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人巨细胞病毒感染与急性脑卒中的相关性研究
近年来,人巨细胞病毒(human cytomegalovir-us,HCMV)感染与包括脑卒中等在内的多种动脉粥样硬化性疾病的关系引起了关注。Yi 等[1]用免疫组织化学、原位杂交、聚合酶链反应(PCR)等3种方法对35例缺血性脑卒中患者和20例对照组患者颈内动脉的 HCMV-DNA 和抗原进行检测,发现脑卒中组患者的 HCMV 即刻早期基因/蛋白明显高于对照组。尽管大部分研究认为 HCMV 感染与脑卒中危险性相关,但也有少数流行病学研究得出了相反的结果[2,3]。另外,以往更多研究检测HCMV 方式是 HCMV 抗体检测,不能反映潜在的HCMV 感染情况。本研究拟采用荧光定量 PCR法检测 HCMV,探讨 HCMV 与脑卒中的关系。
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铅对小鼠学习记忆功能及海马区c-fos表达的影响
目的观察铅对小鼠海马区c-fos表达及学习记忆功能的影响,并探讨二者的关系.方法小鼠随机分为3个实验组和1个对照组,每组10只染铅剂量分别为2.4、4.8和9.6mmol/L,用跳台学习试验测试小鼠学习记忆能力;用RT-PCR法观察各组小鼠海马区c-fosmRNA的表达状况.结果(1)3个染铅组小鼠跳台学习成绩显著低于对照组(P＜0.01);(2)3个染铅组小鼠c-fosmRNA水平均明显降低,以对照组的值为100,则低剂量组为75.04±4.75,中剂量组为58.35±5.29,高剂量组为42.66±6.30,与对照组相比,P＜0.01.高剂量组、中剂量组与低剂量组比较,P＜0.01.结论慢性铅染毒间接阻碍了c-fox基因的反应性表达,c-fos基因表达水平的下降可能与铅致小鼠学习记忆功能损害有关.
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类毒素-A激活PC12细胞时胞内即刻早期基因的表达
目的探讨即刻早期基因在类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体过程中的调控作用.方法运用逆转录聚合酶链反应方法测定类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体时胞内c-fos,c-jun,NGFI-A和NGFI-B四个即刻早期基因的mRNA基因表达情况.结果当10-9、10-8、10-7mol/L类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体1小时,或10-7mol/L类毒素-A激活PC12细胞30、60、120分钟时,细胞内c-fos和NGFI-A mRNA基因表达均显著高于对照组(P＜0.05),是对照组的2～6倍,且c-fos基因表达呈剂量反应和时间效应关系.而此间c-jun和NGFI-B基因表达与对照比较没有明显变化.结论c-fos和NGFI-A可能参与调控类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体的作用.
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针灸防治胃溃疡中枢调控机制的研究进展
本文回顾了近年关于针灸防治胃溃疡中枢调控机制的研究.针灸对胃溃疡的防治效果已经被广泛的临床及实验研究结果所证实,近年来现代医学试图从中枢调控机制方面对其作用机理作出明确解释.然而文献表明目前的研究尚有局限,有待于对整体水平下的作用机理的研究做进一步的思考和探索.
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颈部迷走神经干刺激对癫痫大鼠脑内Fos样表达的影响
目的研究颈部迷走神经干刺激(VNS)抑制癫痫发作上传通路过程中的关键核团及相关脑区. 方法利用红藻氨酸(KA)诱发大鼠复杂部分性癫痫发作,并结合Fos免疫组织化学方法观察左颈部迷走神经干电刺激后全脑及延髓内Fos的分布及电刺激的影响. 结果 VNS后脑干双侧孤束核、蓝斑、臂旁核、中脑导水管周围灰质有很强的特异性Fos表达,外侧缰核、丘脑室旁核、菱形核、下丘脑室旁核、杏仁中央核、终纹床核、隔外侧核、梨状皮质等脑区亦可见Fos阳性细胞.预先给予电刺激后海马、齿状回、额、顶、颞皮质区域Fos表达明显受到抑制. 结论 VNS后Fos阳性的脑区及核团可能是电刺激发挥抑痫作用的关键部位,其神经元活性的改变或递质调节可能间接或直接影响大脑皮质的功能.
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雌、孕激素在癫痫发病中的作用及其机制研究
临床资料显示,某些女性癫痫患者体内雌、孕激素的周期性变化可能影响癫痫发作的易感性.为了探索雌、孕激素在癫痫发病中的作用,阐明其作用机制,本工作分别以马桑内酯(CL)侧脑室注射致痫、贝美格(Be)腹腔注射致痫大鼠为实验对象,采用神经电生理、流式细胞免疫荧光、高效液相色谱、免疫细胞化学、原位杂交技术,从整体、行为、细胞、分子以及基因水平研究了雌、孕激素对大鼠中枢神经系统(CNS)功能的影响.研究结果表明,卵巢甾体激素属于神经甾体激素,其作为新的神经调质对CNS具有广泛的影响,它们分别通过调节即刻早期基因、氨基酸类神经递质及神经递质受体而多环节影响CNS的兴奋性.
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EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒表达载体的构建及初步应用
目的 构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用.方法 采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd-BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ.vAd-BZ感染EBV阳性细胞NEC后,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和MTT等方法检测目的基因表达,以及目的基因表达对EBV阳性细胞的影响.结果 PCR、序列测定以及限制性酶切证实BZLFl基因正确插入穿梭质粒,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,重组腺病毒表达载体构建成功.经293细胞包装获得具有稳定感染性的重组腺病毒vAd-BZ,感染重组腺病毒的NEC靶细胞可以检测到BZLFl基因的表达,进而诱导EBV从潜伏期进入裂解期.结论 重组腺病毒vAd-BZ可有效感染EBV阳性细胞NEC,诱导潜伏状态的EBV活化,进而特异性杀伤EBV阳性肿瘤细胞.
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创伤性脑损伤影响骨折愈合速度的机制
目的 探讨创伤性脑损伤影响骨折愈合速度的可能机制.方法 采用创伤性脑损伤合并一侧胫骨骨折(A组)制作多发伤模型,不同时点观察FOS、JUN、bFGF、VEGF表达并与B组(单纯一侧胫骨骨折)比较,X线观察骨折愈合情况.结果 正常小鼠脑组织FOS、JUN、bFGF、VEGF低水平表达,B组略强.A组脑组织FOS和JUN的表达具有时程的一致性,创伤性脑损伤(TBI)后3 h达到高峰,12 h以后降至对照水平;bFGF与VEGF分别于创伤性脑损伤后12 h、24 h达到高峰,72 h降至对照水平.两组骨折位点FOS、JUN表达均于6 h达峰值,24 h后降至对照水平.3 h、6 h、12 h组间比较差异有显著性.A组骨折位点bFGF、VEGF表达分别于12 h、24 h达峰值,B组于24 h、48 h达峰值,均持续表达96 h以上.Spearman等级相关分析发现,A组脑挫伤灶周围脑组织FOS蛋白与bFGF表达、bFGF与VEGF蛋白表达呈正相关,相关系数分别是0.896、0.832(P＜0.05);A组骨折位点FOS蛋白与bFGF表达、bFGF与VEGF蛋白表达呈正相关,相关系数分别是0.938、0.945(P＜0.05);B组骨折位点FOS蛋白与bFGF表达、bFGF与VEGF蛋白表达也呈正相关,相关系数分别是0.833、0.914(P＜0.05);两组脑组织FOS、JUN蛋白与骨折位点FOS、JUN表达的关系无统计学意义.影像学上A组在术后第三周时已接近全部愈合,B组到第4周时才仝部愈合.结论 创伤性脑损伤合并长骨骨折是比较理想的多发伤实验动物模型;创伤性脑损伤后骨折位点bFGF、VEGF表达更早更强,促进成骨.
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结缔组织生长因子与骨重建
结缔组织生长因子(CTGF)是即刻早期基因(CCN)家族的成员之一,早由Bradham等[1]在1991年用亲和色谱法从人脐静脉内皮细胞条件培养基中发现,研究表明,CTGF mRNA及其蛋白产物可在内皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞、血管平滑肌细胞和成骨细胞等多种细胞中表达,在机体多种生物学过程,如胚胎发育、瘢痕组织、恶性肿瘤、软骨发生和诱导成骨细胞的分化、创伤愈合及促进多种细胞的黏附和运动等方面发挥着重要作用.
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中枢和外周神经损伤后再生早期神经元胞体基因表达的差异
目的:基因芯片技术在进行功能基因组的研究方面具有高通量、大规模、相关性分析等其他方法所不可比拟的优势.我们应用CLONTECH公司的AtlasTM 1.2大鼠cDNA microarray试剂盒及Image 3.0软件分析了大鼠脊髓和坐骨神经损伤后神经元分布区组织的基因表达谱,发现有多种结构和功能基因表达存在差异.我们将筛选出的部分基因用RT-PCR的方法在动物模型中进行了验证.方法:雄性Wistar大鼠,体重200±20克,随机分为坐骨神经夹伤和脊髓半横断损伤两组.伤后7d取相应的神经元胞体分布区神经组织,提取总RNA;根据脊髓损伤和坐骨神经夹伤后神经元胞体区神经组织cDNA microarray分析筛选的结果,选择的基因有即刻早期基因(Fos,Jun-B)、与信号转导有关的分子(14-3-3PGS,GPR12,FRAG1)、与细胞增殖有关的分子(PC-NA)、参与细胞凋亡调节的分子(Bcl-2,Bcl-X)、与神经细胞可塑性有关的分子(NCAM)以及胶质细胞来源的分子(MBP).用RT-PCR的相对定量的方法检测不同损伤模型中胞体区神经组织基因表达的水平,并进行分析对比.结果:(1)筛选出的基因在坐骨神经损伤后表达呈增加趋势的多与促进生长有关,包括GAP43,PCNA,NCAM,Bcl-2等;(2)脊髓损伤后其相应的皮层感觉运动区神经组织基因表达变化的种类与坐骨神经损伤后脊髓相应节段有所不同:即早基因Jun-B、与细胞内信号转导有关的分子14-3-3PGS、GPR12及FRAG1基因表达上调;(3)胶质细胞源性的分子BMP(myelin basic protein)在中枢和外周神经损伤后表达均呈上升趋势,提示轴突损伤后受损神经元胞体周围的胶质细胞也受到影响.结论:脊髓和坐骨神经损伤后相应胞体分布区神经组织基因表达确实存在差异,进一步动态观察这些基因在整体和离体损伤模型中表达的变化规律、进行多基因相关性的分析以及进行功能研究将有可能使我们更加明确这些基因变化在神经再生调控中的作用.
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弱视视觉可塑性相关基因研究
可能与弱视发病密切相关的部分基因有抗凋亡基因(Bcl-2、Bax)、即刻早期基因(c-jun、c-fos)、视觉可塑性神经递质相关基因(N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚单位基因)、视觉可塑性神经营养因子相关基因(Neuritin mRNA、GDNF mRNA、BDNF mRNA、GAP-43 mRNA)、PTPoσ mRNA、β-catenin mRNA等.Bcl-2、Bax可能通过调节视觉系统相关神经细胞的存活来参与弱视的发病;c-jun、c-fos进入细胞核后能够改变靶基因的转录活性从而调节视皮质神经元的功能状态;N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚单位基因位于突触后膜,可以通过调节不同亚单位的表达水平来调节视皮层突触的可塑性;视觉可塑性神经营养因子相关基因中的Neuritin mRNA编码一种活性分子,这种活性分子可以促进树突的生长,从而调节视觉系统发育过程中神经元的活动;GDNF mRNA存在于视皮层和外侧膝状体,对各种损伤后的神经元具有保护和修复作用,能通过影响视觉系统正常发育过程中的转录来参与对视觉发育的调控,BDNF mRNA具有调节神经系统突触发育可塑性的效应,参与视觉发育关键期突触的可塑性变化;PTPσ mRNA、β-catenin mRNA参与了成年大鼠视皮层可塑性关键期的终止及可塑性再激活的过程.
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心理应激诱导原癌基因表达
20世纪80年代末,以c-fos/c-jun为代表的"原癌基因(proto-oncogens)"或"即刻早期基因 (immediate early genes ,IEG)"在神经和行为科学研究中开始被注意,因为其参与细胞的生长、分化、神经功能可塑性改变以及学习和记忆等多种生理和行为过程,不同生理心理刺激均可诱导原癌基因的表达[1, 2],具有对细胞外刺激的快速诱导性的特点.心理应激是机体通过认识、评价而察觉到应激源的威胁时所引起心理生理机能改变的过程,与神经内分泌-免疫系统之间有复杂的相互联系,原癌基因可由于心理应激等活动而进行转录、翻译,表达以Fos/Jun为主的核蛋白,然后返回核内参与组成对其它靶基因转录调节的"转录因子" .目前,检测fos和jun蛋白及用同位素标记原癌基因的DNA核酸片段的原位分子杂交,已成为研究心理应激的一个重要手段[ 3-5 ].本文期望能引起运动生理界的注意,为研究如何提高优秀运动员的心理素质,从而延长其运动生涯甚至寿命提供启发.
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人巨细胞病毒即刻早期基因功能研究
目的 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在体外增殖过程中即刻早期(immediately early,IE)基因的作用.方法 设计并化学合成3条靶向IE基因外显子序列的siRNA,应用阳离子脂质体法将干扰序列转染入人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblast,HELF)细胞,用HCMV感染已转染入siRNA的细胞,同时设置正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和转染试剂对照组.采用流式细胞术检测转染效果,荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳方法检测分析导入的siRNA对IE基因和GAPDH阳性对照基因的抑制效果以及早期(E)基因和晚期(L)基因的表达情况.结果 siRNA成功导入HELF细胞内,6孔板内5μl脂质体可导入的佳siRNA量约为100pmol,阳性对照组GAPDH表达量较其他对照组有明显的下降(P＜0.05),抑制率为70.8％;干扰组中3条siRNA对IE基因的表达均有抑制作用.IE基因表达下调后,E基因和L基因的表达较对照组也有明显下降(P＜0.05).结论 在体外,靶向IE基因的siRNA能有效抑制IE基因的表达从而影响E基因和L基因的表达,表明IE基因的有效表达是E基因和L基因表达的基础.
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即刻早期基因c-fos与学习记忆的关系及研究进展
即刻早期基因(IEGs),是指细胞经外部刺激后先表达的一组基因,是联系细胞生化改变与细胞终对刺激发生特异性反应的中介物.不仅参与细胞的正常生长、分化过程,而且也参与细胞内信息传递过程和细胞的能量代谢过程,在学习记忆中起着极为重要的作用.目前已发现的IEGs有十几种,有特征、重要的是c-fos基因族(包括c-fos、fos-B、fos-1、fos-2).大量研究发现,c-fos基因及其蛋白产物与学习记忆有着极为密切的联系.本文主要就c-fos基因与学习记忆的关系及研究进展做一综述.
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结缔组织生长因子与狼疮肾炎
结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是即刻早期基因中的CCN家族成员之一[1],初是由Bradham在人体脐静脉内皮细胞的条件培养基中发现[2].CTGF可由成纤维细胞、内皮细胞、软骨细胞、癌细胞及平滑肌细胞合成分泌,人体许多组织如心脏、脑、胎盘、肺、肝、肌肉、肾及胰腺中均有表达,尤其在肾脏中含量较高.
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睡眠剥夺对大鼠海马区c-fos和IL-1β表达影响
研究显示,失眠对中枢神经系统的毒性作用包括思维紊乱、反应迟钝、注意力分散、定向障碍、学习记忆受损等,睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)24h使人的认知能力下降30％～40％,持续48 h,认知能力下降达60％ ～70％[1-2].研究显示,即刻早期基因c-los与病理状态下神经细胞损伤呈平行关系;细胞因子IL-1 β在认知功能方面具有重要作用[3-4].本研究观察不同时间睡眠剥夺对海马区c-los和IL-1 β表达影响,为控制睡眠剥夺后不良反应提供新思路.
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铅对大鼠海马C-fos基因表达及学习记忆的影响
目的观察和探讨铅对大鼠海马C-fos基因表达及学习记忆的影响.方法选用健康大鼠30只,每天给醋酸铅灌胃1次,高剂量组0.2 g/(kg*d),低剂量组0.1 g/(kg*d),连续染毒3个月后,用Y型迷宫试验测试大鼠学习记忆能力;后处死大鼠,用原位杂交法观察各组大鼠海马C-fos mRNA的表达状况.结果 (1)2个染铅组大鼠主被动回避反应正确次数显著低于对照组(P＜0.01);(2)光镜下观察高铅组海马切片着色很浅,C-fos mRNA阳性细胞很少;低铅组着色较浅,可见少数C-fos mRNA阳性细胞;对照组着色较深,C-fos阳性细胞密集,阳性锥体细胞呈多角形,胞体较大,胞浆染色呈不规则的环形.结论 C-fos基因表达水平下降可能是亚慢性铅染毒致大鼠学习记忆障碍的重要环节,是铅对学习记忆损害的分子机制之一.
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铅对小鼠海马c-jun表达及学习记忆功能影响
目的观察铅对小鼠学习记忆功能及海马区c-jun表达的影响.方法5～6周龄小白鼠交配后,通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6mmol/L.小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水.6周后用跳台学习试验测试小鼠学习记忆能力;后处死小鼠,用RT-PCR法观察各组小鼠海马区c-jun mRNA的表达状况.结果3个染铅组小鼠跳台学习成绩显著低于对照组(P＜0.01);3个染铅组小鼠c-jun mRNA水平均明显降低,并具有剂量效应关系.结论c-jun基因表达水平的下降可能是铅致小鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.
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声应激所致即刻早期基因表达变化研究进展
噪声可以引起听觉系统损害以及神经、心血管等其他系统的多种健康问题[1].但声应激生物学效应的分子机制有待进一步研究.
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大鼠应激时垂体c-fos和催乳素基因表达关系的研究
目的:探讨应激刺激下,垂体是否有c-fos表达及其与催乳素(PRL)基因表达的关系.方法:雌性Wistar大鼠给予禁锢应激60min,用原位杂交方法检测应激开始后15,30,60,120,180min时PRL mRNA水平.结果:基础状态下垂体前叶c-fos有弱表达,在禁锢应激开始后15～30 min迅速增加达高峰,尔后下降,在120～180 min出现第2次表达高峰,PRL mRNA水平的改变与c-fos平行.结论:垂体c-fos可能参与介导应激引起的PRL基因的激活,垂体即刻早期基因的表达有可能作为神经内分泌系统激活的标志.
