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RP-HPLC法检测发酵液中利普司他汀的效价
目的 建立奥利司他中间体利普司他汀发酵效价的检测方法.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱为Ultimate(R)ODS硅胶柱(4.6 mm ×250 mm,5mμ),流动相为乙腈-水(体积比4∶1),柱温为35℃,进样量为10μL,流速为1.1 mL·min-1,检测波长为210 nm.结果 发酵70、100和130 h时测得发酵液中利普司他汀效价分别为2.518、4.323、6.981 g·L-1.结论 该方法可有效地检测发酵液中利普司他汀效价.
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580例O型血孕妇ABO抗体效价检测回顾性分析
母儿血型不合是高危妊娠的一种,ABO血型不合所致新生儿溶血病是与血型有关的一种重要病症,被列入孕妇围产期保健.笔者对本院2008年9月-2010年9月580例O型血孕妇ABO抗体效价进行回顾性分析,现报道如下.
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高纯度卵泡刺激素效价及相关指标的检测
目的探讨检测高纯度卵泡刺激素(FSH)产品中黄体生成素(LH),卵泡刺激素(FSH)的生物活性以及异常毒性、热原的方法.方法用幼大鼠精囊和卵巢增重法对高纯度卵泡刺激素(FSH)产品进行测定,用小鼠和兔进行异常毒性,热原检测.结果 FSH含量为237.61 IU/mg,LH含量为1.05 mg,其FSH/LH的比值大于60∶1,小鼠给药48 h后存活,家兔热原总升温为0.15,总降温为0.结论本法符合英国药典98版的要求;对该制剂的异常毒性和热原同时符合相关标准.
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罕见高效价抗-HIV抗体及4℃存放观察
笔者在临床输血前常规进行艾滋病抗体检测中,遇到一例王某HIV阳性且抗体效价高达8 192的罕见阳性患者.并经河北省艾滋病防治研究中心确认实验室,用蛋白印迹法确认结果为HIV抗体阳性.随后对其进行了HIV抗体效价观察,现报告如下.
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重离子束辐照诱变及高通量筛选金霉素高产菌株
应用不同剂量12C+6重离子束对金霉素链霉菌出发菌株B9-34-125进行辐照诱变,并应用96和48孔板高通量筛选金霉素高产菌株.结果表明:当重离子束12C+6离子的辐照剂量为60Gy时,对金霉素链霉菌的诱变效果显著,筛选出5株优势菌株,其中Z-1452菌株摇瓶发酵效价较对照提高14.4％,60m3发酵效价较对照提高5.7％,产量提高了2.6％.
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五种不同血清量倍比稀释检测孕妇IgG型抗A(B)效价的比较
目的 探讨五种不同血清量倍比稀释后检测孕妇IgG型抗A(B)效价积分的差异.方法 标记试管1～5排,每排10管,第1排各加生理盐水25 μL、第2排各加50 μL、第3排各加100 μL、第4排各加200μL、第5排各加250μL.在第1～5排第1管分别加入纯化后的孕妇血清25、50、100、200、250 μL,进行倍比稀释.在第1排各加与孕妇血清抗体相应的30 mL/L红细胞悬液12.5 μL、第2排各加25 μL、第3排各加50 μL、第4排各加100 μL、第5排各加125 μL,置37℃孵育30 min;洗涤3次,各管加入多特异性抗人球蛋白试剂1滴,以3400 r/min离心15 s,观察结果.结果 五种血清量倍比稀释抗体效价平均积分分别为71、88、91、95、92分;65例孕妇IgG型抗A(B)效价的异常率分别为30.8％(20/65)、36.9％(24/65)、38.5％ (25/65)、40.0％(26/65)、40.0％(26/65).结论 25 μL血清量倍比稀释检测孕妇IgG型抗A(B)效价积分和异常率明显低于50、100、200、250 μL血清量,50 μL～250 μL血清量之间无显著性差异.
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纯化血清不同倍比稀释法检测孕妇IgG型抗A或抗B抗体效价的比较
目的 探讨纯化后的血清不同倍比稀释法检测孕妇ABO血型IgG型抗A抗体效价、抗B抗体效价的可行性.方法 采用1∶16、1∶32、1∶4倍比稀释法对同一份效价为512的IgG型抗A抗体的孕妇血清进行检测,再采用以上倍比稀释法检测200例孕妇IgG型抗A抗体效价、抗B抗体效价.结果 三种倍比稀释法对同一份效价为512的IgG型抗A抗体孕妇血清检测的凝集强度与效价积分为45、47、45分;再采用三种倍比稀释法检测200例孕妇IgG型抗A抗体效价、抗B抗体效价,异常率为35.5％、36.0％、35.0％,三种方法检测的结果无显著性差异.结论 采用更高倍比稀释纯化后血清检测孕妇血清中IgG型抗A抗体或抗B抗体效价,具有敏感性适当、缩短批量检测时间、节约试剂耗材等优点,适合对大批量血标本进行检测,具有一定实际应用价值.
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人凝血因子Ⅷ效价凝固检测法的验证及应用
目的 对凝固法检测人凝血因子Ⅷ(FⅧ)效价进行验证,并考察正常质控血浆(CPN)和人凝血因子Ⅷ国家标准品(CRM)贮存的稳定性.方法 实验采用贝克曼ACL7000全自动凝血仪及配套试剂检测人FⅧ效价,依据2003年版《药品生产验证指南》,选择准确度、线性、范围、重复性、中间精密度、耐用性6个参数进行验证；CRM和CPN复溶后分装冻存于-80℃保存,不同时间检测其复融1次后的效价.结果 实验结果表明,该法检测CRM 5个不同效价的回收率为85％ ～93％,重复性的CV均＜10％,不同试验人员检测相同样品和不同时间检测相同样品的CV均＜10％,人凝血因子ⅧCRM在0.30 ～ 1.21 IU/mL范围时r2=0.996(＞0.980)；肝素钠浓度≤0.25 U/mL时无干扰.CRM复溶后分装并冻存1次的效价损失至少20％,随着冻存时间延长损失更多；冻融1次的CPN 2个月内效价基本没有损失.结论 用全自动凝血仪凝固法检测人凝血因子Ⅷ方法有效；CRM复溶后冻存效价有所下降,需重新标定后再用,冻融1次的CPN效价至少2个月内保持稳定.
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联合酶联免疫的微量病毒中和法检测大流行流感疫苗血清中和抗体的可行性研究
目的:建立联合酶联免疫的微量病毒中和法(ELISA-MVN法),用于大流行流感疫苗流感病毒中和抗体效价的检测,并进行方法学验证.方法:采用4种羊抗流感病毒血清参考品,与人感染禽流感H5N1病毒疫苗株(A/Vietnam/1194/2004-NIBRG-14)病毒液,分别于37℃孵育18 h后,固定细胞,ELISA检测细胞内流感病毒核蛋白表达,确定其中和抗体效价,考察该方法的特异性;通过对高中低不同抗体滴度的血清样本的多次平行检测来评价该方法的重复性;通过ELISA-MVN法和血凝抑制试验(HI试验)分别检测大流行流感疫苗接种者血清样本,比较2种方法的灵敏性和相关性.结果:ELISA-MVN结果显示羊抗H5N1的血清中和抗体检测滴度为5 120,其他3种血清的中和抗体滴度小于10,该方法特异性良好;采用ELISA-MVN法对3种不同滴度的血清进行重复检测,组内重复性试验的6次平行试验结果的RSD为3.5％.组间重复性5次结果,RSD为4.8％～8.6％.2种方法测定疫苗接种者血清样本抗体效价的结果具有显著相关性(P＜0.001),相关系数r=0.932.ELISA-MVN法检测结果的几何平均滴度高于HI试验检测结果,该方法较HI试验在检测大流行流感疫苗血清样本灵敏度高.结论:ELISA-MVN可满足大流行流感疫苗血清学检测的要求,并可用于评价大流行流感疫苗的免疫效果.
