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Numb在肿瘤中作用机制的研究现状
Numb在不对称分裂中对细胞分裂起关键调节作用.同时Numb也是参与肿瘤信号转导途径的重要成分,其在肿瘤中的作用机制正被逐步阐明[1-3].Numb可能是继p53基因后又一与肿瘤生物学行为密切相关的优势基因.本文就Numb基因结构功能以及在肿瘤中作用机制作一综述.一、Numb的结构和功能哺乳动物中Numb主要含有4个功能结构域:磷酸酪氨酸结构域(PTB)、富含脯氨酸结构域(PRR)、天冬酰胺-脯氨酸-苯丙氨酸(NPF)基序和天冬氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸(DPF)基序.靠近Numb氨基端的PTB域能与多种蛋白相互作用,是Numb作用的关键部位.
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酪氨酸蛋白激酶在胆脂瘤形成中的作用
目的探讨表皮生长因子受体(epidermic growth factor receptor,EGFR)和磷酸化酪氨酸在后天性中耳胆脂瘤的表达情况,分析酪氨酸蛋白激酶途径在胆脂瘤上皮增殖演变过程中的作用.方法应用免疫组化SP染色方法和计算机图像分析系统,连续观察10例具有典型鼓膜松弛部穿孔的后天性中耳胆脂瘤患者的不同部位(胆脂瘤上皮、鼓膜穿孔部位邻近皮肤、耳道深部正常皮肤)中EGFR和磷酸化酪氨酸的表达情况.结果EGFR和磷酸化酪氨酸在耳道深部正常皮肤、鼓膜穿孔部位邻近皮肤和胆脂瘤上皮中呈一致性连续阶梯状上升,它们在胆脂瘤上皮各层细胞均存在阳性表达,以基底层和棘层为著;穿孔部位邻近皮肤则在基底层和棘层细胞阳性表达;耳道深部正常皮肤仅基底层阳性表达.两者之间存在正相关,总相关系数为0.989(P＜0.01).结论酪氨酸蛋白激酶途径在胆脂瘤上皮增殖演变过程中起重要作用.
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不同类型胶质瘤PTEN、磷酸酪氨酸蛋白表达差异及其临床意义
目的 探讨PTEN蛋白及其作用底物磷酸酪氨酸在不同胶质瘤中的表达差异和临床意义.方法 对69例胶质瘤(髓母细胞瘤34例,间变型或胶质母细胞瘤10例,室管膜瘤10例,纤维型或毛细胞型低级别星形细胞瘤15例)进行PTEN和磷酸酪氨酸免疫组化染色,评价不同类型胶质瘤PTEN阳性表达率,半定量测定其平均染色强度.结果 髓母细胞瘤、间变型或胶质母细胞瘤、室管膜瘤和低级别星形细胞瘤的PTEN阳性表达率分别为 23.5%、20.0%、30.0%和80.0%;PTEN染色强度均值分别为0.59±0.43、0.47±0.32、0.39±0.32和1.17±0.52;磷酸酪氨酸的阳性表达率分别为91.2%、80.0%、90.0%和73.3%; 磷酸酪氨酸染色强度的均值为1.92±0.79、1.41±0.44、1.72±0.69和1.16±0.48.髓母细胞瘤、间变型或胶质母细胞瘤和低级别星形细胞瘤在PTEN阳性表达率和染色强度上存在明显差异(P＜0.01),所有胶质瘤的PTEN和磷酸酪氨酸染色强度呈负相关.结论 PTEN表达缺失与肿瘤的生物学行为密切相关,系肿瘤恶性转化和肿瘤增殖活性增加的主要原因;PTEN与磷酸酪氨酸的表达呈负相关,说明PTEN具有蛋白酪氨酸磷酸酯酶活性,并起抑制肿瘤效应.
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子宫内膜癌组织中酪氨酸蛋白激酶的活性研究
目的:通过比较子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中蛋白酪氨酸磷酸化水平的差异,以探讨子宫内膜癌发生过程中酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性改变的意义.方法:应用免疫组化S-P法测定40例子宫内膜癌、17例子宫内膜非典型增生、28例正常子宫内膜组织中磷酸酪氨酸蛋白(P-Tyr)的表达,从而反映3组中TPK活性水平.结果:在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中P-Tyr阳性表达率分别为75.00%47.06%、14.29%,3组间差异有显著性(P＜0.05)且TPK活性存在显著差异:即子宫内膜癌组高于非典型增生组和正常子宫内膜组.子宫内膜癌组织中,中、低分化组P-Tyr表达明显高于高分化组,差异有显著性(P＜0.05).结论:TPK活性异常是引起子宫内膜异常增生的原因,且与子宫内膜癌病理分化程度相关,而与临床分期、浸润程度及淋巴结转移无关.
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大鼠侧脑室脑室下层的免疫组织化学研究
目的 探讨正常成年大鼠侧脑室脑室下层细胞定位关系。方法 用免疫组织化学ABC法。结果 侧脑室前部外侧壁的脑室下层细胞表现为多唾液酸神经细胞粘附分子和磷酸酪氨酸阳性，并且二者在脑室下层的分布是一致的；而小白蛋白则在脑室下层表现为阴性。结论 脑室下层存在可增殖的神经元前体细胞，磷酸酪氨酸阳性与神经元前体细胞的增殖有关
关键词： 脑室下层 多唾液酸神经细胞粘附分子 磷酸酪氨酸 -
含c-Src同源序列SH2酪氨酸磷酸酶在尖锐湿疣组织中的表达
目的探讨与含c-Src同源序列SH2的酪氨酸磷酸酶(SHP-2)在尖锐湿疣组织中的表达及意义.方法采用免疫组化染色法检测了30例尖锐湿疣、13例宫颈癌和¨例正常包皮组织中SHP-2的表达.结果包皮组织中磷酸酪氨酸和SHP-2阳性着色主要定位在表皮基底层角质形成细胞胞核,阳性表达细胞数量较少:而尖锐湿疣则相反,主要位于呈疣状增生浅层的凹空细胞胞浆内,阳性细胞成片分布;宫颈鳞状细胞癌的胞浆呈阳性表达,弥漫性分布,胞核呈阴性表达.尖锐湿疣和宫颈鳞状细胞癌中磷酸酪氨酸和SHP-2的阳性表达率分别为96.67%(29/30)和100%(13/13),而11例正常包皮均呈胞浆阴性表达.结论尖锐湿疣和宫颈癌细胞均存在与磷酸酪氨酸和SHP-2相关的细胞信息通路的异常激活.磷酸酪氨酸和SHP-2分布部位和阳性强度的改变可能与其癌变过程有关.
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高渗刺激促进大鼠视上核酪氨酸蛋白的磷酸化
目的 研究高渗刺激对大鼠视上核酪氨酸蛋白磷酸化的影响.方法 成年SD大鼠随机分为高渗组和对照组(每组n=5),分别腹腔注射高渗盐水、生理盐水,2 h后用4%多聚甲醛灌注固定,取脑作30 μm冰冻切片,进行磷酸酪氨酸和c-Fos蛋白的免疫组织化学染色.结果 高渗组大鼠视上核神经元磷酸酪氨酸蛋白表达高于对照组(P＜0.01).结论 高渗盐水刺激促进视上核神经元酪氨酸蛋白的磷酸化.
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成年大鼠嘴侧迁移流内的磷酸酪氨酸阳性细胞
目的研究大鼠嘴侧迁移流中的磷酸酪氨酸阳性细胞.方法采用免疫组织化学ABC法.结果嘴侧迁移流中存在磷酸酪氨酸阳性细胞,其分布和神经元前体细胞表达的多唾液酸神经细胞粘附分子阳性部位一致.结论嘴侧迁移流中的磷酸酪氨酸阳性表达和神经元前体细胞的增生有关.
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红细胞胞质蛋白酪氨酸磷酸酶活性的测定及初步应用
近研究表明胰岛素刺激组织摄取利用葡萄糖是通过胰岛素受体、胰岛素受体底物1、磷脂酰肌醇3激酶和葡萄糖转运蛋白等一系列信号转导过程完成的,蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)通过对磷酸酪氨酸的去磷酸化,调节胰岛素受体活性,从而影响胰岛素信号转导[1,2].我们利用宝灵曼公司的检测盒,设计了红细胞胞质PTP活性的测定方法,并初步应用于临床,现将结果报道如下.
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CRKL基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建CBKL基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法 将筛选确定的CRKL基因RNAi有效靶序列克隆到pGCL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shCRKL慢病毒载体.通过酶切、测序验证后,用LV-shCRKL、pHelper 1.0和pHelper2.0质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果 载体片段插入正确.共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒LV-shCRKL.结论 成功构建了人CRKL基因RNAi病毒载体.
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增生性瘢痕与正常皮肤内的磷酸化酪氨酸蛋白及表皮生长因子受体的变化及意义
我们利用磷酸酪氨酸及表皮生长因子受体(EGFR)的免疫组织化学染色,对增生性瘢痕和正常皮肤进行形态学观察,以探讨瘢痕形成的病理机制.
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流式细胞术检测Bcr-Abl阳性细胞的磷酸酪氨酸水平
目的:探讨流式细胞术检测Bcr-Abl阳性细胞的磷酸酪氨酸蛋白水平的应用.方法:采用直接免疫荧光标记方法,应用P-Tyr-100抗体标记胞浆抗原,流式细胞术检测Bcr-Abl阳性细胞系(K562细胞)和Bcr-Abl阴性细胞系(HL60细胞)磷酸酪氨酸水平,并以同样的方法分析20例正常人外周血粒细胞和32例慢性粒细胞白血病(CML)患者中性粒细胞的磷酸酪氨酸水平,以细胞的平均荧光强度(MFI)表示其磷酸酪氨酸水平.结果:HL60细胞和K562细胞的MFI分别为170.89±23.42和 838.25±56.59,20例正常人、CML慢性期患者和CML加速/急变期患者的MFI分别为250.39±115.78、1 549.66±453.55和1 879.29±533.19,CML患者的MFI明显高于正常人(P＜0.01),CML加速/急变期患者的MFI明显高于CML慢性期的患者(P＜0.05).结论:流式细胞术是一种理想的检测Bcr-Abl阳性细胞的磷酸酪氨酸水平的方法,且快速、敏感,有望用于CML的快速诊断.
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CD95酪氨酸磷酸化与细胞凋亡的分子关系
CD95即Fas,是TNF受体超家族成员之一.CD95(Fas)与其配体CD95L(FasL)结合后,CD95(Fas)通过其Fas相关的死亡结构域蛋白(FADD)中的死亡效应子结构域(DED)可介导caspase-8寡聚化,自身被活化并激活下游效应半胱天冬酶(caspases),介导细胞凋亡.磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)途径是参与细胞增殖调控和细胞生长的重要信号通路之一.近的研究表明,在恶性胶质瘤细胞中,CD95刺激能引起PI3K导致AKT明显的磷酸化.同时一序列的新的数据显示Src家族激酶(SFKs)、PI3K和caspase-8之间存在联系.现就CD95(Fas)磷酸化后参与细胞凋亡与caspase-8、PI3K/AKT信号通路之间存在分子关系作一综述.
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人乳头瘤病毒和磷酸酪氨酸,SHP-2在尖锐湿疣组织重构中的表达研究
目的探讨HPV 6/11,16/18,31/33型和酪氨酸磷酸酶-2(SHP-2)在尖锐湿疣(CA)组织重构中的表达及意义.方法采用原位杂交和免疫组化SP法检测36例CA组织中HPV 6/11,16/18,31/33型和磷酸酪氨酸、SHP-2的水平及分布,并以正常人皮肤(包皮)10例、宫颈鳞癌13例作为对照.结果CA和宫颈鳞癌组HPV 6/11,16/18,31/33型的阳性率分别为80.5%,38.9%,36.1%和69.2%,38.4%,53.8%.CA、宫颈鳞癌与正常包皮组比较均P＜0.05.CA和宫颈鳞癌组磷酸酪氨酸和SHP-2在胞浆和胞核中的阳性率分别为97.2%,22.2%和100%,0.正常包皮组SHP-2在胞浆和胞核中的阳性率为0和80.00%,CA和宫颈鳞癌组在胞浆和胞核中的阳性率比较P＜0.05.结论尖锐湿疣和宫颈鳞癌组细胞磷酸酪氨酸和SHP-2的表达较正常皮肤组显著增强,提示CA组织重构中存在细胞信息通路的异常激活与HPV感染有关.
