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结核疫苗研究的历史与现状
由于结核病缺乏有效的疫苗保护,发病率持续增高,成为人类传染病中继艾滋病之后的第二大杀手.减毒牛型结核分枝杆菌--卡介苗是目前许多国家批准应用于人体的惟一结核病疫苗[1-2].然而,卡介苗对成人肺结核的保护效率很低,研制新型结核病疫苗迫在眉睫.多种类型的新型疫苗,包括重组卡介苗疫苗、营养缺陷型结核分枝杆菌疫苗、蛋白质多肽疫苗、DNA疫苗、以病毒为载体的结核分枝杆菌亚单位疫苗等被广泛研究.至2005年,已有120种以上的疫苗进行了动物实验研究,至少有5个疫苗已进入Ⅰ期临床试验[3].
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奶牛结核病的检测及防治措施
奶牛结核病是由牛型结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病.世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病,我国将其列为二类动物疫病[1].本病无季节流行性,一年四季均可发生.近年来,各地盲目大量引进奶牛,致使奶牛结核病严重反弹,直接威胁人民的身体健康和影响畜牧业的持续性发展.加强奶牛结核病的检测及防治工作迫在眉睫.
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牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白.方法 以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21 (DE3)中,IPTG 诱导表达.表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白.结果 获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确;表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%;纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应.结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测.
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猪源性牛型结核分枝杆菌分离与鉴定
目的 2003年底和2004年初来自湖北、湖南、江西、广东等省的供港猪在屠宰时发现一定比例的猪有器官肉芽肿性病变.我们在湖北的J猪汤、M猪场接种牛型结核菌(10,000IU/头)和禽型结核菌素(2,500IU),均发现牛型结核菌素阳性猪.J猪场共接种1,692头猪,其阳性分布为:种猪阳性率为37%(7/19)、育肥猪阳性率为13%(118/941)、中小猪阳性率为3%(18/634)、保育舍仔猪阳率为1%(1/98):M猪场接种8头育肥猪有4头阳性.从J猪场选取94头育肥猪(61头PPD阳性、33头PPD阴性)跟踪到屠宰场观察器官病变,61头阳性猪全部有器官肉芽肿性病变,33头阴性猪2头有器官肉芽肿性病变.取典型病科研磨、2%NaOH处理30min,在改良酸性罗氏培养基上37℃培养28天长出淡黄色、表面干燥、似菜花样、呈颗粒状堆集的菌落.该分离菌在PNB、TCH鉴别培养基上不生长,对链霉素、利福平敏感,对青霉素不敏感,触酶、硝酸盐还原阴性,尿素酶阳性,接种大白兔可分离到抗酸菌.由以上可判定从猪中分离到牛型结核菌.
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复方利福平(二、三联)的药效学试验
卫肺宁、卫肺特对标准人型结核分枝杆菌H37Rv,牛型结核分枝杆菌和人工诱导耐RFP、SM的H37Rv菌株、草分枝杆菌及临床分离的15株结核分枝杆菌(共20株结核分枝杆菌)的体外抗菌作用结果表明,卫肺宁、卫肺特在罗氏培养基中对H37Rv的MIC分别为0.39和0.1mg/L;对牛型结核分枝杆菌的MIC均为3.