浓度时有神经保护作用,高浓度时可损害血脑屏障,导致脑水肿和癫癎,甚至引起神经元和星形细胞死亡.文章主要就凝血酶血管外作用的分子机制及其与卒中的相关研究进行了综述.
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蛋白酶激活受体1和2在结肠癌细胞的表达及其作用初探
目的:探讨蛋白酶激活受体1和2(PAR1和PAR2)在结肠癌细胞株SW620和SW480细胞的表达及其作用.方法:采用免疫细胞化学染色及RT-PCR法检测SW620和SW480细胞有无PAR1和PAR2蛋白及其mRNA的表达;利用各自不同的激动剂、拮抗剂及相关抗体,观察对细胞迁移和增殖能力的影响以及对细胞分泌白细胞介素8(IL-8)的影响.结果:结肠癌细胞株SW620和SW480均有PAR1和PAR2 mRNA的表达,但仅见SW620细胞表面具有PAR2蛋白的高表达,PAR1蛋白表达不明显;SW480细胞表面既无PAR1也无PAR2蛋白的表达.SW620细胞的迁移能力明显高于SW480细胞,PAR1和PAR2的激动剂以及因子Ⅶa均可促进SW620细胞的增殖、迁移和IL-8的分泌;PAR2拮抗剂对细胞迁移起抑制作用,抗PAR2抗体对细胞的增殖和迁移均有干预作用.结论:蛋白酶激活受体2在结肠癌细胞表面大量表达,可增强细胞的增殖和迁移能力及IL-8的分泌,表明与肿瘤的转移能力及恶性程度密切相关.
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P物质对过敏小鼠腹腔巨噬细胞蛋白酶激活受体表达的影响
目的:探讨P物质(substance P,SP)对过敏小鼠腹腔灌洗液中巨噬细胞表面蛋白酶激活受体(protease activated receptots,PARs)表达的影响.方法:通过腹腔注射鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立过敏小鼠模型,再根据腹腔注射的SP的浓度将小鼠分为生理盐水组、0.2、2.0、20.0和200.μg/ml SP组,每组6只,同时每组均设有未致敏的对照组.后一次激发3 h后处死小鼠,取腹腔灌洗液细胞经固定,用流式细胞仪检测巨噬细胞表面PARs的表达.结果:过敏组小鼠腹腔灌洗液中巨噬细胞表面PARs的表达水平较正常组明显降低(P＜0.01),而不同浓度的sP组之间无统计学差异(P＞0.05).结论:SP对小鼠腹腔巨噬细胞PARs表达无影响,但过敏原可影响巨噬细胞表面PARs的表达.
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蛋白酶激活受体_1在高压氧预处理诱导大鼠脑出血后脑保护中的作用
目的探讨蛋白酶激活受体_1（PAR_1）在高压氧预处理（HBOP ）诱导的大鼠脑出血后神经保护中的作用。方法（1）SD大鼠接受连续5次HBOP或假预处理（SP），预处理结束24h后，建立基底节区脑出血模型，72h后处死，观察脑水含量，神经功能评分，TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡，免疫组化方法检测血肿周围组织PAR_1的表达。（2）SD大鼠HBOP预处理前基底节区给予PAR_1激动剂（PAR_AP）或生理盐水，接受连续5次HBOP ，预处理结束24h后，建立基底节区脑出血模型，72h后处死，观察脑水含量、神经功能评分，血肿周围神经细胞凋亡和PAR_1的表达。结果高压氧预处理减轻大鼠脑出血后72h血肿周围脑组织水肿[（81.4±0.8）％ vs （80.2±0.6）％，P＜0.01]，改善神经功能评分，减少血肿周围神经细胞凋亡，HBOP降低了血肿周围组织PAR_1的表达（ P＜0.05）。HBOP前给予PAR_AP激活PAR_1受体，消除了HBOP诱导的神经保护作用。结论高压氧预处理通过减轻脑组织水肿，减少神经细胞凋亡起到神经保护作用，下调PAR_1的表达是可能的作用机制之一。
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凝血酶和PARs激动肽诱导单核细胞分泌IL-6作用的研究
目的 白细胞介素(interleukin,IL)-6通过凝血酶及蛋白酶激活受体(proteinase activated receptor,PARs)的激动肽分别激发高度纯化后的单核细胞,分析人单核细胞分泌IL-6的诱发因素,为IL-6的临床试验提供参考.方法用凝血酶及PARs的激动肽分别激发高度纯化后的单核细胞16h后,采用ELISA法检测单核细胞培养上清液中的IL-6.结果 凝血酶呈浓度依赖性地诱导单核细胞产生IL-6,当凝血酶活性被抑制后,诱导单核细胞产生IL-6的能力被抑制.PAR-1激动肽SFLLR-NH2和PAR-4激动肽GYPGQV-NH2呈浓度依赖性地诱导单核细胞产生IL-6,PAR-1、PAR-4不能诱导单核细胞产生IL-6,而PAR-3激动肽TFRGAP-NH2和反激动肽PAGRFT-NH2对于单核细胞产生IL-6无明显作用.结论凝血酶可以诱导高度纯化的成人外周血单核细胞产生IL-6,其作用依赖于酶活性,说明它可能是通过PARs激活单核细胞.
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IL-6对肥大细胞蛋白酶激活受体表达的影响
目的 探讨IL-6对P815肥大细胞蛋白酶激活受体(PAR)表达的影响及其在过敏与炎症中的作用机制.方法 P815肥大细胞激发后,收集各时间点的细胞和上清.采用实时定量PCR和流式细胞术的方法 在mRNA和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4表达情况.结果 IL-6上调PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4 mRNA的表达;下调PAR-1、PAR-3、PAR-4蛋白的表达;IL-6抗体的应用可阻断IL-6对PARs表达的上调作用.结论 IL-6能够调节肥大细胞表面PAR的表达,并可能通过这一途径参与过敏性炎症反应.
