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浙江省台州地区不同来源的大肠埃希菌耐药性分析及产超广谱β-内酰胺酶、头孢菌素酶的基因分型
目的 了解浙江省台州地区的分散式供水、食品从业人员粪便及临床标本分离的大肠埃希菌耐药状态、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)情况及相关耐药基因的类型.方法 从分散式供水标本、食品从业人员肛拭及临床标本中分离培养的各100株大肠埃希菌进行药敏试验,用ESBLs确证试验、AmpC酶检测试验检测实验菌株的表型,以PCR扩增和序列分析检测相关的耐药基因.结果 从食品从业人员肛拭分离到的菌株耐药性高于分散式供水中分离的菌株,而临床标本分离到的菌株耐药性更高;从100株集中式供水分离的菌株中检测出产ESBLs菌6株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9.100株食品从业相关人员肛拭分离的菌株中检测出产ESBLs 17株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9,CTX-M-9;检出产AmpC酶3株,基因型为MOX-1、DHA-1.100株临床标本中分离出产ESBLs 33株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9、CTX-M-9、CTX-M-25;检出产AmpC酶9株,基因型为MOX-1、DHA-1、FOX-1.结论 在分散式供水及正常食品从业相关人员粪便中检出产ESBLs、AmpC酶的大肠埃希菌与在临床分离的标本中的产ESBLs、AmpC酶的大肠埃希菌携带的基因型有一定的相似性.
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鲍曼不动杆菌产OXA-23和AmpC酶的Meta分析
目的 比较全国8个省市鲍曼不动杆菌产OXA-23、AmpC酶情况,并分析其耐药机制.方法 搜集国内关于鲍曼不动杆菌耐药机制的研究报道,采用Meta分析的方法对产OXA-23、AmpC酶情况进行综合分析.结果 收集8个省市的鲍曼不动杆菌产OXA-23、AmpC酶的相关文献,两种酶总体检出率比较,差异无统计学意义(χ2=0.1183,P=0.7309);但各地区间存在一定差异,上海、江苏以产OXA-23为主,浙江、广东、重庆以产AmpC酶为主.结论 全国鲍曼不动杆菌产OXA-23、AmpC酶一致,但不同地区间存在一定差异.
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产AmpC肺炎克雷伯菌质粒介导的多药耐药性与基因型研究
目的 探讨产AmpC肺炎克雷伯菌耐药质粒介导的多药耐药性、耐药基因类型及转移方式.方法 应用VITEK-2型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,头孢西丁纸片扩散法筛选出疑产AmpC酶阳性菌株,采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式,通过K-B法检测受体菌的多药耐药性,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验和PCR测序等试验分析其耐药基因.结果 820株临床分离的肺炎克雷伯菌筛选出疑产AmpC酶阳性菌株108株,阳性率为13.17％;108株疑产AmpC菌经接合试验、AmpC酶表型确认试验获53株产AmpC接合子;经基因测序单纯AmpC酶基因阳性菌株34株,阳性率64.15％;同时携带ESBLs和AmpC基因菌株检出19株,阳性率35.85％;其均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌.结论 质粒介导AmpC酶是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的重要原因,产酶株对多种抗菌药物耐药,耐药基因质粒的转移可导致耐药性的传播扩散.
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产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶肺炎克雷伯菌的分布及耐药特征分析
目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素(AmpC)酶肺炎克雷伯菌的分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 对医院2011年1月-2016年12月临床送检各类标本进行培养,分析产ESBLs与AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率,药敏试验采用K-B扩散法;双纸片增效法检测ESBLs;头孢西丁三维实验法检测AmpC酶;采用法国生物梅里埃公司VITEK-2-compact GN卡进行细菌鉴定.结果 共分离肺炎克雷伯菌2 124株,主要来自下呼吸道及气管抽吸物,占60.64％;六年间共检出952株产酶菌,检出率为44.82％,其中单产ESBLs750株,占78.78％,单产AmpC酶123株,占12.92％,同产ESBLs+ AmpC酶79株,占8.30％;产酶株主要集中在ICU及康复科,检出率分别为56.07％及55.77％;＞60岁年龄组产酶检出率高,为55.52％,与其他年龄组比较,差异有统计学意义(x 2=174.468,P＜0.01);产酶株与非产酶株对相同抗菌药物的耐药率,存在差异(P＜0.01);产酶株中出现了对碳青霉烯类抗菌药物耐药菌;除外头孢唑林、头孢呋辛、头孢吡肟、左氧氟沙星、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶及米诺环素等7种抗菌药物,单产AmpC酶肺炎克雷伯菌对其余15种抗菌药物的耐药率相比于单产ESBLs要高;除头孢唑林、头孢呋辛及阿莫西林/克拉维酸外,同产ESBLs+ AmpC酶的肺炎克雷伯菌对其余19种抗菌药物的耐药率相比于单产AmpC酶及单产ESBLs更高.结论 产酶的肺炎克雷伯菌耐药严重,临床应合理使用抗菌药物以降低耐药率.
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质粒型AmpC酶基因在肠杆菌属细菌的检测与研究
目的 对临床分离的26株头孢西丁高水平耐药肠杆菌属细菌进行检测,探讨其质粒型AmpC}内酰胺酶基因的分布.方法 对2014年临床分离的头孢西丁MIC≥128 μg/ml的26株肠杆菌属细菌进行检测,琼脂平皿二倍稀释法检测细菌的MIC,采用碱裂解变性法提纯质粒DNA,多重PCR法检测细菌上质粒型AmpC β-内酰胺酶基因.结果 对头孢西丁的MIC≥128μg/ml、对氨苄西林的MIC≥512 μg/ml的菌株进行研究,头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟和氨曲南的MIC90分别为512、64、32 μg/ml和256 μg/ml;26株肠杆菌属细菌中仅2株阴沟肠杆菌未检测到质粒型AmpC酶基因;分别有13、11株和4株肠杆菌属细菌检测到DHA、EBC和FOX条带;其中4株肠杆菌属细菌同时检测到两种基因,3株同时扩增到DHA和EBC条带.结论 头孢吡肟可作为治疗该类细菌感染的首选药物;DHA、MIR-1、ACT-1型AmpC β-内酰胺酶在肠杆菌属细菌中的分布相对较多.
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高产AmpC酶肺炎克雷伯菌的临床报道
目的对临床分离出的高产AmpC肺炎克雷伯菌分子生物学以及耐药特性进行研究. 方法对从临床分离的1株头孢西丁高度耐药的肺炎克雷伯菌进行分析;用三维试验初步检测其高产AmpC,然后用等电聚焦以及酶抑制试验等进行确认;用接合试验检验耐药基因的转移性,后用E-TEST法进行小抑菌浓度(MIC)测定. 结果该菌株三维试验为阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明,该菌株产一种等电点(PI)为7.8的能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制的β-内酰胺酶;接合试验表明表达该β-内酰胺酶的基因具有转移性,用E-TEST法检测表明该菌株对环丙沙星、阿米卡星、青霉素类、酶抑制剂合剂及三代头孢菌素类均耐药,但它们对头孢吡肟、碳青酶烯类的亚胺培南和伊他培南均敏感. 结论我院临床分离肺炎克雷伯菌已经出现中高产AmpC菌株,其耐药性能够水平传播,并造成对多种三代头孢菌素及头孢西丁耐药,已经对临床的抗生素治疗带来重大威胁.
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临床产多种β-内酰胺酶大肠埃希菌的生物学研究
目的对临床分离出产多种β-内酰胺酶的大肠埃希菌,进行生物学以及耐药特性研究.方法用三维试验、等电聚焦以及酶抑制试验以及接合试验,对临床分离的1株对多种β-内酰胺类抗生素高度耐药的大肠埃希菌进行分析,用E-TEST法进行小抑菌浓度(MIC)测定.结果该菌株三维试验为阳性显示高产AmpC酶,等电聚焦以及酶抑制试验表明,该菌株能够产3种等电点(PI)分别为5.4、8.2及9.0的β-内酰胺酶,等电点为9.0的β-内酰胺酶能够被氯唑西林抑制,而不能被克拉维酸抑制;等电点为8.2和5.4的β-内酰胺酶能够被克拉维酸抑制而不能被氯唑西林抑制,而且接合实验表明这两种酶的特性可以被转移到受体菌;检测表明该菌株对环丙沙星、阿米卡星、青霉素类、酶抑制剂合剂、三代头孢菌素类甚至头孢吡肟耐药,但对碳青酶烯类的亚胺培南和伊他培南均敏感.结论我院临床分离大肠埃希菌中已经出现同时产AmpC、ESBLs等多种广谱β-内酰胺酶的菌株,并造成对多种三代头孢菌素及头孢西丁耐药,对临床的抗生素治疗带来严重威胁.
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质粒介导产AmpC酶大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌AmpC基因型检测与分析
目的 了解台州、温州两地临床分离的由质粒介导的产AmpC酶大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌ampC耐药基因型.方法 采用酶提取三维试验、头孢西丁三相试验、氯唑西林双纸片协同法等方法测定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌AmpC酶;采用PCR法测定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌ampC耐药基因型.结果 在20株产AmpC酶的大肠埃希菌中,检测到DHA基因有5株(25%),检测到MIR基因有2株(10%),检测到FOX基因有2株(10%);在20株产AmpC酶的肺炎克雷伯菌中,检测到DHA基因有7株(35%),检测到MIR基因有1株(5%);在产AmpC酶的大肠埃希菌中,有1株ESBLs阳性的菌株,AmpC氯唑西林协同试验阳性,但AmpC三维试验与头孢西丁三维试验均阴性,在质粒中同时检测到DHA基因与MIR基因.结论 两地临床分离的由质粒介导的大肠埃希菌以DHA基因为主,阳性率25%,MIR、FOX基因为辅,阳性率各10%;由质粒介导的肺炎克雷伯菌ampC耐药基因以DHA基因为主,阳性率35%,MIR基因为辅,阳性率为5%;未检到其他ampC耐药基因.
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不动杆菌临床分离株耐药性相关基因研究
目的:研究北京大学第一医院不动杆菌临床分离株耐药表型与基因型.方法:琼脂稀释法和E-test法测定13种抗菌药物对31株不动杆菌的低抑茵浓度(MIC),PCR检测8种耐药相关基因并测序分析.结果:18株不动杆菌呈现多重耐药;aacCl,aacA4,PER-1,AmpC和Intl阳性率分别为58.1%(18/31),3.2%(1/31),3.2%(1/31),54.8%(17/31)和67.7%(21/31),aacC2,OXA-23和Int2阴性;敏感组和耐药组Intl检出率分别为23.1%和100%.耐药基因与已知序列同源性均>98%.结论:北京大学第一医院不动杆菌耐药问题严重,对β内酰胺类和氨基糖苷类抗生素耐药性分别与AmpC和aacCl相关;Intl与多重耐药相关.
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阴沟肠杆菌产AmpC β-内酰胺酶的流行情况调查
目的:了解我国临床分离的阴沟肠杆菌中,诱导性产AmpC酶菌株和组成性高产AmpC酶菌株的发生率.方法:用标准纸片扩散法药敏试验对106株临床分离的阴沟肠杆菌进行筛选,对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松或氨曲南耐药或中介则为初筛阳性,阳性菌株全部进行酶粗提物三维试验和等电聚焦电泳,以进一步对产酶情况进行分析.全部初筛阴性菌株和初筛阳性而三维试验阴性菌株均进行AmpC酶诱导定性试验,以检出其中的诱导性产AmpC霉酶菌株.结果:106株阴沟肠杆菌中,42株(39.6%)对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松或氨曲南耐药或中介,31株(29.2%)组成性高产AmpC酶,68株(64.2%)诱导性产AmpC酶.高产AmpC酶菌株主要分离自痰标本(64.5%)、各种外科感染标本(19.4%)和尿标本(9.7%),其中,痰标本中高产AmpC酶菌株所占比例高(37.0%).结论:在我国临床分离的阴沟肠杆菌中,由AmpC酶介导的第三代头孢菌素耐药问题已经较为严重,必须尽快采取有效措施遏制高产AmpC酶菌株的蔓延.
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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶的筛选
目的：了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶的分布、表型及其检测方法。方法应用纸片法进行初筛后，分别用美国临床实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS)推荐的确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases，ESBLs)和用头孢西丁三相试验检测AmpCs酶。结果367株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中经ESBLs药敏初筛和确证试验，有115株(31.3%)产ESBL，有17株（4.6％）头孢西丁三相试验阳性者。结论本院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产β-内酰胺酶以ESBLs为主，AmpC酶占4.6%。
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EDTA纸片-头孢西丁平板试验检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶
目的 建立并评价检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶的EDTA纸片-头孢西丁平板试验(E-CAM).方法 以阴沟肠杆菌029M和大肠埃希菌ATCC 25922作质控,用E-CAM和酶粗提物三维试验(TDEM)同时检测临床分离的头孢西丁不敏感大肠埃希菌(14株)和肺炎克雷伯菌(13株)的AmpC酶,对2种方法进行比较.结果 E-CAM试验应用4 mg/L 头孢西丁平板和750 μg EDTA纸片进行检测,其结果与TDEM试验基本一致,总符合率为96%.结论 该方法操作简便、结果易于判读,在一块平板上可同时进行多株菌的检测,适于各级临床微生物实验室应用.
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肺炎克雷伯菌呼吸道分离株头孢菌素β-内酰胺酶检测
目的 了解我院肺炎克雷伯菌(KP)呼吸道分离株头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC)的携带情况、基因型特点及耐药状况.方法 收集我院2005～2007年呼吸道分离的54株KP,以头孢西丁(FOX)耐药筛选耐药株;用碱裂解法提取耐药株质粒;采用PCR扩增AmpC基因,并对其产物进行测序以确定其基因型;对FOX耐药株进行超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs) 表型确证试验;用K-B法进行药物敏感试验.结果 54株KP中29株FOX耐药; 22株AmpC阳性,测序后均为DHA-1型;24株ESBLs表型确证试验阳性;AmpC阳性KP对碳氢霉烯类100%敏感,对其他抗生素均有不同程度耐药.结论 KP呼吸道分离株AmpC酶检出率高,流行基因型为DHA-1,产AmpC酶菌株的ESBLs携带率高,耐药情况严重.
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头孢哌酮/舒巴坦对产AmpC β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的抗菌作用比较物等效性研究
本研究对7个厂家生产的头孢哌酮/舒巴坦进行抗菌作用比较,给医院制定进药方案及临床选用头孢哌酮/舒巴坦提供理论依据.
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重症监护病房革兰阴性杆菌产ESBLs、产AmpC酶的检测与耐药性
目的了解重症监护病房(ICU)革兰阴性杆菌产ESBLs、AmpC酶的情况及其耐药性,指导临床用药.方法回顾性分析2001年1月至2004年12月ICU病房患者感染性标本中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ES-BLs、AmpC酶的耐药情况.结果 92株大肠埃希产ESBLs、产AmpC酶的检出率分别为64.1%和27.2%;86株肺炎克雷伯菌产ESBLs、产AmpC酶的检出率分别为52.3%和29.1%.这些细菌呈多重耐药且两种产酶菌株耐药性也略有不同.结论需加强ICU病原菌耐药性监测,指导临床合理用药.
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肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布检测与耐药特性的相关性研究
目的 研究肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布与耐药特性的相关性.方法 收集2008年1月至2013年12月临床分离的100株肺炎克雷伯菌,采用K-B法进行体外药敏试验,采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,采用聚合酶链式反应进行ESBLs酶及AmpC酶基因的检测.结果 60株检测出ESBLs酶,其中60株内检出ESBLs基因阳性56株,主要为SHV型基因;检出AmpC酶的检测6株,主要为DHA型基因.其中两种基因同时阳性者1株.除哌拉西林/他唑巴坦,单产AmpC酶、ESBLs及两种基因同时阳性菌(SSBLs)对其他17种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株.结论 医院肺炎克雷伯菌的主要耐药机制为ESBLs酶及AmpC酶基因.ESBLs耐药基因检出率高,ESBLs阳性株耐药率明显高于ESBLs基因阴性株.
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产AmpC酶肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性分析
目的 了解本地区质粒介导的耐药机制在产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用、氨基糖苷修饰酶(AMEs)基因类型及转移方式.方法 头孢两丁三维试验方法,检测产AmpC酶菌株;采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式.采用K-B纸片测定产AmpC接合子对4种氨基糖苷类抗生素的敏感性,并采用PCR技术检测AMEs基因.结果 临床分离的820株肺炎克雷伯菌共筛选出108株疑产AmpC酶菌株,阳性率为13.17％.经接合转移试验、AmpC酶表型确认试验共获得53株产AmpC接合子.其中67.9％的接合子(36/53)检出氨基糖苷修饰酶基因,aac (3)-Ⅰ和aac (6')-Ⅱ未检出,对4种常用氨基糖苷类抗生素(阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、奈替米星)耐药率分别为37.7％、68.0％、43.4％和62.3％.结论 本地区质粒介导AmpC酶是肺炎克雷伯菌产生多重耐药的重要原因,产酶株对氨基糖苷类高度耐药,其耐药性与AMEs密切相关,耐药基因质粒的转移可导致耐药性的传播扩散.
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产超广谱β-内酰胺酶AmpC细菌感染及耐药特性
[目的]了解医院内产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和高产AmpC细菌感染和耐药特性. [方法]三维试验检测高产AmpC细菌、双纸片协同试验检测产ESBLs菌.Kirby-Bauer法测定药物敏感试验,回顾患者临床资料及使用抗生素情况.[结果]高产AmpC细菌在阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别为12.8%(11/89)、4.1%(7/170)和2.6%(5/190);产ESBLs 菌分别为42.7%(38/89),肺炎克雷伯菌31.7%(54/170),大肠埃希菌27.3%(52/190),其中同时产两种酶为6株.高产AmpC和产ESBLs菌对三代头孢菌素,氨曲南的耐药性明显高于非产酶菌,对泰能均敏感.前者对四代头孢敏感但对酶抑制剂耐药.高产AmpC和产ESBLs菌感染与使用三代头孢有关.[结论]高产AmpC和产ESBLs是临床G-菌耐药的重要机制,其产生与使用三代头孢有关.
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对血液中鲍曼不动杆菌致病性及耐药性的分析
目的：分析血液中鲍曼不动杆菌的致病性及耐药性，为临床上合理使用抗生素提供依据，提高抗生素的治疗效果，减少或减缓耐药菌株的产生。方法：选取从我院2011年1月至2013年8月期间住院患者的254例血液标本中分离出的21株鲍曼不动杆菌作为研究对象。分析检出鲍曼不动杆菌的时间、检测这些鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药情况及产生超广谱β内酰胺酶（ESBLs）和AmpCβ内酰胺酶（AmpC酶）的情况。结果：鲍曼不动杆菌的检出率呈逐年上升的趋势。本次从血液中分离的21株鲍曼不动杆菌中，有12株来自年龄小于6岁的小儿患者，有9株来年龄大于60岁的老年患者；其中，有19株产生了ESBLs，有21株产生了AmpC酶。鲍曼不动杆菌对安曲南、亚胺培南、美洛培南、左氧氟沙星的耐药率较低。结论：由鲍曼不动杆菌引起的菌血症患者呈逐年增加的趋势。鲍曼不动杆菌的耐药率高，耐药谱广，致病力较强。医务人员应加强对鲍曼不动杆菌的研究，对其进行耐药性监测，控制该菌的感染与流行，减少其耐药菌株的产生。
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肺炎克雷伯菌AmpC、ESBL的检测和耐药性分析
目的:分析肺炎克雷伯菌的耐药现状,检测ESBLs、AmpC酶的流行状况.方法:利用CLSI 纸片法确认实验和APB纸片增强试验分别检测ESBLs 和AmpC 酶,用纸片扩散法检测82株肺炎克雷伯菌对16种抗生素的耐药情况.结果:单产ESBLs 和AmpC 酶分别占56.1% 和9.8%.结论:肺炎克雷伯菌的耐药现象严重、多重耐药现象突出,ESBLs检出率高.
关键词： 肺炎克雷伯菌 AmpC 酶 超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)
