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HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验
1995年,美国Simons等和Linnen等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)的基因组,并建立了检测血清GBV-C/HGV RNA的逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)方法.但是,该检测方法的灵敏度存在着较大差异.本实验使用A~E共5套PCR引物,基中A、B、D为自行设计的HGV 5′端非编码区引物,目的产物长度分别为368bp, 158bp及220bp;C引物为参照文献设计的核心区引物,目的产物为302bp;E引物为李倬副研究员设计的NS3区引物,目的产物长度为591bp.采用改良的异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取HGV RNA,套式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR).
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庚型肝炎患者外周血单个核细胞中HGV RNA的检测及意义
为了解HGV RNA在庚型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中的存在情况及意义,我们用逆转录套式聚合酶链反应检测了51例庚型肝炎患者外周血单个核细胞中HGV RNA,现将结果报道如下.1 资料与方法1.1 病例选择:血清中HGV RNA阳性,临床诊断为病毒性肝炎的患者51例,其中急性9例,慢性42例,健康献血员5例.1.2 外周血单个核细胞分离:抽取外周静脉血3 mL,肝素抗凝,加入1.5 mL淋巴细胞分离液(上海试剂二厂生产)中,2 000 r/min离心15 min,吸取血浆与淋巴细胞分离液界面上的单个核细胞,加入3 mL PBS洗涤,1 500 r/min离心10 min,弃上清,共洗涤4次,在离心管中加入0.5 mL PBS,混悬后移入1.5 mL Eppendorf管中,1 500 r/min离心10 min,吸出上清备用.
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江苏仪征献血员HCV感染状况调查
丙型肝炎病毒(HCV)为RNA病毒,主要经血液和体液传播,易使感染者转为慢性肝炎,并可逐渐演化为肝硬化和肝癌,对人体健康危害很大.以前江苏省临床用血主要来源于职业献血员,无偿献血和义务献血仅占小部分.本文对仪征献血员HCV感染状况进行了调查,并用逆转录套式PCR法检测抗-HCV阴性的血清,考察二代ELISA法检测HCV感染的可靠性.报告如下.