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电针对吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡相关基因的影响
目的:探讨电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的作用机制.方法:40只SD大鼠随机分为正常组、对照组、依赖组、电针组,连续20 d递增量肌肉注射吗啡造成吗啡成瘾模型.造模后,依赖组立刻处死;对照组观察7 d后处死;电针组电针双侧"足三里"穴(2/100 HZ,2~4 mA),每日1次,每次30 min,治疗7 d后处死.取大鼠胸腺,用免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白表达.结果:与正常组比较,对照组和依赖组Bcl-2表达明显减少,Bax明显增加(P<0.01);电针组与对照组相比,Bcl-2表达上升(P<0.05),Bax表达的下降尚未达到统计学意义(P>0.05).对照组及依赖组Fas、FasL的表达比正常组明显升高(P<0.01);电针组与对照组相比,Fas、FasL的表达均明显减少,差异显著(P<0.01).结论:电针"足三里"穴增加吗啡戒断大鼠胸腺细胞内Bcl-2蛋白表达的水平,减少Bax蛋白表达水平,降低Bax/Bcl-2比值,抑制Fas、FasL表达水平的提高,可能是电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的作用机制之一.
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抗凋亡基因livin在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义
为了探讨急性非淋巴细胞白血病(ANLL)原代细胞livin基因表达及临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测46例急性非淋巴细胞白血病患者livin基因mRNA表达水平,以10名健康人为正常对照,以HL-60细胞株为阳性对照.结果表明,livin mRNA在初治ANLL患者中的表达较正常对照组明显升高(p<0.05);治疗缓解后表达明显下降(p<0.05);复发后其表达又升高.在初治ANLL患者中,livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率(CR)低于表达阴性的患者(p<0.05).结论:livin基因过度表达和ANLL的发病呈正相关;livin基因高表达的患者完全缓解率低,预后不良;livin可作为急性非淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.
关键词: 抗凋亡基因 livin基因 急性非淋巴细胞白血病 -
彩色多普勒检测卵巢肿瘤血流及其与抗凋亡基因表达和微血管密度的关系
目的探讨彩色多普勒检测卵巢肿瘤血流及其与抗凋亡基因存活素(survivin)表达和微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法应用彩色多普勒超声检测42例卵巢肿瘤内血流信号,测其阻力指数(RI);采用免疫组织化学方法检测MVD及survivin表达.结果恶性卵巢肿瘤组织中血流RI值显著低于良性卵巢肿瘤(P<0.01);而与肿瘤的组织类型、临床分期、淋巴结转移与否无相关性.恶性卵巢肿瘤survivin的表达率显著高于良性组(P<0.01). RI值与MVD呈负相关且有统计学意义(r=-0.438,P<0.05).survivin阳性表达组的RI值略低于survivin阴性表达组,二者相比无显著性差异(P>0.05).survivin阳性表达组MVD高于survivin阴性表达组(P<0.05).结论上述3项指标分别从不同角度反映了卵巢肿瘤血管生成的特性,联合应用这3项指标可为临床早期诊断和评估卵巢肿瘤提供新的理论依据.
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人类抗凋亡基因survivin的克隆及其原核表达
目的:克隆人类抗凋亡基因survivin(SVV),实现SVV基因在大肠杆菌中的高效表达.方法:提取胃癌细胞系SGC-7901总RNA,RT-PCR扩增人SVV全长cDNA,克隆于载体pGEM-T,酶切、测序鉴定.将人类SVV基因全长cDNA克隆入原核表达载体pRSET,实现该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.结果:得到人SVV基因全长cDNA,经测序与SVV基因的已知序列相同,原核表达所获融合蛋白经SDS-PAGE电泳与已知SVV基因的蛋白质表达产物大小相近.结论:克隆出人SVV基因的全长cDNA,并克隆入原核表达载体pRSET,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达.
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凋亡相关基因bcl-2与bax在人食管鳞癌中的表达
目的:探讨bcl-2及bax基因在我国食管鳞癌中的表达特点,研究其在食管癌变中的可能作用.方法:应用原位杂交技术、流式细胞术及免疫组化方法对81例食管鳞癌中bcl-2及bax基因的表达进行检测,并应用图像分析技术对原位杂交及免疫组化结果进行定量分析.结果:bcl-2 mRNA在正常食管上皮无表达,在癌旁上皮主要是上皮近基底部细胞中呈阳性表达.食管鳞癌细胞胞质可见明显的bcl-2 mRNA表达.图像定量分析显示bcl-2mRNA表达与分化程度有显著相关性(灰度值37.88±11.40vs 23.03±8.71,19.90±4.33,6.60±3.36,P<0.05;44.89±15.26 vs 23.03±8.71,19.90±4.33,6.60±3.36,P<0.05).Bcl-2蛋白在食管鳞癌中表达随癌组织的分化程度降低其表达显著增高并且在不同分化组间差异显著(F=8.738,P<0.01).Bax蛋白在食管鳞癌细胞中都有表达,但各组间均无显著性差异.结论:在食管鳞癌中凋亡相关基因bcl-2,bax表达异常增高,尤其是抗凋亡基因bcl-2可能在食管鳞癌癌变及浸润过程中起着重要作用.
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肝癌组织中bcl-xL mRNA的表达
目的:通过抗凋亡基因bcl-xL在正常肝和肝癌组织中的表达及与肝癌患者临床资料关系分析,从分子水平探讨该基因控制肝癌细胞凋亡的作用.方法:应用Northem blot分析法对正常肝和肝癌组织中bcl-xLmRNA表达水平进行测定,并对肝癌患者bcl-xL mRNA表达水平同临床资料关系行统计学分析. 结果:Northern blot分析显示,与正常肝组织相比,95%(20/21)肝癌组织bcl-xL mRNA明显呈低表达,密度测定分析法显示:肝癌组织bcl-xL mRNA水平(2.43±2.22)较正常肝组织(8.50±5.74)低3.5倍(P=0.0002).肝癌组织中bcl-xL mRNA水平同患者年龄、性别、肿瘤分化程度和分期无关.结论:抗凋亡基因bcl-xL在正常肝和肝癌组织中的不同表达提示该基因在此癌细胞凋亡中发挥重要作用,且与肝癌发展的不同阶段尚无明显相关.
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转survivin基因树突状细胞抗慢性粒细胞白血病的免疫效应
树突状细胞(DC)是目前为止发现的机体内功能强的专职抗原呈递细胞(APC),它参与淋巴细胞的生长分化,在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用.survivin (SVV)基因是一个抗凋亡基因,它在人类大多数肿瘤组织中表达,而在正常成人组织中不表达,故可认为是肿瘤组织较为特异的基因.为开展DC瘤苗的抗白血病免疫治疗,我们拟以重组腺病毒介导SVV基因修饰DC,观察诱导产生的特异性抗白血病免疫效应.
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bcl-2部分编码区的反义RNA促进烷化溶血磷脂诱导的白血病细胞凋亡
bcl-2抗凋亡基因在白血病细胞株常有高表达,引起对化放疗的耐受,封闭该基因的转录和翻译都将诱导白血病细胞凋亡,且对化放疗敏感.本研究通过比较逆转录病毒载体介导的全部和部分编码区的bcl-2反义基因瞬时和稳定表达在对抗bcl-2作用、降低内源性bcl-2蛋白水平和对烷化溶血磷脂ET 18-OCH3 (ALP)诱导白血病细胞凋亡的影响的差异,探讨了短片段bcl-2反义RNA作用特点,以期为硫代寡聚脱氧核苷酸的治疗白血病和对ALP协同体外净化白血病细胞提供实验基础.
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抗凋亡基因bcl-2与肿瘤
肿瘤的发生和发展,不仅是由于细胞的过度增殖,也与凋亡的扰乱有关.bcl-2是近年来发现的凋亡调控因子,在多种正常组织如神经组织、骨髓、表皮、淋巴组织及各种腺体广泛表达.在多种人体肿瘤中也检测到bcl-2表达,并与肿瘤的分化、抗药性、预后等有关.bcl-2在人体肿瘤的表达引起人们广泛的兴趣.
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喉癌中抗凋亡基因bcl-2和p53的表达及其与Epstein-Barr病毒的关系
肿瘤的发生不仅与细胞过度增殖相关,也与细胞凋亡减少有关.B cell lymphoma/leukemia gene-2(bcl-2)基因是近年来发现的一种抑制凋亡基因.有作者注意到Epstein-Barr病毒(EB病毒)与bcl-2基因具有同源性 [1].p53抑癌基因与恶性肿瘤发生的关系日益受到重视,p53基因定位于人类第17条染色体短臂(17p13),其基因的丢失或突变与人体多种肿瘤的发生、发展有密切关系.有研究表明,静止的B细胞几乎不表达p53,而在被EB病毒感染的B细胞p53表达明显增强.
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弱视视觉可塑性相关基因研究
可能与弱视发病密切相关的部分基因有抗凋亡基因(Bcl-2、Bax)、即刻早期基因(c-jun、c-fos)、视觉可塑性神经递质相关基因(N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚单位基因)、视觉可塑性神经营养因子相关基因(Neuritin mRNA、GDNF mRNA、BDNF mRNA、GAP-43 mRNA)、PTPoσ mRNA、β-catenin mRNA等.Bcl-2、Bax可能通过调节视觉系统相关神经细胞的存活来参与弱视的发病;c-jun、c-fos进入细胞核后能够改变靶基因的转录活性从而调节视皮质神经元的功能状态;N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚单位基因位于突触后膜,可以通过调节不同亚单位的表达水平来调节视皮层突触的可塑性;视觉可塑性神经营养因子相关基因中的Neuritin mRNA编码一种活性分子,这种活性分子可以促进树突的生长,从而调节视觉系统发育过程中神经元的活动;GDNF mRNA存在于视皮层和外侧膝状体,对各种损伤后的神经元具有保护和修复作用,能通过影响视觉系统正常发育过程中的转录来参与对视觉发育的调控,BDNF mRNA具有调节神经系统突触发育可塑性的效应,参与视觉发育关键期突触的可塑性变化;PTPσ mRNA、β-catenin mRNA参与了成年大鼠视皮层可塑性关键期的终止及可塑性再激活的过程.
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关键词:
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人胃癌中Survivin基因的克隆及其剪切体的发现
目的:克隆人类抗凋亡基因survivin(SVV).方法:提取胃癌细胞系SGC-7901总RNA,RT-PCR扩增人SVV全长cDNA,测序鉴定、原核表达.结果:得到两个SVV基因cDNA克隆,即SVV-S4A与SVV-S1B,前者与已知SVV基因cDNA序列相同,后者第3个外显子丢失.原核表达所获融合蛋白经SDS-PAGE电泳与已知SVV基因的蛋白质表达产物大小相近.结论:自人胃癌细胞中克隆出SVV基因的全长cDNA,并获得一个新的剪切体;实现了SVV基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.
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地塞米松诱导肺腺癌对紫杉醇耐药与Survivin基因表达
目的 观察不同浓度地塞米松(DEX)预处理后,再予紫杉醇(PTX)干预后人肺腺癌细胞的耐药情况及Survivin基因mRNA及蛋白表达的变化.方法 用四唑盐(MTT)试验测定不同浓度PTX作用于肺腺癌A549细胞后的细胞存活率,筛选出PTX的半数抑制浓度(IC50).用不同浓度DEX预处理A549细胞后,再予不同浓度PTX作用于A549细胞,用MTT试验测定细胞存活率,用RT-PCR和Western Blot法检测细胞中Survivin基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 不同浓度的DEX预处理A549细胞后能诱导其对PTX产生耐药,细胞耐药率随DEX浓度的增加而增高.Survivin基因mRNA和蛋白的表达水平随DEX浓度的增加而增高.结论 地塞米松能诱导肺腺癌细胞对紫杉醇产生耐药,其机制可能与地塞米松诱导肺腺癌细胞抗凋亡基因Survivin基因表达增加有关.
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维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞中核因子及抗凋亡基因的影响
目的 本研究以人胃癌SGC-7901细胞为肿瘤模型,在体外探讨维生素E琥珀酸酯(VES)在抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡过程中对NF-γ B组成性激活及抗凋亡基因在转录水平上的调控作用.方法 采用MTT法和Annexin V法分别检测不同浓度水平VES处理人胃癌sGC-7901细胞后细胞的生长和凋亡情况.采用细胞成分分离法获得细胞核总蛋白,然后以Western blot法测定VES处理后核因子蛋白p65在细胞核总蛋白中的含量.用RT-PCR方法检测VES对SGC-7901细胞中抗凋亡基因c-IAP1、c-IAP-2、NAPI、survivin、XLAP的转录调节作用.结果 12.5~50.0 μmol VES作用24h后,sGC-7901细胞的生长被明显抑制.50 μmol VES作用于细胞12h后可诱导细胞发生凋亡,且作用48h后其凋亡诱导作用更明显.Western blot结果发现,VES处理SGC-7901细胞后使细胞核内NF-γBp65蛋白的含量下降,即抑制了NF-γ Bp65向细胞核内的迁移.RT-PCR结果提示,VES处理胃癌细胞后可以在基因水平上抑制抗凋亡基因NAIP和survivin转录,对其他IAPs家族成员-c-IAP1、c-IAP-2、XIAP的转录无下调作用.结论 VES对SGC-7901细胞内NF-γ B组成性激活的调控作用及对抗凋亡基因在转录水平上的抑制作用可能是其抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞发生凋亡的机制之一.
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下调自噬性相关蛋白表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响
目的 观察下调自噬性相关蛋白(Beclin1)表达对抗凋亡基因(Bcl-2)表达的影响及胰腺癌细胞增殖变化,并探讨其机制.方法 构建靶向干扰质粒siBeclin1转染PANC-1细胞,细胞按照是否转染分为未转染组(Beclin1组)、空白对照组(siNegative control组)及转染组(siBeclin1组).以Western blot法及qRT-PCR法检测转染效率及Beclin1下调后Bcl-2变化;采用MTT检测siBeclin1转染后PANC-1细胞增殖.结果 Western Blot显示转染后Beclin1在siBeclin1组表达量明显低于siNegative Control组及Beclin1组(27.823±1.432、8.635±1.481、26.904±1.098,F=8.176,P<0.01),qRT-PCR显示,与siNegativecontrol组及Beclin1组对比,转染siBeclin1后,PANC-1细胞Beclin1 mRNA表达量明显降低(0.421±0.157、0.194±0.104、0.399±0.123,F=5.239,P<0.01),沉默效率为60%~70%;Bcl-2蛋白及mRNA在siBeclin1细胞的表达量明显高于Beclin1细胞(26.912±1.927、8.004±1.534,t=7.329,P<0.01;0.582±0.297、0.217±0.186,t=6.835,P<0.01);MTT显示,siBeclin1干扰后PANC-1细胞增殖能力增强,在72h分别为(61.54±6.81)%和(46.78±7.28)%,在96 h分别为(76.39±7.26)%和(54.27±8.17)%,差异均有统计学意义(t=3.674,P<0.05;t=10.185,P<0.01).结论 Beclin1表达下调后胰腺癌细胞增殖恶性行为增强,Beclin1可能通过下调Bcl-2表达抑制胰腺癌细胞的增殖,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.
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多发性骨髓瘤抗凋亡基因的表达及相关性分析
骨髓瘤细胞的永生化,即细胞凋亡受抑是多发性骨髓瘤(MM)发病、进展(复发耐药)的重要因素.MM细胞过度表达Bcl-2家族抗凋亡因子Bcl-2、Bcl-xL和Mcl-1,因此靶向Bcl-2等可大大降低肿瘤细胞的凋亡阈值,增强化疗敏感性.survivin是另一类凋亡抑制蛋白家族(IAP)中的小成员,与多种肿瘤的耐药以及预后相关.我们在本研究中通过检测上述两类抗凋亡基因在骨髓瘤细胞的表达,探讨两类抗凋亡因素对骨髓瘤发生发展的意义及相互关系,明确其临床应用价值.
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抗凋亡基因survivin在慢性粒细胞白血病中的表达及其临床意义
新近发现survivin基因是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员,在细胞增殖与凋亡的调控中起着重要的枢纽作用.我们采用RT-PCR方法测定survivin mRNA在慢性粒细胞白血病(CML)细胞中的表达水平并分析CML不同临床阶段的表达差异,现报道如下.
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血管内皮生长因子、MCL1、bcl-2在急性白血病中的表达
血管内皮生长因子(VEGF)是血管发生和生成过程中重要的细胞因子,对肿瘤的生长、侵袭起着重要作用.研究表明白血病细胞株VEGF及其特异性受体异常表达.为探讨VEGF在成人急性白血病(AL)发生发展中的作用,我们采用RT-PCR技术检测VEGF基因和抗凋亡基因MCL1、bcl-2 mRNA水平,并分析其相互的关系和临床意义,报道如下.
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银杏叶提取物对室间隔缺损修补术患儿心肌组织Bcl-2 mRNA、Bcl-xL mRNA表达的影响
本课题的前期动物实验及临床研究结果表明,心停跳液中加入银杏叶提取物可减轻心肌缺血再灌注损伤,对心肌有保护作用[1,2].体外循环(CPB)过程中的缺血再灌注损伤除可以导致心肌细胞坏死外,还会引起心肌细胞凋亡[3].心肌细胞凋亡在再灌注后心功能不全及心律失常的发生、发展起着重要作用.如何减少CPB过程中心肌细胞凋亡的发生,具有重要的临床意义.Bcl-2、Bcl-xL为重要的抗凋亡基因,本研究拟观察银杏叶提取物金纳多对CBP下室间隔缺损修补术患儿心肌组织Bcl-2 mRNA、Bcl-xL mRNA表达的影响.