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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p21、cyclin D1及CDK4表达的影响
目的 观察重组人内抑素(rhEndostatin)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织p21,细胞周期素D1(cyclin D1)及细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)基因表达的影响,探讨rhEndostatin抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的分子机制. 方法 雄性SD大鼠36只,随机分为正常组(n=12)、AA模型组(n=12)和rhEndostatin(2.5mg/kg)治疗组(n=12).制备AA大鼠模型,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法,定量分析rhEndostatin对AA大鼠滑膜组织p21、cyclin D1、CDK4 mRNA及cyclin D1蛋白表达的影响. 结果 rhEndostatin治疗组大鼠滑膜组织p21、cyclin D1 mRNA和cyclin D1蛋白表达水平降低,CDK4 mRNA表达水平增加,与AA模型组比较,差异均有统计学意义(P< 0.01). 结论 rhEndostatin降低AA大鼠滑膜组织 cyclin D1表达水平可能是其抑制AA FLS增殖的分子机制之一.
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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞内钙离子稳态的影响
目的 观察重组人内抑素(rhEndestatin)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(AA FLSs)内钙离子(Ca2+)稳态的影响,探讨rhEndomafin促进AA FLSs凋亡的离子机制,为RA药物治疗及寻找其治疗新靶点提供实验依据.方法雄性SD大鼠12只,体质量140～160 g,分为正常组(n=3)和从模型组(n=9).模型组大鼠制备从模型,体外培养AA FLSs,应用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM孵育培养的细胞,激光扫描共焦显微镜检测有、无细胞外Ca2+,而rhEndestatin作用所致AA FLSs胞内Ca2+荧光强度发生动态变化,可以判断rhEndostatin对AA FLSs胞内Ca2+浓度([Ca2+]I)的影响.结果在胞外有Ca2+的情况下,rhEndostatin可引起静态AA FLS[Ca2+];快速增加,rhEndostatin作用10s后,[Ca2+];急剧增加达峰值,继之随时间缓慢下降,停止加药50 s后,[Ca2+]I尚未回复到加药前基础水平;而在无细胞外钙环境中,rhEndostatin未引起AA FLSs[Ca2+]I变化.结论 rhEndestafin可促进AA FLSs胞外Ca2+内流,引起胞内Ca2+超载,从而促进从FLSs凋亡.
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重组人内抑素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及增殖的影响
目的 观察重组人内抑素( rhEndostatin)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)增殖的影响.方法 体外培养及鉴定人KFs；应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别检测不同浓度rhEndostatin (6.25 × 10-6、1.25×104、2.50×10-5、5.00×10-5、1.00×10-4mg/L)作用24h、48h、72h后对KFs增殖的影响,并同时观察其形态变化. 结果 组织块接种7～8d后,其周边可见少许梭形细胞,继之细胞逐渐增多并以组织块为中心呈放射状生长；传2代培养的细胞单层排列,形态均一,呈长梭状,折光性好.细胞波形蛋白免疫化学染色显示胞质均呈棕黄色.rhEndostatin(6.25×10-6mg/L浓度组除外)能明显抑制KFs的增殖(P＜0.05),抑制效应与rhEndostatin浓度和作用时间呈一定的依赖关系；其中,5.00×10-5mg/L和1.00 × 10-4mg/L组rhEndostatin作用48 h后,细胞生长缓慢,体积变小,数目减少,排列紊乱. 结论 重组人内抑素对人KFs增殖具有抑制作用.
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内抑素在肿瘤生长和动脉粥样硬化斑块形成中的作用
内抑素是新发现的很强的血管生成抑制剂.它是ⅩⅧ胶原的C末端片断,包含184个氨基酸.内抑素能够特异地抑制内皮细胞增殖和迁移并抑制新生血管生成.内抑素能够有效地抑制肿瘤的生长和转移,为肿瘤的治疗提供了新的希望.内抑素还能够延缓动脉粥样硬化的发展.
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内抑素的研究进展
新生血管的生成是实体瘤生长和转移所必需的,肿瘤能够分泌一系列的促血管生成因子,如成纤维细胞生长因子(aFGF和bFGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)以刺激血管的生成.而有的研究表明恶性肿瘤也能产生抑制血管生成因子而抑制其转移灶的生长.内抑素(endostatin)正是基于这种假设从小鼠内皮瘤细胞株的培养液中分离出来的.内抑素是一种内皮细胞增殖的特异性抑制剂,具有很强的抑制血管生成的作用.因而内抑素能够抑制肿瘤的生长和转移,另有研究表明内抑素能够阻断动脉粥样硬化的发展.
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安徽克隆出实体瘤克星
据健康报 (记者冯立中)一种能切断癌组织的,"后勤补给线"让癌细胞"饿死"的抗肿瘤药物-内抑素(Endostatin)的研究在我国获得重大突破.安徽桑尼生物技术研究所的科研人员成功地克隆出人内抑素,并使之在大肠杆菌中得到了高效表达科研人员又独创性地解决了这种蛋白的水溶性和稳定性这一世界难题,为工业化生产创造了条件.在安徽省科委近日主持的鉴定会上,与会专家对这一成果给予了高度评价.
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血管内皮生长因子和内抑素在大鼠糖尿病肾病发病中的作用
目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)作为促血管生长因子和内抑素(ENS)作为血管生成抑制因子,在糖尿病肾病(DN)血管生成中的作用.方法 以正常大鼠为对照,30只雄性Wistar大鼠建成糖尿病模型,分别于糖尿病模型建立2、4、8周观察24小时尿白蛋白排泄率(UAER),用免疫组织化学染色显示大鼠肾组织VEGF和ENS的表达及半定量分析;用酶联免疫法测定血中VEGF和ENS的浓度,根据DN病理学改变确定DN的血管增生严重性,分析内皮细胞增生、肾小球中弥漫或结节病变及肾小球硬化与VEGF和ENS的关系;采用RT-PCR的方法观察大鼠肾脏VEGF和ENS mRNA的表达.结果 DN大鼠肾组织VEGF和ENS的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.05);DN大鼠血清VEGF和ENS水平也明显高于对照组(P＜0.05).DN大鼠UAER与血浆VEGF和ENS相关(r=0.468,P＜0.01;r=0.395,P＜0.05),DN大鼠无论在血中还是肾组织免疫组化和RT-PCR都有VEGF和ENS的表达,VEGF的表达与DN血管增生程度密切相关(r=0.404～0.476,P＜0.01～0.05),ENS的表达也与DN严重程度密切相关(r=0.409～0.617,P＜0.05～0.01),血浆VEGF和ENS二者具有正相关性(r=0.484,P＜0.01).结论 VEGF和ENS与DN血管增生密切相关.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 内抑素 糖尿病肾病 -
重组人内抑素对内皮细胞增殖的影响
目的探讨原核表达的可溶性重组人内抑素(rhEndo)对ECV 304内皮细胞和原代培养兔主动脉内皮细胞增殖的影响.方法利用酶标仪进行噻唑蓝(MTT)法检测,同时采用倒置相差显微镜、电子显微镜、流式细胞仪、半胱天冬酶3活性分析观察该内抑素对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激的血管内皮细胞增殖的影响.结果该rhEndo明显抑制ECV 304细胞的增殖,MultiCycle DNA Cycle软件分析表明细胞增殖阻滞在G1期,流式细胞仪检测发现该内抑素可诱导ECV 304细胞凋亡,且与半胱天冬酶3活性增强有关,但对原代培养的兔主动脉内皮细胞增殖并未产生明显的作用.结论内抑素可明显抑制ECV 304细胞增殖并诱导其发生凋亡,但对原代培养的兔主动脉内皮细胞增殖没有明显的影响,这将有利于与血管新生有关的疾病如癌症等的治疗.
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人内皮生长抑制素基因的克隆研究
从人胎肝组织中提取总mRNA,设计2对特异引物,通过RT-PCR获得了人源内抑素基因,将其分别插入克隆载体pBluescript和表达载体pGEX-4T-1中以构建重组质粒.测序显示插入片段序列与GenBank中人内抑素mRNA相应序列完全一致.
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血管内皮生长因子和内抑素在STZ大鼠肾脏中的表达及意义
目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)和内抑素(ENS)在2型糖尿病大鼠肾脏中的表达状况、比值变化及与肾脏微血管病变的关系.方法:将Wister大鼠设正常对照组和模型组,使甩Srz诱导形成2型糖尿大鼠肾病模型,分别于2、4、8、12周,采用RT-PCR的方法观察大鼠肾脏VEGF和ENS mRNA的表达,并观察其比值变化,同时采用免疫组化观察VEGF蛋白的表达变化.结果:(1)糖尿病组2周时肾脏中VEGF mRNA开始上调(P＜0.05),4、8、12周时较正常对照组明显上调(P＜0.01).(2)糖尿病组2周时肾脏中ENS mRNA的表达开始上调(P＜0.05),8、12周时表达明显上调(P＜0.01).(3)糖尿病组2周时肾脏的vEGFmRNA/ENS mRNA值未见变化(P＞0.05),4周时升高(P＜0.05),12周时明显升高(P＜0.01).(4)免疫组化显示糖尿病肾病组2周时VEGF升高,12周时升高更明显.结论:VEGF和ENS同时参与了糖尿病肾病的血管生成调控,两者表达水平的失衡是其新生血管形成的关键.
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子宫内膜异位症患者血清血管内皮生长因子与内抑素的测定及其临床意义
目的:探讨子宫内膜异位症(内异症)的血管生成机制以及血管内皮生长因子(VEGF)和内抑素(ENS)的诊断价值.方法:采用酶联免疫吸附法检测82例内异症患者(Ⅰ～Ⅱ期43例、Ⅲ～Ⅳ期39例)和60例非内异症对照者血清中VEGF和ENS的含量,并对数据进行分析.结果:内异症组血清VEGF和ENS含量均显著高于对照组(P＜0.01),VEGF/ENS比值亦高于对照组(P＜0.01);内异症组内Ⅰ～Ⅱ期VEGF和ENS含量则显著低于Ⅲ～Ⅳ期水平(P＜0.01),但二者比值无差异(P＞0.05).当单一或联合以血清VEGF＜156 ng/L,ENS＜92μg/L为诊断界点时,其各诊断灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为0.92、0.78、0.82、0.90;0.95、0.84、0.86、0.95以及0.98、0.75、0.76、0.98.结论:VEGF和ENS同时参与了内异症的血管生成调控,二者表达水平的失衡 是新生血管形成的关键.血管生成因子在内异症患者表达的异常,使其有可能成为有用的血清学诊断指标.
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ELISA检测肺癌患者血清内抑素的方法
目的提高肺癌的早期诊断率.方法对19例肺癌病人进行血清内抑素的测定.结果16例检出内抑素阳性.结论此方法可大大提高肺癌血清内抑素的阳检率,有望成为肺癌筛选的首选方法.
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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞周期和PCNA表达的影响
目的 观察重组人内抑素(rhEndostatin)对佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨rhEndostatin抑制AA FLS增殖的分子机制.方法 制备AA大鼠模型,应用流式细胞仪分析rhEndostatin对AA FLS细胞周期的影响;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法 ,定量分析rhEndostatin对AA大鼠滑膜组织PCNA mRNA及蛋白表达的影响.结果 与正常组相比,AA FLS G1期细胞减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞增加(P<0.01);AA大鼠滑膜组织PCNA mRNA和蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01).与AA模型组相比,rhEndostatin治疗组细胞G1期比例增加(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.01);滑膜组织PCNA mRNA和蛋白表达减少(P<0.01).结论 rhEndostatin可引起AA FLS细胞周期G1期阻滞,该作用可能与其抑制AA FLS PCNA表达有关.
关键词： 内抑素 佐剂性关节炎 细胞周期 增殖细胞核抗原(PCNA) 成纤维样滑膜细胞 -
重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎的影响
目的观察重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)的影响及其作用机制.方法用福氏完全佐剂(CFA)诱导大鼠AA模型,MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应,IL-1、IL-2活性的检测采用小鼠胸腺细胞增殖法,用放免法检测滑膜细胞培养上清液中IL-1和TNF-α水平.结果 CFA致炎后d10,AA大鼠出现继发性炎症,给予不同剂量的内抑素0.1、0.5、2.5 mg·kg-1·d-1,sc,连续7 d.结果发现,内抑素对AA大鼠的继发性足肿胀有抑制作用;进一步研究表明内抑素明显抑制AA大鼠过高的ConA诱导的脾细胞增殖反应,降低脾细胞IL-2的产生;对腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PMΦ)产生过高的IL-1有抑制作用;另外,内抑素也可明显抑制AA大鼠滑膜细胞产生过高的IL-1和TNF水平.结论重组人内抑素对AA大鼠具有治疗作用,其机制可能与其调节机体异常的免疫有关.
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重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎继发性炎症的抑制作用
目的观察重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎(AA)继发性炎症是否有抑制作用.方法用足容积测量仪检测足爪容积并对关节炎症程度进行目测评分;HE染色检测非致炎侧膝关节的病理改变.结果福氏完全佐剂(CFA)致炎后d 10,继发性炎症出现,同时给予不同剂量的内抑素(0.1、0.5、2.5 mg*kg-1*d-1,sc),连续7 d.结果发现,内抑素2.5 mg*kg-1对AA大鼠的继发性足肿胀有明显的抑制作用;致炎后d 30病理检查显示AA大鼠的关节内滑膜增厚,滑膜衬层细胞增生并伴有新生血管形成,滑膜细胞有不同程度的脂肪变性;软骨及骨遭到破坏,且透明软骨内基质降解及新生血管形成.给予不同剂量的内抑素对AA大鼠关节组织的上述病理改变有不同程度的改善作用,内抑素2.5 mg*kg-1对AA大鼠的关节病理损伤有完全的抑制作用,同时可见滑膜组织内大量胶原沉积和滑膜细胞的脂肪变性.结论重组人内抑素对大鼠佐剂性关节炎的继发性炎症有显著的抑制作用,并能阻止关节炎的病理改变.
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内抑素抗血管生成及抗类风湿性关节炎治疗
血管生成是类风湿性关节炎(RA)早期滑膜病理改变特征之一,也是产生和维持RA血管翳的主要因素.内抑素可特异性抑制新生血管内皮细胞增殖、迁移、诱导其凋亡而发挥抗血管生成作用,应用内抑素抑制滑膜新生血管生成可成为治疗RA的一种全新方法.内抑素还可通过抑制成纤维样滑膜细胞增殖,促进其凋亡发挥抗RA效应.
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内抑素抗肿瘤血管生成的研究进展
恶性肿瘤生长和转移依赖于新生血管形成,抑制血管生成可能是限制肿瘤生长和防止转移的有效策略.肿瘤的血管系统已成为1个新的抗肿瘤治疗靶点,目前已有多种血管生成抑制剂应用于抗肿瘤血管生成的实验研究.
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血管内皮细胞生长因子和内抑素在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义
目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)和内抑索在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义.方法 应用链脲佐菌素诱导制作2型糖尿病大鼠肾病模型,设正常对照组和模型组,分别于2、4、8、12周测血生化和24 h尿蛋白定量,采用RT-PcR方法观察大鼠肾脏VEGF和内抑素mRNA的表达,并进行相关性分析.结果 VEGF和内抑素2周时模型组即明显上调(P<0.05),第4、8、12周较对照组同期明显上调(P<0.01);Spearman 相关分析表明,VEGF与内抑素的表达呈正相关.结论 VEGF和内抑紊在糖尿病肾病中的表达均上调,可能与糖尿病肾脏微血管病变有关.
关键词： 糖尿病肾病 血管内皮细胞生长因子 内抑素 -
冠心病患者血清血管内皮生长因子和内抑素水平变化的临床意义
目的 探讨冠心病(CHD)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、内抑素(ENS)水平的变化及其在CHD中的意义.方法 将130例CHD患者分为急性心肌梗死组(AMI组)(42例)、不稳定型心绞痛组(UAP组)(48例)和稳定型心绞痛组(SAP组)(40例),另设对照组(36例).采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定所有入选对象血清VEGF和ENS水平.结果 与SAP组和对照组比较,AMI组和UAP组VEGF、ENS水平明显增高(P＜0.05)；AMI组VEGF、ENS水平明显高于UAP组(P＜0.05)；与对照组比较,SAP组VEGF、ENS水平有增高,但差异无显著性.AMI患者在第1、7和28天血清VEGF、ENS水平均高于对照组(P＜0.01),第7天和28天血 清VEGF、ENS水平明显高于第1天(P＜0.01).结论 CHD患者心肌缺血越严重,血清VEGF与ENS水平越高,两种因子在CHD发展过程中均有重要意义.
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子宫内膜异位症患者腹腔液血管内皮生长因子与内抑素的表达
目的探讨子宫内膜异位症(内异症)患者腹腔液中血管内皮生长因子(VEGF)和内抑素(ENS)在内异症血管生成调控机制中的作用.方法采用ELISA法检测50例内异症患者(Ⅰ～Ⅱ期26例、Ⅲ～Ⅳ期24例)和42例非内异症患者(对照组)腹腔液中VEGF和ENS的含量,分析二者浓度及其比值与内异症之间的关系.结果内异症组腹腔液VEGF、ENS浓度和VEGF/ENS比值均高于对照组(P＜0.01);内异症患者中Ⅲ～Ⅳ期VEGF和ENS含量均高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.01),而VEGF/ENS比值前者则低于后者(P＜0.01).增殖期与分泌期比较,除内异症组VEGF水平前者高于后者外(P＜0.05),对照组VEGF和两组ENS水平两期比较均无差异(P＞0.05).结论 VEGF和ENS同时参与了内异症的血管生成调控,而两者表达水平的失衡可能才是内异症发病的关键.
