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HFRS患者BLCL的建立及HTNV S基因片段在其内获得长期稳定的表达
虽然对汉坦病毒核蛋白(HV NP)氨基端蛋白的原核表达产物的抗原性及免疫原性已进行了许多研究,并已用于出血热的诊断,但该抗原表位的精确一级结构及其基因定位迄今尚未完全明确.而研究T细胞表位的前提是首先要构造含病原体抗原基因片段的表达载体质粒.要实现CTL效应细胞对靶细胞的有效杀伤,前提条件之一是效靶细胞必须具有相同的HLA型别.通常选用与效应细胞同源即同一供者的PBMC建立靶细胞,本研究采用与HV特异性CTL同源的患者自身的EB病毒转化的B淋巴母细胞系(EBV-transformed B lymphoblastoid cell line,BLCL)建立靶细胞系,将含有不同汉滩病毒(HTNV)S基因片段的重组真核表达载体转染入BLCL,获得长期稳定表达,为下一步进行CTL杀伤试验提供靶细胞系.
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乙型肝炎患者组织相容性白细胞抗原-Ⅱ类基因多态性与肿瘤坏死因子活性的对比
目的探讨乙型肝炎患者组织相容性细胞抗原(HLA)-Ⅱ类基因多态性与肿瘤坏死因子(TNF)活性之间的关系.方法利用EB病毒(EBV)体外感染乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC),将其转化为淋巴母细胞系(LCL);应用结晶紫染色法检测LCL分泌TNF的细胞毒活性.结果HLA-DRB1*0301、HLA-DQA1*0501、HLA-DQB1*030阳性组LCL分泌TNF的活性明显低于阴性组(t1=2.944,t2=3.397,t3=3.316,P＜0.01),HLA-DRB1*1101/1102、HLA-DQA1*0301阳性组LCL分泌TNF的活性明显高于阴性组(t1=4.234,t2=4.873,P＜0.01).结论HLA-Ⅱ类基因可通过影响TNF来发挥免疫调节作用,与HBV感染慢性化或HBV清除有关.
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应用微量冻存法建立EB病毒转化脐带血淋巴母细胞系
目的 应用微量冻存法建立EB病毒(EBV)转化脐带血淋巴母细胞系(LCLs),为永久保存具遗传疾病的脐带血资源提供研究基础.方法 知情同意下收集妊娠中期至晚期终止妊娠的20例孕妇脐带血样本,采用微量冻存法,通过EBV转化获得脐带血LCLs,冻存复苏后,染色体G显带分析,检测建系前后的核型稳定性.结果 20例样本中19例成功进行微量冻存法转化,成功率95%,转化成功的脐带血LCLs冻存后复苏成功率达100%.除1例因胎儿为水肿胎失败外,19例脐带血样本均可在10 d左右观察到淋巴细胞增大呈母细胞化,增殖的淋巴母细胞凝聚成团,6~8周后可获得稳定生长的脐带血LCLs,转化前后的淋巴细胞染色体核型无明显差异.结论 应用微量冻存法可成功建立脐带血LCLs,EB病毒转化的脐带血LCLs细胞遗传学特性稳定,可用于进一步的遗传学研究.
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带状疱疹患者淋巴母细胞在传代培养过程中染色体的稳定性分析?
目的：评价 EB病毒转化的淋巴母细胞在传代培养过程中染色体的稳定性。方法采用 EB病毒感染带状疱疹患者外周血中的 B 淋巴细胞,形成的淋巴母细胞(LCL)经过6个月的传代培养,通过核型分析比较淋巴母细胞染色体在培养前后是否存在差异。结果4株染色体正常的 LCL 培养6个月后染色体无明显差异,1株染色体异常的 LCL 在传代培养过程中退化死亡,1株 LCL 培养6个月后染色体出现了亚二倍体和超二倍体。结论核型正常的 LCL 在传代培养过程中染色体具有较高的稳定性,选择核型正常的 LCL 有助于建立稳定的细胞系。
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EBV转化带状疱疹患者外周血B淋巴母细胞系的建立
目的 体外建立带状疱疹患者永生化的淋巴母细胞系(LCL).方法 用EB病毒感染带状疱疹患者外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CpG 2006免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A抑制T淋巴细胞的活性.利用流式细胞术分析LCL膜表面分子CD抗原,利用PCR技术检测淋巴母细胞中EBNA1基因.结果 20例患者PBMC经EBV感染制备淋巴母细胞,13例转化成永生化B细胞来源的LCL,成功率为65％.转化后的LCL膜表面表达CD19和CD45,并存在EB病毒基因EBNA-1基因序列.结论 利用EBV感染带状疱疹患者B淋巴细胞形成的LCL保持了成熟B淋巴细胞的生物学特性,为体外研究水痘-带状疱疹病毒(VZV)感染特异性细胞免疫和人源单克隆抗体制备打下基础.
