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精液中炎性细胞对精子运动功能的影响
材料与方法:人精液标本6份,总活率大于50%,a级+b级精子≥38%.过氧化物酶甲苯胺蓝法证实白细胞总数小于106 ml-1.1∶2(体积比)加入孵育液,300×g离心15 min,弃上清,重复操作操作3次.调节细胞浓度至20×106个/ml.取24孔板每孔加入0.5 ml,实验组加入L-NAME,终浓度为1 mmol.L-1,37 ℃孵育.不同时间观察精子活动率的变化.孵育结束后Gresis试剂测定上清液中NO的生成.
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紫杉醇联合IFNα-2b明显增强对K652细胞的诱导凋亡作用
紫杉醇是一种作用于微管的广谱天然抗癌药,目前主要用于治疗实体瘤,能缓解多种进展期实体瘤.但用于治疗髓系白血病效果较差.我们通过实验发现紫杉醇联合INFα-2b对K652细胞的诱导凋亡及杀伤作用均明显增强.实验的主要方法为:(1)将K562细胞浓度调为2×105/ml后接种于96孔板上,每孔100μl,分为4组,空白对照组不加药物,另设一组单独加入100u/ml INFα-2b作为干扰素INFα-2b对照组,均设4个复孔,A组加入浓度分别为20、50、100μmol/L的紫杉醇100μl,B组分别加入上述浓度的紫杉醇及1000u/ml的INFα-2b 100μl,A组及B组每浓度均设4个复孔.在细胞培养箱中设37℃、5CO2%培养48h待检测.
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采用视频系统的细胞原位计数法
在体外细胞培养过程中,细胞生长曲线是反映细胞生物学特性十分重要的指标.传统细胞生长曲线的绘制方法,是通过胰酶消化后制成细胞悬液,显微镜下计数,然后计算出细胞总数[1].这种方法不能在不同时相或用药前后进行自身对照观察,因此我们在实验中采用定位微量细胞培养技术及细胞原位计数法[2],并将视频系统引入该方法中,现简介如下.1 仪器及设备选用菲利浦VR-HD 1000录像机、松下TC-2140监视器、奥林巴斯IX 70倒置显微镜、细胞培养容器(丹麦NUNC 6孔板、12孔板或培养皿)、小玻璃管(外径为6 mm,长为3.5 cm,一端为盲端)、血盖片或普通盖片、投影胶片(非复印型)等.
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质量流量测量中关于密度问题的探讨
质量流量是工业生产中的重要过程变量,在测量质量流量时,关键的问题就是如何消除介质密度变化带来的误差.温度、压力和组分的变化都会对密度产生影响,针对不同情况,探讨几种可行的检测方法,重点提出涡街流量计和孔板串联,测量组分变化大的气体质量流量的方案,并从精度、反应时间、性价比等方面对提出的几种检测方法进行了分析比较.
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标准孔板与涡街的能耗(永久压力损失)估算
详细阐述了怎样对孔板流量计和涡街流量计的永久压力损失及能耗进行估算,以便于工程上参考.并对孔板的β(d/D)及涡街的C<,d>(流体阻力系数)确定提出深入讨论的建议.
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节流装置(孔板)组件采购过程中的点滴体会
在流量检测中,有很大一部分采用孔板及其组件.相对其它仪表设备而言,制造厂是根据设计提供的技术数据和要求进行计算和加工的,可以说它是非标的标准产品.
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T型阿牛巴流量计与孔板能耗损失计算
在工业生产中流量测量广泛采用孔板和阿牛巴流量计,节能亦是其中一个考虑因素.所以节能计算方法是一个重要问题.本文就Rosemount T型阿牛巴与孔板的能耗计算做一分析,供大家参考,以掌握如何正确计算和分析能耗和经济效益.
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32P胶体持续低剂量率辐射对U87细胞的剂量生物效应
本研究尝试应用32P胶体对脑胶质瘤细胞U87进行持续低剂量率辐射,并分析其剂量生物效应.一、材料与方法1.U87细胞培养.U87细胞株由中国科学院上海细胞生物学研究所提供.应用96孔板进行细胞培养.
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二甲双胍对乳腺癌细胞株的抑制作用
本实验旨在观察二甲双胍对乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231的影响,探讨其抗肿瘤的作用及其机制.一、材料和方法1.人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231复苏,扩增.收集对数生长期的细胞,调整细胞浓度为5×105个/ml.共设4组:空白对照组、二甲双胍组、表阿霉素组、二甲双胍+表阿霉素组.每组设3孔,每孔(6孔板)加入细胞总数为5×105个,加入相应的药物及培养液.孵育48 h,计数.流式细胞仪检测.
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聚桂醇在体外对肝癌细胞的杀伤作用
聚桂醇是一种新型硬化剂,本研究旨在观察聚桂醇对肝癌细胞的杀伤作用,现报道如下.一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株HepG2;聚桂醇注射液(陕西天宇制药有限公司);四氮唑盐(Sigma-aldrich);680酶标仪( Bio-rad).2.实验方法:(1)细胞株生长杀伤实验[噻唑蓝(MTT)比色法]:取对数生长期HepG2细胞,制成细胞混悬液,接种于96孔板,每孔100μl(含3000个细胞).
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LPS刺激后细胞内静态游离钙浓度[Ca2+]i升高
目的:前文已报道,Mφ细胞RAW264.7在LPS预处理后诱导了致敏和耐受,提示LPS预处理引起细胞内参与反应的信号转导分子或效应分子发生了某种变化.已知[Ca2+]i在白细胞活化中的重要性以及静态[Ca2+]i与Mφ反应性有密切关系,因此我们推测LPS预处理可能引起了静态[Ca2+]i的变化.方法:RAW264.7细胞培养条件见;细胞在置有载玻片的6孔板中完全贴壁后,LPS10ng/mL作用18 h,取玻片,Fura-2负载,测细胞内钙.结果及讨论:8批实验结果中,有7批LPS预处理后,[Ca2+]i均明显升高如下表所示:
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人胸腺细胞与小鼠脾细胞体外共同孵育的MTT比色法测定
为了观察人胸腺细胞与小鼠脾细胞的关系,我们运用了M TT比色法进行体外测定.人胸腺取材于胸外科手术及妇产科手术,年龄在5月-6岁范围内.将胸腺块消毒、剪碎并研磨,尼龙网过滤后进行体外原代细胞培养,T细胞密度与小鼠脾细胞密度均为1x106/ml,培养基为DMEM,添加15%小牛血清、25mM hepes、4mM谷氨酰胺、10μM 2-巯基乙醇、2mM丙酮酸钠、100U/ ml青霉素及100μg/ml链霉素,37℃、5% CO2孵箱孵育1月.60μl 人卵巢癌细胞与60μl人胸腺细胞体外共同孵育作为实验组,60μl DMEM与60 μl人胸腺细胞孵育作为阴性对照.2天后,进行96孔板MTT比色法体外测定T细胞活率 .10μlMTT溶液加入每孔中,将96孔板置于孵箱中,4小时后,100μl 20% SDS加入每孔中,过夜后检测OD值.实验组的OD值(OD=0.0462,平均1 .3287±0.3538)高于阴性对照组(OD=0.045,平均0.5270±0 .0582),P<0.01,说明小鼠脾细胞能促使人T细胞增殖.
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基于自体全血凝集的三特异分子基因表达载体构建
自体红细胞凝集试验是一种针对血液中被检物的快速筛查方法.取待检者1滴血,置于凹孔板中,并向血中滴加检测试剂,5min内即可肉眼判定结果,血液凝集者为阳性样本.基于自体红细胞凝集试验原理制备的检测试剂,其主要成分是一种双/多功能分子,它既能与红细胞结合,又能与血中的被检物结合,通过双/多功能分子的桥联作用,使红细胞产生凝集.该技术具有操作简单、反应时间短、结果可目测等优点.
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重离子束辐照诱变及高通量筛选金霉素高产菌株
应用不同剂量12C+6重离子束对金霉素链霉菌出发菌株B9-34-125进行辐照诱变,并应用96和48孔板高通量筛选金霉素高产菌株.结果表明:当重离子束12C+6离子的辐照剂量为60Gy时,对金霉素链霉菌的诱变效果显著,筛选出5株优势菌株,其中Z-1452菌株摇瓶发酵效价较对照提高14.4%,60m3发酵效价较对照提高5.7%,产量提高了2.6%.
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血管内皮细胞缺氧模型的建立以及共聚焦显微镜观测缺氧状态下内皮细胞浆游离[Ca2+]i变化
许多文献都报道了内皮细胞缺氧模型的建立,并各自据此观察了内皮细胞缺氧时部分功能的变化.但通过共聚焦显微镜观测缺氧时血管内皮细胞胞浆钙离子浓度的变化报道甚少,以此变化推知细胞已受缺氧损伤者尚未见报道,本实验正是以共聚焦显微镜动态观察内皮细胞胞浆[Ca2+]i变化.1 材料与试剂人脐静脉内皮细胞6孔板有盖钢盒、石蜡、血气分析仪(COY公司),共聚焦显微镜(Bia-Rad公司)95%和5%混合气体,FLuo-3Am.