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水痘-带状疱疹病毒感染实验检测方法的研究进展
对临床表现不典型的可疑水痘-带状疱疹病毒(VZV)感染,需依靠实验室榆查才能确诊.因此,建立敏感、特异、快速和简便的VZV实验检测方法,对VZV感染者的早期诊断和预后具有重要意义.VZV的实验检测方法包括Tzanck涂片、电镜和免疫电镜、病毒分离、免疫学、分子生物学等方法,各方法均有其优点和不足.
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水痘-带状疱疹病毒减毒机制的研究进展
水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)属人类疱疹病毒α亚科,亦称人类疱疹病毒3型(human herpesvirus 3,HHV-3),是水痘和带状疱疹的病原体.VZV经呼吸道粘膜进入人体后形成原发感染,临床表现为水痘.水痘好发于儿童,传染性强,患儿常有皮肤水疱和发热症状,可伴肺炎、脑膜脑炎等严重并发症.水痘痊愈后,病毒潜伏于脊髓后根神经节.当机体抵抗力降低时,潜伏在体内的病毒被激活、复制,并沿外周神经扩散,临床表现为神经支配区的带状疱疹,患者疼痛明显,老年患者还可伴带状疱疹后遗神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)等并发症,严重影响患者生活质量[1].接种水痘或带状疱疹减毒活疫苗是预防儿童水痘、老年带状疱疹和PHN的重要措施之一[2].
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山东省济南市历城区健康人群水痘-带状疱疹病毒抗体水平调查
目的 了解山东省济南市历城区健康人群水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗体水平,掌握水痘易感人群,为今后水痘预防控制提供参考依据.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中VZV-IgG抗体.结果 共调查547人,年龄小17月龄,大的85岁,平均年龄(22.94±20.20)岁,VZV-IgG抗体阳性率为64.53％(353/547).1～、4～、7～、10～、15～、20～、30～、40～、50岁及以上各年龄组抗体阳性率分别为26.74％、29.69％、59.78％、50.00％、73.68％、71.11％、95.16％、91.18％和97.18％,不同年龄组之间抗体阳性率差异有统计学意义(x2=173.33,P＜0.05),有随着年龄增加而升高的趋势.14岁及以下儿童水痘疫苗接种率为43.62％.2006-2013年,济南市历城区14岁及以下人群水痘年平均报告发病率较高,为322.82/10万,以后随着年龄增加而降低,与VZV-IgG抗体水平调查结果相符.水痘病例中,70.27％为14岁及以下人群,27.50％为15～29岁人群.结论 14岁及以下儿童为济南市历城区水痘的易感人群,今后应提高该人群水痘疫苗的接种率,以形成有效的免疫屏障,达到预防水痘的目的.同时,15岁及以上人群水痘发病有增加趋势,应引起重视.
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水痘-带状疱疹病毒基因特征分析
目的 对引起上海市某小学水痘暴发的水痘-带状疱疹病毒进行基因特征分析.方法 对采集到的患者疱疹液用MRC-5细胞进行病毒分离,用水痘-带状疱疹病毒标准血清鉴定病毒分离株,并通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和序列测定对分离到的病毒进行基因特征分析.结果从采集的5份疱疹液标本中均分离到导致细胞病变的病毒,经水痘-带状疱疹病毒标准血清中和鉴定,证实为水痘-带状疱疹病毒;对分离病毒的ORF22、38、54、62、68等不同区段进行PCR-RFLP或序列测定结果显示:所有分离到的水痘-带状疱疹病毒均为J基因型野毒株(Bgl I阳性,Pst I阳性,Sma I阳性);糖蛋白E中383抗原决定簇的第150位氨基酸未发现类似北美VZV-MSP株或VZV-BC株的碱基突变.结论 此次水痘暴发是由J基因型水痘-带状疱疹病毒野病毒引起.有41.1%的患者曾经接种过水痘疫苗,初免失败或者抗体水平下降可能是造成水痘突破的原因.因此有必要对病毒基因特征及水痘疫苗免疫策略进行进一步的研究.
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应用膜抗原荧光抗体试验检测人群水痘-带状疱疹病毒血清抗体阳性率
目的 应用膜抗原荧光抗体试验(FAMA)方法调查广州地区正常人群水痘-带状疱疹病毒(VZV)的流行现状.方法 采用以VZV感染细胞作为抗原、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG作为二抗的FAMA试验,对随机抽取的592份正常人血清标本进行特异性VZV抗体检测.结果 FAMA试验检测VZV抗体与其他的疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应.应用此法检测592份血清标本中,VZV抗体总体阳性率为76.52%;1～、4～、7～、14～、20～、30～、40～及≥50岁年龄组血清抗体阳性率分别是14.67%、51.56%、73.91%、91.26%、92.78%、95.65%、98.11%和100%.1～3岁年龄组血清抗体阳性率低,血清抗体阳性率随年龄的增大而升高;不同性别间阳性率差异无统计学意义(P0.005),不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(P<0.001).结论 采用FAMA法检测人群中VZV抗体与其他疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应,是VZV抗体检测的可靠方法 .应以1～3岁儿童为VZV疫苗免疫的首选对象.
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水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因特征分析
目的 运用分子生物学方法对水痘或带状疱疹患者皮肤水疱液及水痘疫苗中分离得到的水痘-带状疱疹病毒(VZV)株进行基因特征分析.方法 从水痘疫苗、水痘或带状疱疹患者的皮肤水疱液中分离VZV,然后利用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性对病毒株的ORFs6、38、62进行分析,同时测序分析ORFs 1、31、51和62中的单个核苷酸多态性位点.结果 4种疫苗酶切结果均为Alu Ⅰ~-Pst Ⅰ~-Sma Ⅰ~+ BssHⅡ~+ Nae Ⅰ~+,49株VZV临床分离株中Alu Ⅰ~+ Pst Ⅰ~+Sma Ⅰ~-BssHⅡ~-Nae Ⅰ~-占96%(47株),Alu Ⅰ~-Pst Ⅰ~-Sma Ⅰ~+ BssHⅡ~+占2%(1株),Alu Ⅰ~+ Pst Ⅰ~-Sma Ⅰ~-BssHⅡ NaeⅠ占2%(1株),其中1例患者的临床分离病毒株与疫苗一致;测序分析显示不同疫苗核苷酸序列之间存在差异,分离得到的疫苗株病毒序列与Varilrix一致.结论 存在疫苗引起水痘的情况,测定ORFs 6、62中的限制性片段长度多态性能够区分疫苗株和野毒株,对ORFs 1、31、51和62中的单个核苷酸多态性位点进行分析可追踪疫苗致病的病毒株来源.
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中国六省份水痘-带状疱疹病毒糖蛋白M、L基因特征分析
目的 分析水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白(g)M、L的基因特征.方法 依据国家科技重大专项中发热伴出疹症候群病毒性病原监测项目,以2007—2015年北京(1例)、上海(5例)、吉林(2例)、青海(1例)、广东(2例)、四川(1例)监测到的12例VZV疑似患者为研究对象,收集其疱疹液或咽拭子标本共12份.通过琼脂糖凝胶电泳鉴定标本VZV阳性情况,采用PCR扩增VZV阳性标本以及国产水痘减毒活疫苗v-Oka-BK和进口水痘减毒活疫苗Varilrix-1的gM、gL基因序列片段,进行核苷酸序列测定和分析.采用BioEdit、MEGA 5.0软件,比对VZV阳性标本与疫苗株(v-Oka-BK、varilrix-1)以及GenBank的国外野毒株(41株)、亲本株(p-Oka)、疫苗株(v-Oka、varilrix、varivax)的核苷酸序列.结果12份标本均为VZV阳性.与疫苗株和亲本株相比,1份阳性标本gM基因在86686位点发生碱基突变,并导致氨基酸突变,5份阳性标本在87844位点发生碱基突变,有30株国外野毒株在87844位点上也存在相同变异;1份阳性标本gL基因在101245位点发生碱基突变,并导致氨基酸突变,6份阳性标本在101624、101625、101625位点上均发生了碱基缺失,国外野毒株在这3个位点均发生相同变异.与疫苗株相比,12份VZV阳性标本gM的核苷酸、氨基酸同源性分别为99.2%~100%和98.2%~100%,gL的分别为99.3%~100%和98.6%~100%;与41株国外野毒株相比,gM的核苷酸、氨基酸同源性分别为99.3%~100%和98.5%~100%,gL的分别为99.1%~100%和98.6%~100%.基因亲缘性关系树分析显示,基于gM有7份VZV阳性标本与疫苗株及亲本株在同一分支上;基于gL,有12份VZV阳性标本均与疫苗株及亲本株在同一分支.结论12份VZV阳性标本gM、gL基因序列高度保守,抗原性稳定,存在减毒位点可能.
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热敏灸联合刺血罐治疗孕妇感染水痘-带状疱疹病毒32例
带状疱疹是由水痘一带状疱疹病毒感染引起的、以簇集性皮疹和剧烈的神经痛为主要特征的急性病毒性皮肤病,孕妇感染时治疗极为困难.热敏灸联合刺血罐治疗孕妇感染水痘-带状疱疹病毒效果令人满意.
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我国不同基因型水痘-带状疱疹病毒流行毒株gE基因序列分析
为进一步了解我国不同地区流行的水痘—带状疱疹病毒(VZV)病毒株的基因型分布和分析代表性病毒株gE基因序列.于2010年12月至2011年6月期间,收集来自北京市、长春市、拉萨市和乌鲁木齐市4个地区水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂片,共计18份.用单个核苷酸多态性(SNP)谱的方法确定病毒株的基因型.然后采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增gE基因的全长片段,并进行测序分析.SNP分析显示18个病毒株的基因型共为4种,其中有7株属于clade2遗传支,1株属于clade3遗传支,4株为clade5遗传支.另有6株病毒兼有不同遗传支的特征,按照目前国际通用的分型方法不能归属于任何明确的遗传支.对不同病毒株gE基因序列分析,除了发现3个国外已有报道的1个同义突变(T660C)和2个反义突变(C119T、C1606A),还发现了3个新的反义突变(C56T、C1109T和C917A)和4个同义突变(C54T、T1075C、T816C和G279A).首次在我国新疆自治区发现了clade5遗传支的VZV,在长春市还发现了目前尚未能分型的6株病毒.对部分病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的编码区内中检出1个新型反义突变(C917A),需要进一步研究该突变对该病毒免疫原性和致病性的影响.
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水痘-带状疱疹病毒的基因分型与分子进化
水痘-带状疱疹病毒( Varicella-zoster virus,VZV)又称人类疱疹病毒3型,属疱疹病毒科,与单纯疱疹病毒HSV-1、HSV-2一起归入α亚科.人类是其唯一的自然宿主,对其普遍易感.VZV引起的原发感染表现为水痘,并在宿主的感觉神经节内潜伏,再激活时可引起带状疱疹.近年来VZV分子流行病学的研究涉及流行病学、病毒学、生物信息学等相关领域,通过监测、研究VZV的基因变异,区分疫苗株或野生株引起的感染,探讨世界范围内各VZV病毒株的系统发育关系和各遗传支之间的分子进化史.现将近年来有关VZV不同的地理分布和遗传支进化的研究状况综述如下.
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中国六省水痘-带状疱疹病毒糖蛋白基因特征分析
为研究中国水痘-带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus,VZV) gH(Glycoprotein H)、gK (Glycoprotein K)、gI(Glycoprotein I)糖蛋白基因特征,选取2007～2015年在中国六省收集的VZV疑似患者的疱疹液或咽拭子标本,经聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法进行阳性鉴定及3个糖蛋白的全基因片段扩增,所得序列与GenBank中已公布的疫苗株及野毒株序列进行比对分析.结果筛选出12份阳性VZV标本,gH、gK、gI与水痘疫苗株核苷酸和氨基酸同源性相比分别为99.8％～100％、99.8％～100％,99.8％～100％、99.6％～100％,99.9％～100％、99.7％～100％;与疫苗株相比在gH、gK、gI糖蛋白基因位点上12份阳性标本分别至少有一个核苷酸差异;与GeneBank中已报告的野毒株相比核苷酸和氨基酸同源性分别为99.6％～100％、99.3％～100％,99.7％～100％、99.3％～100％,99.7％～100％、99.7％～100％.本研究通过分析中国六省VZV糖蛋白gH、gK、gI的基因特征,发现这三个糖蛋白高度保守,抗原性稳定,为了解中国水痘带状疱疹病毒野毒株糖蛋白本底资料,丰富基因数据,从分子水平上为疫苗效果的评估、基因组学的研究提供基础数据.但中国地域辽阔,人口众多,还需每年连续监测并进一步扩大VZV病毒监测的地域.
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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白N的单克隆抗体制备及初步研究
水痘-带状疱疹病毒(VZV)是水痘和带状疱疹的共同致病原,其糖蛋白N(gN)在子代病毒的组装、成熟和出胞过程中发挥重要作用.但是目前关于VZV gN的研究还很少,其蛋白性质和具体分子功能仍不清楚.本研究目的是制备抗VZV gN的单克隆抗体,对该蛋白在VZV感染细胞和人皮肤组织内的表达和分布情况进行初步探究.本研究选择抗原性和亲水性较强的gN区段基因,构建rGST-gN融合蛋白的原核表达质粒,将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌后用IPTG诱导融合蛋白表达,经亲和层析柱纯化rGST-gN融合蛋白后使用PSP酶切除GST标签,将获得的重组蛋白rgN免疫BALB/c小鼠,使用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;共获得24株稳定分泌抗VZVgN单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株性能优的12E10进行单克隆抗体生产纯化和抗体鉴定;单克隆抗体12E10为IgG2a亚型,其ELISA效价达到1:10 000;通过Western blot、免疫荧光及免疫组织化学染色方法鉴定,该抗体能够特异性识别细胞和组织中表达的VZV gN;本研究应用该抗体首次确定了gN在VZV感染细胞中的反式高尔基体定位,并且确定了gN在VZV感染人皮肤组织中的表达.以上工作为今后深入研究VZV gN功能奠定了基础.
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宁波市2010年9起水痘爆发疫情分析及水痘病原学研究
目的 了解宁波市2010年9起水痘爆发疫情的流行病学和病原学特征.方法 根据宁波市2010年全国突发公共卫生事件报告管理系统和疾病监测点进行实时流行病学调查,收集数据并统计分析.同时对部分临床诊断水痘病例采集疱疹液标本,采用人胚肺成纤维细胞(Human fetal lung fibroblast cells,MRC-5细胞)进行水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster Virus,VZV)分离,并提取脱氧核糖核酸进行聚合酶链反应,对扩增产物测序,分析其基因型别.结果 宁波市2010年共发生9起水痘爆发疫情,罹患146例,平均罹患率1.79％(以校为单位).以2010年11、12月报告的突发公共卫生事件起数多,有9个县(市、区)报告了爆发疫情,发病年龄以7～12岁小学生为主.146例水痘中,有水痘减毒活疫苗(Varicella Attenuated Live Vaccine,VarV)接种史的63例,占病例总数的43.15％.15例患者VZV分离阳性,其中13例VZV为J型,2例为M1型.结论 宁波市2010年水痘爆发疫情主要发生在冬春季节,在学校集体单位,J型VZV为宁波市目前流行的主要毒株,但也有M1型VZV的局部爆发.应加强中小学及托幼机构人群的VarV接种,预防控制水痘疫情.
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一起水痘爆发的病毒分离鉴定及血清学分析
目的 对上海市闸北区2007年一起水痘爆发进行病原学鉴定和血清学分析.方法 对采集的双份血清用酶联免疫吸附试验进行水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster Virus,VZV)IgM和IgG抗体检测,采用疫苗生产用的VZV敏感细胞——人胚肺成纤维细胞(MRC-5),对采集的疱疹液进行病毒分离以及标准血清中和鉴定,并通过特异性的引物对病毒分离株进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增.结果 采集到的5例病人的双份血清中,急性期血清IgM阳性2份,IgG阳性1份,灰区2份;恢复期血清IgG均为阳性,其中4份标本IgG抗体滴度≥4倍升高.从采集的5份疱疹液标本中均分离到致细胞病变的病毒,经VZV标准血清中和鉴定,证实为VZV.PCR扩增产物电泳结果 显示,在目的 条带处均有单一的特异性条带.结论 该次爆发是由VZV引起的,水痘减毒活疫苗(Varicella Virus Attenuated Live Vaccine,VarV)的作用已被证实,但该次水痘爆发中,47.4%的患者在出生后3年内曾接种过国产或者进口VarV,应深入研究VarV的免疫策略.
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上海市闵行区29起水痘爆发疫情分析及水痘-带状疱疹病毒流行株基因分型研究
目的 了解上海市闵行区29起水痘爆发疫情的流行病学特征,以及水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster Virus,VZV)流行株的基因型别.方法 根据法定传染病报告系统和疾病监测点进行实时流行病学调查,收集数据并统计分析;同时对部分临床诊断水痘病例采集疱疹液标本,采用非洲绿猴肾细胞(Vero Cell)和Vero-E6细胞进行VZV分离,从致细胞病变的培养上清液提取脱氧核糖核酸进行聚合酶链反应,并对扩增产物测序,分析其基因型别.结果 2007年11月～2008年4月,上海市闵行区共发生29起水痘爆发疫情,罹患271例,平均罹患率0.42%;有水痘减毒活疫苗(Varicella Attenuated Live Vaccine,VarV)接种史患者37例,占病例总数的13.65%.以2007年11、12月病例数多,有明显的地区聚集趋势,人口流动大的地区罹患率高.2例患者VZV分离阳性,均为J基因型.结论 上海市闵行区冬春季水痘疫情严峻,VZV基因型别与VarV Oka株一致.应加强中、小学及托幼机构易感人群的VarV接种,预防控制水痘疫情.
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人群中水痘-带状疱疹病毒流行率及其疫苗免疫效果
为了解健康人群水痘-带状疱疹病毒(VZV)流行情况及国产Oka株水痘减毒活疫苗(水痘疫苗)的免疫效果,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)监测了384名0～50岁健康人群VZV的血清流行病学情况,同时对国产水痘疫苗在2～6岁无水痘感染史及疫苗接种史的健康儿童中进行了免疫原性和人体反应性观察.结果显示:人群中血清抗VZV-IgG阳性率平均为64.32%,年龄别流行率在0～2岁、3～6岁、7～12岁、13～19岁和40～50岁组分别为13.24%、29.58%、75.71%、88.57%和100.00%.说明血清年龄别流行率以0～2岁组低,以后随年龄增长而很快上升.国产水痘疫苗接种后全身和局部反应轻微,血清抗体阳转率为94.1%,几何平均滴度为1:8.400.证明了该疫苗有良好的有效性和安全性,可用作水痘-带状疱疹病毒自动免疫预防.
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贵州省4个县2013-2014年发热出疹性疾病病原谱的研究
目的 分析贵州省2013年8月-2014年7月发热出疹性疾病(Rash and fever illness,RFI)病原谱的构成特征.方法 收集贵州省4个项目县363例RFI病例病原标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、聚合酶链反应(PCR)及细菌/病毒分离鉴定等方法检测麻疹病毒(MV)、风疹病毒(RV)、肠道病毒(EV)、EB病毒、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、人类小DNA病毒B19、人疱疹病毒6型(HHV-6)、伤寒/副伤寒杆菌.结果 RFI监测病例的病原标本阳性率为20.94％ (76/363).阳性株主要为EV(80.26％)、VZV(11.84％)、MV(5.26％).在61株EV中,EV71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)、其他EV分别占21.31％、21.31％和55.74％.VZV基因型为J型.MV基因型为H1a亚型.结论 EV、VZV和MV是RFI的主要病原,开展相应的疫苗接种是控制RFI的主要措施.本研究建立了贵州省RFI实验室监测技术平台.
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国产冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性研究
1998年9月～1999年12月在上海市卢湾区和扬州市广陵区,对我国用Oka株和日本工艺生产的冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性进行了系统观察,并以日本生产的VZ-05疫苗和安慰剂作对照.用5批国产疫苗接种468人,发生低热反应102人(21.79%),中热反应50人(10.68%),强热反应3人(0.64%);日本VZ-05疫苗接种59人,发生低热反应6人(10.17%),无中、强反应.用5批国产疫苗接种免疫前抗体阴性者251人,抗体阳转231人,平均阳转率为92.03%(84.00%～98.00%),抗体几何平均滴度(GMT)为1:558.46～1:1129.47;而日本VZ-05疫苗的阳转率为89.80%,GMT为1:1126.10.用5批国产疫苗(1剂)接种免疫前抗体阳性者,接种后抗体滴度明显上升,GMT比免疫前提高3.34倍.此结果表明,国产疫苗反应轻微,安全性好,免疫原性亦好.水痘疫苗病毒对密切接触者无传播性.
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杭州市水痘-带状疱疹病毒流行株基因型特征分析
目的 了解杭州市水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)流行株基因型别特征.方法 采集2012-2017年临床诊断水痘患者疱疹液,提取样本DNA,PCR扩增ORF 22、38、54、62基因片段.用单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)方法分析ORF 22基因片段,确定病毒基因型别;用限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术分析ORF 38、54、62基因片段,区分野毒株和疫苗株.结果 23例临床诊断水痘患者的疱疹液中21例样本VZV核酸阳性.SNP分析结果显示,21例阳性VZV的基因型均属于clade 2.RFLP分析结果显示,21例阳性VZV均为野毒株(PstI+ BglI+ SmaI-).结论 杭州市VZV流行株基因型别主要是clade 2,未发现疫苗株感染.
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上海市部分地区健康人群水痘-带状疱疹病毒感染率调查报告
目的了解上海市部份地区健康人群水痘-带状疱疹病毒(VZV)自然感染状况.方法采集0～50岁健康人群血清标本921人份,用酶联免疫吸附试验测定抗体水平.结果人群血清中抗VZV-IgG总阳性率为42.78%,几何平均滴度(GMT)为1:206.69.以0～2岁低,阳性率为14.52%～18.33%,GMT为1:45.36～1:67.97.以后随年龄增长而逐步升高,3、4、5、6、7、8～9、10～14、15～19、20～29、30～39、40～50岁阳性率分别为21.37%、23.81%、27.91%、45.95%、29.63%、91.18%、88.57%、100.00%、97.14%、96.67%、100.00%.7岁以前感染率为45.9%.结论以上数据对应用水痘疫苗免疫预防策略及接种对象提供了科学依据.
