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全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖、迁移、侵袭的影响及其机制
目的 探讨不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及肝癌细胞间质标志蛋白和miR200家族的表达情况.方法 以Hepa1-6小鼠肝癌细胞为研究对象,给予0、0.1、1.0和10.0μmol/L终浓度的ATRA处理,结晶紫染色检测细胞增殖,锥虫蓝拒染实验计数活细胞.Hoechst检测细胞凋亡,划痕实验检测迁徙能力,Transwell实验检测侵袭能力,荧光定量PCR(real-time PCR)法检测间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin和0和10 μmol/L ATRA处理后的miR200家族的mRNA表达.结果 ATRA处理后Hepa1-6细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显下降(P＜0.05),凋亡率增高(P＜0.05),间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin的表达明显下调(P＜0.05),ATRA的浓度越高,这些作用越明显.10μmol/L ATRA处理后miRNA200a-3p,200c-3p,141-3p显著上调.结论 ATRA呈浓度依赖性促进肿瘤细胞Hepa1-6凋亡,抑制其增殖、迁移及侵袭能力,这可能与ATRA上调microRNA200家族,抑制细胞的间质表型有关.
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H-ras12V促进肝肿瘤细胞脂肪变性机制探讨
目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c(transcription factor sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)在Ras癌基因诱导小鼠肝肿瘤细胞脂肪变性中的作用机制.方法 采集9个月龄C57BL/6J小鼠(12只)正常肝组织(Wt)和H-ras12V转基因小鼠(12只)的肝肿瘤组织(T)及其周围组织(P),并用病理学方法进行确诊检测.酶偶联比色法检测组织样本中的甘油三酯含量,蛋白质印迹法检测磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylation ofphosphatidylinositol-3 kinase,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(phosphorylation of protein kinase B,p-AKT)及SREBP-1c的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c靶基因乙酰辅酶A羧化酶a(acetyl-CoA carboxylase a,ACACa)、乙酰辅酶A羧化酶b(acetyl-CoA carboxylase b,ACACb)、硬脂酰辅酶A脱氢酶(stearoyl CoA desaturase1,SCD1)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASn)基因的mRNA表达水平.结果 正常肝组织和周围组织未发生组织病理学变化,肝肿瘤组织与周围组织边界清楚,肝肿瘤组织中的肿瘤细胞分化良好并伴有大泡性脂肪变性.与病理结果相一致,与正常肝组织(1±0.29)及转基因小鼠肝肿瘤周围组织(0.78±0.18)相比较,转基因小鼠肝肿瘤组织中的甘油三酯含量(2.14±0.15)显著增高,P值均＜0.001,差异有统计学意义.转基因小鼠肿瘤周围组织与正常肝组织中的甘油三酯含量差异无统计学意义,P=0.092.蛋白质印迹法检测结果表明,与正常肝组织相比,p-PI3K在P和T中呈逐步升高趋势,且差异有统计学意义,P＜0.05;与正常肝组织相比,p AKT和AKT在周围组织和肝肿瘤组织中呈升高趋势,但仅肝肿瘤组织中的p-AKT差异有统计学意义,P=0.028;与正常肝组织及周围组织相比,肝肿瘤组织中的SREBP-1c前体蛋白及成熟体蛋白的表达水平均显著升高,P值均＜0.001.实时荧光定量PCR检测结果显示,ACACb和SCD1在正常肝组织、周围组织及肝肿瘤组织中的表达呈逐步升高趋势,差异有统计学意义,P＜0.05;与正常肝组织及周围组织相比,肝肿瘤组织中ACACa和FASn的mRNA表达水平显著升高,P＜0.01,但它们在正常肝组织与周围组织中的表达差异无统计学意义.结论 肝肿瘤Ras癌基因可能通过活化PI3K/AKT信号通路激活转录因子SREBP-1c,进而促进与脂质合成代谢相关靶基因的表达,增加肝肿瘤细胞的脂质沉积,诱导脂肪变性.
关键词： H-ras12V 固醇调节元件结合蛋白 肝肿瘤细胞 脂肪变性 -
自旋探针α-苯基-N-4-丁基硝酮纳米粒的制备及其对肝肿瘤细胞的亲和性研究
采用薄膜分散-超声法制备、优化自旋捕捉剂α-苯基-N-4-丁基硝酮(N-tert-butyl-α-phenylnitrone,PBN)脂质体,并研究其相关性质.以人肝肿瘤细胞SMMC-7721为实验对象,采用反相高效液相法(RP-HPLC)测定细胞内PBN的浓度,以此评价PBN脂质体对细胞的亲和性;考察了PBN脂质体对细胞生长的影响.结果显示,采用正交设计优化得到PBN脂质体的平均粒径137.5 nm,包封率71.52%,多分散系数0.286.PBN脂质体可稳定进入癌细胞内,同游离的PBN相比,PBN脂质体对肝肿瘤细胞更具亲和性,转染后癌细胞坏死率更高.表明自旋捕捉剂脂质体对肝肿瘤细胞具有较好的亲和性并能明显抑制其生长.为研究肿瘤自旋靶向性干预提供了实验依据.
关键词： 肝肿瘤细胞 自由基 脂质体 α-苯基-N-4-丁基硝酮 -
杨梅素抗肝肿瘤细胞HepG2作用及其机制的研究
目的 探讨杨梅素对肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡作用及其作用机制.方法 应用甲基噻唑蓝(MTT)比色法,测定杨梅素对HepG2细胞株活性的影响,检测其抑制HepG2细胞株的时间效应和剂量效应;应用形态学观察、HE染色和Annexin V-PI流式检测,测定杨梅素对HepG2细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析,后对杨梅素对细胞凋亡相关的蛋白p34cdc-2、Cyclin B1、Bcl-2和PARP的影响进行了研究.结果 杨梅素对HepG2细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用,且呈时间依赖和剂量依赖性,表现为:细胞G2/M期阻滞,出现明显的凋亡峰;Bliss法测定杨梅素对HepG2细胞的IC50值为(32.18±2.31)μmol/L,30、50 μmol/L杨梅素对G2/M期细胞比率分别为(41.32±0.90)%和(80.07±0.90)%,差异有统计学意义(P < 0.05);p34cdc-2蛋白的表达量未见变化,而CyclinB1蛋白的表达量明显上升,Bcl-2蛋白的表达量锐减,并诱导半胱氨酸蛋白酶Caspase-3的底物PARP蛋白(113 kD)水解为89 kD的特异性水解产物.结论 杨梅素通过激活Caspase家族蛋白实现对肝癌细胞HepG2细胞株的增殖抑制及诱导凋亡作用.
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肝肿瘤细胞LO2中谷胱甘肽及相关酶调控的研究
肝病在我国及亚洲地区是高发病,爆发性肝衰的死亡率往往超过90%.人工肝支持系统的引人为肝衰病人带来希望.而提高生物活性反应器内肝细胞的数量与功能是进一步发展生物人工肝面临的主要任务之一.
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黄芪对肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响
目的:评估黄芪对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响,探讨黄芪对血红素加氧酶调节作用的可能机制.方法:黄芪注射液作用于Bel/Fu肝癌化疗耐药细胞株,分别应用MTT、免疫细胞化学、流式细胞术、RT-PCR检测细胞株对化疗药物敏感性、P-糖蛋白表达量、P-糖蛋白功能、血红素加氧酶(HO-1)核酸水平表达量.结果:黄芪注射液作用于Bel/Fu细胞诱导24 h后,化疗药物半数抑制浓度显著降低;P-糖蛋白阳性表达明显减少,黄芪组罗丹明荧光曲线明显右移,细胞化疗药物外排功能降低;HO-1 mRNA表达显著减少.结论:黄芪注射液可增强肝癌耐药细胞株Bel/Fu的化疗敏感性,下调P-糖蛋白表达,降低P-糖蛋白药物外排功能,实现这种作用的同时伴随有HO-1 mRNA表达的减少.
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纳米材料碘油混悬液栓塞对肝肿瘤金属蛋白酶表达的影响
羟基磷灰石纳米粒子对肝肿瘤细胞有促凋亡作用,与碘油混合栓塞治疗肝肿瘤可提高其靶向性,抑制肿瘤生长[1,2].基质金属蛋白酶(MMP)-2可降解细胞外基质的纤维骨架结构,在肿瘤转移和浸润中发挥重要作用.本实验应用羟基磷灰石纳米粒子超液化碘油混悬液栓塞治疗兔VX2肝肿瘤,观察肿瘤组织中MMP-2表达,探讨纳米材料栓塞后肝肿瘤转移的可能趋势.
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鹅脱氧胆酸衍生物诱导肝肿瘤细胞株凋亡的实验研究
近来研究表明,鹅脱氧胆酸衍生物3,7-二羟基-24-氧代胆甾烷-β-丙氨酸苄酯(HS-1200)能诱导多种癌细胞凋亡并能抑制其增殖,如乳腺癌、前列腺癌及骨肉瘤[1]等.本研究旨在探讨HS-1200对肝肿瘤细胞的影响.
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肿瘤细胞对不同分化阶段树突状细胞脂含量和蛋白质二级结构的影响
目的:利用傅里叶变换红外光谱(Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR)技术探讨肿瘤细胞共培养对不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的脂含量和蛋白质二级结构的影响,为深入理解肿瘤的免疫逃逸机制寻找线索.方法:免疫磁珠法分离人CD14+单核细胞,以经典方法将其诱导为未成熟DCs(immature DCs,imDCs)和成熟DCs(mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与肝癌细胞株BEL7402、红白血病细胞株K562以及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养48 h,正常培养的DCs作为对照.采用FT-IR技术研究不同肿瘤细胞对不同分化阶段DCs的脂含量和蛋白质二级结构的影响.结果:与正常培养的DCs相比,与肿瘤细胞BEL7402和K562共培养后imDCs和mDCs的膜磷脂成分减少(2.718±0.296,3.124±0.361 vs 4.855±0.324,P＜0.05;2.964±0.136,3.522±0.173 vs 4.217±0.206,P＜0.05),而总的脂含量增加(3.768±0.185,3.591±0.197 vs 2.487±0.212,P＜0.05;4.288±0.156,4.155±0.167 vs 3.233±0.206,P＜0.05);蛋白质α-螺旋含量减少(1.863±0.192,1.754±0.169 vs 2.364±0.188,P＜0.05;1.124±0.133,1.016±0.107 vs 1.392±0.113,P＜0.05),β-折叠(3.397±0.225,3.433±0.236 vs 2.486±0.198,P＜0.05;2.646±0.209,2.591±0.216 vs 1.558±0.159,P＜0.05)阳转角含量(4.366±0.284,4.322±0.266 vs 3.127±0.272,P＜0.05;2.675±0.221,2.627±0.235 vs 1.773±0.181,P＜0.05)增加;并且mDCs比imDCs更容易受到肿瘤来源因素的影响.结论:与肿瘤细胞共培养能够导致mDCs和imDCs的脂含量和蛋白质二级结构发生改变,可能是肿瘤导致DCs功能损伤的结构基础.
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磷酸化组蛋白预测肝癌细胞对某些化疗药物的敏感性
目的:探讨以磷酸化组蛋白(phosphorylated H2AX,γH2AX)为检测指标预测肝癌细胞HepG2.215对依托泊苷、多柔比星、丝裂霉素和顺铂等化疗药物敏感性的可行性和可靠性.方法:分别以质量浓度指数梯度为1、2、4、20的依托泊苷、多柔比星、丝裂霉素和顺铂等4种化疗药物作用于肝癌细胞HepG2.215,以无药物作用的肝癌细胞为对照组,采用流式细胞术(FCM)检测肝癌细胞中γH2AX阳性表达细胞的百分数,采用免疫细胞化学法检测肝癌细胞内形成的γH2AX灶点数,采用MTT比色法检测化疗药物作用对肝癌细胞增殖的抑制率.分析4种药物作用下肝癌细胞中γH2AX灶点数与γH2AX阳性细胞百分数的相关性;分析各药物不同的质量浓度与肝癌细胞中γH2AX阳性细胞百分数γH2AX灶点数,以及肝癌细胞增殖抑制率的相关性;分析在各药物作用下,肝癌细胞中γH2AX阳性百分数和γH2AX灶点数分别与细胞增殖抑制率的相关性.结果:4种药物作用下肝癌细胞中,γH2AX灶点数与γH2AX阳性细胞百分数呈正相关(均P＜0.05);各药物不同质量浓度分别与肝癌细胞中γH2AX阳性细胞百分数、γH2AX灶点数,以及肝癌细胞增殖抑制率呈正相关(均P＜0.01);在各药物作用下,肝癌细胞中γH2AX阳性百分数和γH2AX灶点数分别与细胞增殖抑制率呈正相关(均P＜0.05).结论:在上述4种化疗药物对肝癌细胞HepG2.215的作用中,γH2AX在细胞水平预测肝癌细胞对药物的敏感性有较高的可行性和可靠性.
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MTT法检测肝癌细胞化疗敏感性方法学探讨
目的探讨MTT法检测肿瘤细胞化疗敏感性的影响因素.方法选用肝癌细胞株SMMC7721和BEL7402,采用正交实验设计,分析MTT法检测肿瘤细胞化疗敏感性的条件因素对药敏检测结果的影响.结果肝癌细胞数与生成的甲月赞(formasan)的光密度(OD)值呈线性正相关.肝癌细胞数,药物浓度,药物作用时间是影响MTT法检测肿瘤抑制率的重要因素.正交设计应用于MTT法检测肿瘤细胞化疗敏感性,与平行设计的检测结果相关一致.结论 MTT法检测肿瘤细胞化疗敏感性,具有简易、快速、重复性较好等优点,但检测条件(肿瘤细胞数,药物浓度,药物作用时间)可能会严重影响肿瘤抑制率检测结果和药敏判断.
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不同表面性质纳米脂质体对肝肿瘤细胞摄取的影响
以紫杉醇为模型药物,选用不同的脂质材料制备不同电性和粒径的紫杉醇脂质体,考察其体外药物释放特性.通过细胞摄取实验研究不同表面性质脂质体在肝肿瘤细胞系中的摄取.制剂的体外释药实验显示,48 h累积释放量均不超过30％,具有缓释特征.采用MTT法考察了制剂的细胞毒性,发现紫杉醇质量浓度低于50 μg/mL时,细胞48 h存活率不低于80％.比较了两种肿瘤细胞摄取能力的差异,并测定了肝肿瘤细胞BEL-7402细胞和HepG2细胞48 h内对药物的摄取.结果表明,随着制剂粒径的减小和表面Zeta电位的增大,细胞摄取药物增加.
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Hemin对Bel/Fu肝癌耐药细胞株HO-1、GST-π及化疗敏感性的影向
目的 评估氯化高铁血红素(Hemin)对肝癌耐药细胞株血红素加氧酶-1(Hene Oxygenase,HO-1)、谷胱甘肽-S-转移酶GST-π(Glutathione S-transferase,GST-π)的影响,探讨Hemin作用对GST-π调节化疗敏感性的可能机制.方法 不同浓度的Hemin作用于Bel/Fu肝癌化疗耐药细胞株,分别应用MTT、RT-PCR检测细胞株对化疗药物敏感性、HO-1与GST-π核酸水平表达量.结果 Hemin作用于Bel/Fu细胞诱导24小时后,化疗药物半数抑制浓度明显增加,HO-lmRNA表达明显增加(F=71.513,其中2umol/L组P=0.029,余均＜0.01),GST-πmRNA的表达量也显著增加(各P值均＜0.01),均呈剂量依赖趋势.结论 氯化高铁血红素Hemin在诱导HO-1表达的同时,通过影响GST-π的表达,使肝癌耐药细胞株的化疗敏感性降低;HO-1可作为逆转肿瘤多药耐药的潜在作用靶点.
关键词： 肝肿瘤细胞 谷胱甘肽-S-转移酶 血红素加氧酶-1 化疗耐药性 -
银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及其机制研究
目的 探讨银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用及其分子机理.方法 采用TUNEL法检测银杏叶总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响,提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究银杏叶总黄酮对Bcl-2基因表达的影响.结果 银杏叶总黄酮使人HepG2细胞凋亡指数增加(P<0.01),且呈剂量依赖效应;Bc1-2基因mRNA水平随银杏叶总黄酮浓度升高而降低.结论 银杏叶总黄酮可促进人HepG2细胞的凋亡过程,并使Bcl-2基因mRNA水平降低,从而起到抗肿瘤的治疗作用.
关键词： 银杏叶总黄酮 肝肿瘤细胞 细胞凋亡 Bcl-2基因mRNA -
壳聚糖纳米载体介导的端粒酶反义核苷酸对肝肿瘤细胞的抑制作用
目的 探讨纳米载体对端粒酶反义寡核苷酸抑制肝脏肿瘤细胞生长的影响.方法 制备壳聚糖纳米栽体.并装载端粒酶反义寡核苷酸,用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义核苷酸寡对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用.结果 壳聚糖纳米载体能显著增强端粒酶反义寡核苷酸对端粒酶活性和肿瘤细胞生长的抑制作用.结论 壳聚糖纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体.
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PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响
目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用.方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制;过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数.结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高,分别为18%和24%;脂质体的转染效率为42%,纳米粒的转染效率高,达61%;以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞,其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降(P＜0.05),两种载体之间的差异也非常显著(P＜0.05);处理72 h后,纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组,分别为23.1%和16.4%.结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体.
关键词： 纳米载体 端粒酶hTERT反义核酸 转染率 肝肿瘤细胞
