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零值混合血清和生理盐水对PSA高浓度稀释的影响
近年来,老龄男性前列腺癌肿发病率升高.临床对PSA>150ng/mL的高浓度样品,需要作稀释后再复检以便提高诊断的可靠性.本文探讨用生理盐水及女性PSA零值混合血清作稀释介质,分别对同一高值PSA样品倍比稀释测定并作回收率试验及胶体稳定试验.现报道如下.
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ELISA法检测HBsAb产生钩状效应2例临床分析
ELISA检测抗原抗体因其成本低、灵敏度高、特异性强等优点被实验室广泛应用。由于目前多采用一步法检测，当血清中抗原抗体浓度过高时可能会产生钩状效应（HOOK效应），而引起假阴性[1-14]。在采用一步法检测时，钩状效应很难被发现。对此效应的报道主要集中在HBsAg的检测。本课题组在临床工作中遇到两例体检者，应用ELISA一步法检测结果均提示HBsAb阴性，但被检测对象均对结果表示异议，自述3个月前曾检测HBsAb为弱阳性，并于当时分别注射过10μg乙肝疫苗。后经倍比稀释[15]用ELISA一步法检测，确认其HBsAb为阳性，现报告如下。
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全自动加样器阳性拖带现象的分析
目的：通过倍比稀释，确定区别anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)的临界滴度范围。方法用HAMILTON Microlab AT Plus 2全自动加样器对经倍比稀释的anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)加样，进行ELISA检测，通过对引起阳性拖带现象的强阳性标本临界滴度和不引起阳性拖带的普通阳性标本临界滴度的比较，找到能区别两者的临界滴度范围。结果区别anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)的临界滴度范围为1：2048~1：4096。结论能够区别anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)的临界滴度是存在的，并可通过将疑似阳性拖带的标本按照临界滴度倍比稀释后所得结果来快速判断是否是阳性拖带，这在血液检测工作中具有一定的实际意义。
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N-1-萘基乙二胺比色法测定高浓度亚硝酸盐的显色结果分析
在测定亚硝酸盐的实验中,有时会碰到一些样品在加入N-1-萘基乙二胺溶液后,显色与标准系列颜色有明显差别,721分光光度计比色,也明显低于标准系列,而重新取样进行倍比稀释后测定,亚硝酸盐含量却远远超标.这样,就存在高浓度亚硝酸盐对显色结果影响的问题.以下实验就是测定不同浓度亚硝酸盐对显色结果的影响.材料与方法 (1)试剂:100.0mg/ml亚硝酸钠标准溶液;20.0mg/ml亚硝酸钠标准溶液;1.0mg/ml亚硝酸钠标准溶液;0.005mg/ml亚硝酸钠标准溶液;其余试剂按GB/T5009.33-1996.3配制.(2)检验方法:<食品卫生标准使用手册理化检验方法>GB/T5009.33-1996.格里斯试剂比色法.(3)仪器:721分光光度计、小型粉碎机、25ml具塞比色管.
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贝氏柯克斯体在鸡胚中生长繁殖的研究
研究贝氏柯克斯体在鸡胚中的生长繁殖特征,以便获得大量的贝氏柯克斯体全细胞抗原.将5个贝氏柯克斯体感染鸡胚卵黄膜用5ml无菌肉汤研磨,取一定量的菌液倍比稀释成四个浓度,分别接种四组7日令鸡胚(每组12个),0.3ml/枚,35℃孵育培养,找出佳接种剂量进行大量鸡胚接种,繁殖贝氏柯克斯体.①1:160浓度接种后,大多数鸡胚集中在第8天死亡外,其它各组大部分鸡胚死亡在接种后的3-5天;鸡胚卵黄膜涂片染色后显微镜下检查,发现第7、8天死亡的鸡胚中贝氏柯克斯体的量明显高于接种后3～5天中死亡的鸡胚.②选择1:160菌液浓度,0.3ml/枚的量,分别接种90枚、194枚、142枚、149枚鸡胚,绝大部分鸡胚在接种后7～10天内死亡,用它们的卵黄囊膜涂片,染色镜检均发现大量的贝氏柯克斯体.从感染贝氏柯克斯体后第8天左右死亡的鸡胚中可获得佳的贝氏柯克斯体繁殖量.
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河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌作用研究
采用琼脂平板扩散法,以一株金黄色葡萄球菌青霉素耐药株为实验菌种,将实验分为8个不同pH环境组(蜂胶浓度31%),以及在pH6.5下设置10个不同浓度组即将31%蜂胶溶液倍比稀释至0.0621%(1/512)及空白组(0%),每组3次重复,每张滤纸片(直径6mm)滴加蜂胶溶液7μl,记录蜂胶对金葡菌耐药株24小时的抑菌效果.以探讨河南蜂胶对金黄色葡萄球菌青霉素耐药株的抑制作用.
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乙肝表面抗原胶体金法与ELISA法灵敏度探讨
乙肝病毒（HBV）是乙型肝炎的病原体，其感染呈世界流行，据WTO报道,全球约有20亿人曾感染过HBV我国是属高流行区，一般人群乙肝表面抗原（HBsAg）阳性率为9.09%［1］,各地血站为减少血液报废，一般采取HBsAg胶体金法初筛合格后采集血液，相对ELISA法，胶体金法灵敏度低，仅为1ng/ml（相当于2 IU/ml）, ELISA法检测灵敏度为0.5 ng/ml，当检测含量在0.5 ng/ml-1ng/ml之间的低滴度携带献血者，胶体金法不能检测［2］。随着胶体金和ELISA试剂的改进其灵敏度不断地提高，为了解目前胶体金和ELISA试剂敏感性的差异，笔者用乙肝表面抗原阳性混合样本倍比稀释，用胶体金法和ELISA法分别进行检测并与标准质控品进行比对，其结果报告如下。
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HIV抗体弱阳性质控血清的制备及应用评价
目的 掌握抗HIV弱阳性外部对照质控血清的制备方法,有效运用到试验过程中.方法 用HIV抗体阴性血清成倍比稀释强阳性血清,采用酶联免疫吸附检验(ELISA)来检测各稀释度OD值,并计算SCO值来确定某一稀释度为配置稀释度(即临界值2-3倍).结果 采用倍比稀释法,可获得所需外部质控所用血清浓度,并且连续检测20次,绘制出室内质控图.结论 制备适合自己试验室的弱阳性的外部质控血清方法简单,使用起来方便,也易于保存,适用于HIV初筛实验室日常检测的室内质量控制工作.
关键词： 弱阳性外部对照质控血清 制备 ELISA 倍比稀释 -
有效分离甲型流感病毒方法的探讨
目的 有效分离甲型流感病毒,提高病毒分离率.方法 选择在2012年10月-2014月5月期间,经实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测为甲型流感病毒阳性的咽拭样品,并采用MDCK细胞进行病毒分离;对血凝素(HA)滴度＜8的一代培养物分别进行原倍、2倍、5倍、10倍稀释后进行传代培养,比较不同稀释度传代培养物血凝实验效果.结果 2倍稀释培养物传代培养后,血凝实验效果分别与其他3种进行比较,差异有统计学意义.结论 甲型流感病毒分离中,对培养物进行2倍稀释后病毒分离效果好.
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改良常规SP免疫组化染色法的探讨
目的 探讨在固定液和抗体的稀释方法上做一些改进后对免疫组化染色结果的影响.方法:取成年雌性SD大鼠异位的子宫内膜,分别固定于4℃的丙酮、常温丙酮和10％甲醛固定液中,做常规石蜡包埋,切片,将3种固定液的切片分为两组,“一抗”分别采用倍比稀释、直接稀释的方法,做SP免疫组化染色实验比对.结果:4℃的丙酮作固定液与常温丙酮和10％甲醛处理的石蜡切片(经抗原修复)相比,抗原定位明确、阳性细胞表达率高,阳性细胞分布更均匀；抗体的倍比稀释常规直接稀释与对照,背景干净清晰.结论:用4℃的丙酮作固定液,“一抗”用倍比稀释的方法进行免疫组化染色,使得抗原定位明确、阳性反应与阴性背景对比清楚.
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区域化多实验室倍比稀释室间比对结果分析
目的 探讨倍比稀释室间比对活动对区域化多实验室检测结果一体化进行监控的有效性.方法 以人类免疫缺陷病毒抗体(anti-HIV)、丙型肝炎病毒抗体(anti-HCV)、梅毒特异性抗体(anti-TP)酶联免疫吸附试验(ELISA)为试验对象,将倍比稀释法应用于济南区域化多实验室免疫学室间比对活动之中,对获得的数据进行汇总、分析.结果 除个别实验室个别检测项目检测结果出现问题,参与比对活动的济南、济宁、日照、潍坊、泰安等5个实验室几乎所有检测项目总阳性率和基础试验结果比较差异无统计学意义(P＞0.05),重复检测结果在基础试验梯度区间内或与基础试验梯度区间一致,比对取得满意结果.结论 传染病血清学倍比稀释室间比对活动可以发挥对区域化多实验室检测结果一体化进行有效监控的作用.
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五种不同血清量倍比稀释检测孕妇IgG型抗A(B)效价的比较
目的 探讨五种不同血清量倍比稀释后检测孕妇IgG型抗A(B)效价积分的差异.方法 标记试管1～5排,每排10管,第1排各加生理盐水25 μL、第2排各加50 μL、第3排各加100 μL、第4排各加200μL、第5排各加250μL.在第1～5排第1管分别加入纯化后的孕妇血清25、50、100、200、250 μL,进行倍比稀释.在第1排各加与孕妇血清抗体相应的30 mL/L红细胞悬液12.5 μL、第2排各加25 μL、第3排各加50 μL、第4排各加100 μL、第5排各加125 μL,置37℃孵育30 min;洗涤3次,各管加入多特异性抗人球蛋白试剂1滴,以3400 r/min离心15 s,观察结果.结果 五种血清量倍比稀释抗体效价平均积分分别为71、88、91、95、92分;65例孕妇IgG型抗A(B)效价的异常率分别为30.8％(20/65)、36.9％(24/65)、38.5％ (25/65)、40.0％(26/65)、40.0％(26/65).结论 25 μL血清量倍比稀释检测孕妇IgG型抗A(B)效价积分和异常率明显低于50、100、200、250 μL血清量,50 μL～250 μL血清量之间无显著性差异.
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ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存
目的 制备ELISA法检测HIV抗体室内质控血清并探讨其保存方式.方法 对HIV抗体阳性混合血清进行倍比稀释,选S/CO值2～3之间的稀释度制备室内质控,分装后分别保存于4℃和-20℃冰箱中备用.结果 两种保存方式的质控血清连续测定3mo并绘制质控图,-20℃冻存质控品结果稳定,4℃保存质控品,第一月稳定,第二、三月出现明显失控.结论 自制HIV抗体弱阳性血清作为室内质控是可行的.
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自动化工作站与Chelex-100法对血样本检验效果比较
目的 比较自动化工作站与Chelex-100法对不同浓度血液样本的检验效果.方法 取新鲜血液,按倍量稀释法制成2～1 024倍10种不同浓度的血样本,分别采用自动化工作站和Chelex-100法提取模板DNA,应用IdentifilerPlus试剂盒进行扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较.结果 稀释2～32倍的血样本,采用两种方法的检验成功率均可达到100％;稀释64倍的样本,Chelex-100法成功率为41.3％、完整分型数为78.3％,自动化工作站成功率为13.0％、完整分型数为43.5％,两者比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);稀释128倍的样本,成功率在Chelex-100法(8.7％)和自动化工作站(2.4％)之间比较,其差异无统计学意义(P＞0.05);稀释256倍以上,两种方法均无法获得分型结果.结论 自动化工作站适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法的效果可能更优.
关键词： 法医物证学 血样 倍比稀释 自动化工作站 Chelex-100
