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p27及CDK4与结肠癌的研究进展
肿瘤的发生发展与细胞周期调控基因和蛋白的改变关系密切,p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子(cyelindependent kinase inhibitor,CKI)的两大家族(KIP家族和INK4家族)中KIP家族的重要成员之一,可抑制多种cyclin/CDK复合物的活性,对细胞周期进行负调控.同时也发挥着介导抑制性细胞分子反应,促进分化,增加细胞间粘附的作用.细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase;CDK)为调节细胞周期中DNA复制期和有丝分裂期的酶类,是卵细胞促进因子(MPF)中具有蛋白激酶活性的催化亚单位.
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微小RNA-873-5p通过靶向作用于PYGO2基因对膀胱癌细胞生长的影响
目的 探讨微小-873-5p(miR-873-5p)转染对PYGO2基因表达的调控作用及对膀胱癌细胞5637生长的影响.方法 根据处理不同,膀胱癌细胞分为对照组(转染miR-NC)和实验组(转染miR-873-5p).qRT-PCR检测转染后两组细胞中miR-873-5p表达量.生物信息学预测PYGO2为miR-873-5p可能的靶基因.qRT-PCR检测PYGO2mRNA的表达.构建PYGO2基因的3'UTR野生型及突变型序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测.Western blot检测PYGO2及下游靶蛋白的表达.流式细胞术分析细胞周期分布,MTS法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力.结果 实验组中miR-873-5p表达量显著上升(P＜0.01).双荧光素酶报告基因系统结果显示PYGO2是miR-873-5p的靶基因.与对照组相比,实验组细胞中PYGO2 mRNA水平下调58.48％ (P＜0.01).PYGO2及下游靶蛋白表达明显下调.转染miR-873-5p后,细胞周期被阻滞在G0/G1期(P＜0.01),实验组细胞的活力和增殖能力均明显降低(P＜0.05).结论 miR-873-5p通过干扰膀胱癌细胞5637中PYGO2基因的表达,阻滞细胞周期进展,抑制细胞的增殖,可能成为膀胱癌基因治疗的靶标分子.
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皮肤瘢痕癌中CDK4、CDK6蛋白的表达及意义
目的 探讨细胞周期素依赖激酶CDK4、CDK6蛋白在皮肤瘢痕癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学S-P法检测正常皮肤表皮、皮肤病理性瘢痕被覆上皮和瘢痕癌组织中CDK4、CDK6蛋白的表达.结果 CDK4、CDK6蛋白在皮肤瘢痕癌组中呈阳性或强阳性表达,在皮肤病理性瘢痕组中呈弱阳性表达,在正常皮肤组中呈阴性或弱阳性表达.瘢痕癌组分别与正常皮肤组和皮肤病理性瘢痕组比较,差别有统计学意义(P＜0.01).结论 CDK4、CDK6蛋白的过表达可能与瘢痕癌的发生具有相关性.
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CDK4在病毒性肝炎肝组织中表达的意义
目的探讨CDK在病毒性肝炎肝组织中表达的意义.方法对62例病毒性肝炎、肝炎肝硬变及原发性肝癌肝组织进行CDK4免疫组化检测.结果CDK4阳性物质在病毒性急慢性肝炎间质(包括间质细胞),肝细胞核、肝细胞浆、血窦等部位均有表达;在肝炎肝硬变和原发性肝癌,除间质有分布外,主要表达在肝细胞或癌细胞的胞浆中,细胞核和血窦无表达.结论病毒性急慢性肝炎肝细胞核中CDK4表达增强可能有利于肝组织损伤的修复.
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环孢A处理对大鼠横断脊髓cdk4表达的影响
目的 探讨环孢霉素A处理对大鼠横断脊髓cdk4表达的影响.方法 成年SD大鼠分SCT组 (T9横断),和SCT后给予环孢霉素A处理组.每组13只动物.动物于环孢霉素A处理7 d后处死,其中每组5只用免疫组化染色确定cdk4在脊髓的定位分布,另8只动物用RT-PCR技术确定cdk4在损伤脊髓的表达变化.结果 与手术组比较(0.99±0.11),环孢霉素A处理(1.12±0.15)导致cdk4在损伤脊髓的表达明显上调(P＜0.05);免疫组化染色显示cdk4主要分布在脊髓灰质神经元.结论 环孢霉素A处理能有效上调损伤脊髓cdk4表达水平,提示环孢霉素A发挥免疫抑制作用可能与cdk4的调节有关.
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Cyclin D1、P16及CDK4基因与胃癌相关性的研究进展
胃癌是全世界发病率和死亡率排名第二位的恶性肿瘤，而我国是世界上胃癌发病率高的国家之一。细胞周期蛋白的调控能对肿瘤的机制研究及基因治疗提供有效依据。细胞周期中的G1/S期是调控的关键点，其中Cyclin D1、P16及CDK4基因起着重要的作用，且与胃癌之间有着较大的关联性，但上述基因与胃癌之间的关系尚不明确。为了更好地认识Cyclin D1、P16及CDK4基因在胃癌中表达的情况，就近年来相关的研究进行综述。
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CDK4在小鼠脊髓中的表达
目的:观察CDK4在小鼠脊髓 (L6)的表达情况.方法:成年小鼠(体重100～150g)5只,将其处死后取其脊髓(L6)制作20μm厚冰冻切片,用CDK4兔抗血清行免疫组化染色.观察CDK4在正常脊髓中的分布以及亚细胞定位.结果:在正常脊髓腹角部分运动神经元中可见CDK4的表达,其阳性反应物定位于胞核.结论:CDK4可能与正常脊髓运动神经元的细胞周期调控有关.
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人体肝癌发生过程中细胞周期调控相关因子表达的研究(摘要)
目的:研究人体肝癌发生过程中相关的慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化和肝癌等不同阶段病变中细胞周期调控相关因子的表达及其相互关系,从细胞周期调控及细胞增殖角度探讨HCC发生的分子生物学机制.方法:应用免疫组织化学检测正常肝组织(8例)、慢性肝炎(22例)、肝硬化(24例)、癌周肝硬化(22例)和肝癌(30例)共107例存档石蜡标本中cyclinD1、CDK4、PCNA、p16、p27、蛋白的表达情况.
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血小板第4因子对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的调控机制
目的:检测小鼠骨髓细胞p53、Cyclin D1及CDK4蛋白表达量的变化,以探讨血小板第4因子(PF4)对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞保护作用的机制.方法:雄性BALB/c小鼠随机分为3组,第1组(正常对照组)、第2组(单纯照射组)、第3组(PF4保护组),第3组在照射前26 h及20 h腹腔注射PF4 40 μg/kg,第2、3组全身一次性5 Gy 60Co-γ射线照射,照射后4 h取小鼠骨髓细胞,Western blot检测小鼠骨髓细胞内p53、Cyclin D1、CDK4蛋白量表达的变化.结果:第2组、第3组小鼠骨髓细胞p53蛋白量与第1组相比明显升高,而Cyclin D1、CDK4则明显降低(P＜0.05);第2组与第3组p53蛋白表达量的表达有明显差异(P＜0.05),而Cyclin D1与CDK4无统计学意义(P＞0.05).结论:p53蛋白在PF4对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞周期调控作用中起一定作用.
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大肠癌PKC-α、CyclinD1和Cdk4的表达与临床病理学特征的关系
目的:探讨大肠癌PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达与临床病理学特征的关系.方法: 应用免疫组织化学SP法对PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测. 结果: PKC-α在大肠癌组织中阳性表达率31/47(66.0%)与大肠正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)对比有显著性差异(P<0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P<0.05).CyclinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达率分别为26/47(55.5%),28/47(59.6%),与正常组织中表达2/15(13.3%),1/15(6.70%)及腺瘤组织中表达8/21(38.1%),9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P<0.05).大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关关系(P<0.05),而与CEA水平关系不大(P>0.05);Cdk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P<0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P>0.05).结论: PKC-α,CyclinD1和Cdk4的高表达与大肠癌分化程度,Dukes分期呈明显相关,对判断大肠肿瘤恶性程度具有一定的临床意义. 应用免疫组织化学SP法对PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测.结果: PKC-α在大肠癌组织中阳性表达率31/47(66.0%)与大肠正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)对比有显著性差异(P<0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P<0.05).CyclinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达率分别为26/47(55.5%),28/47(59.6%),与正常组织中表达2/15(13.3%),1/15(6.70%)及腺瘤组织中表达8/21(38.1%),9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P<0.05).大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关关系(P<0.05),而与CEA水平关系不大(P>0.05);Cdk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P<0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P>0.05).结论: PKC-α,CyclinD1和Cdk4的高表达与大肠癌分化程度,Dukes分期呈明显相关,对判断大肠肿瘤恶性程度具有一定的临床意义.
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沉默 HLA A2表达的骨髓间充质干细胞安全性的研究
目的：探讨人白细胞抗原A2（HLA A2）表达沉默后人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）的安全性。方法实验分为对照组（正常培养至第8代细胞组）及实验组1和实验组2（分别为 HLA A2表达沉默后第5代、第15代）。复苏HLA A2表达沉默的hBMSCs ，通过观察细胞的生长曲线、端粒酶活性和抑癌基因P27的表达水平、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）和Cyclin D2的表达水平，分析细胞的安全性。并将细胞接种于裸鼠的皮下，24周后观察荷瘤组织的种类。结果实验组1、实验组2与对照组相比，细胞生长曲线没有明显的左移或右移。 HLA A2表达沉默的hBM‐SCs在沉默 HLA A2表达后，3组间的端粒酶活性没有明显差异；3组的Cyclin D2、CDK4和抑癌基因 P27的表达量也没有明显变化。细胞接种于裸鼠皮下24周，只有异位成骨，而没有形成肿瘤组织。结论人BMSCs的 HLA A2表达沉默后，在实验周期内，没有明显证据表明有安全性的改变。
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胃上皮异型增生并肠性化生PCNA、Cdk4和Survivin的表达
目的探讨胃上皮异型增生并结肠及小肠性化生组织中PCNA、Cdk4和Survivin表达的意义.方法应用组织化学法和免疫组织化学SP法检测44例结肠性化生(其中低度异型增生27例,高度异型增生17例)和51例小肠性化生(其中低度异型增生42例,高度异型增生9例)胃活检组织中PCNA、Cdk4和Survivin的表达.结果 PCNA、Cdk4和Survivin蛋白在胃上皮异型增生并结肠性化生与小肠性化生间的表达有显著性差异.低度异型增生和高度异型增生间PCNA和Survivin蛋白表达有显著性差异.Cdk4低度异型增生和高度异型增生间表达无显著性差异.结论 PCNA、Cdk4和Survivin基因的改变不仅与肠上皮化生的类型有关,而且与胃上皮异型增生的程度密切相关.PCNA、Cdk4和Survivin蛋白可作为判断胃异型增生上皮并肠上皮化生生物学行为有价值的指标.
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p53基因对人胚肺成纤维细胞周期影响的研究
背景与目的:研究野生型和179位残基突变型p53基因在HELF细胞周期调控中的作用.探讨p53基因的179位残基突变对细胞生长的影响.材料与方法:用野生型p53(pcDNA3-wtp53)和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)转染HELF细胞,观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪分析细胞周期;用RT-PCR和Western blotting方法检测p53基因转染后HELF细胞周期相关基因mRNA和蛋白的表达.结果:野生型p53表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期,细胞体积减小,并下调cyclin D3、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达,同时上调p21的表达.而179位残基突变的突变型p53表达的上调则促进细胞周期从G1期到S期的转换,同时细胞体积增大,上调cyclin A和Cdk4的表达.结论:p53的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用,并可能借此促进细胞周期进程.
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三氯化镧对CBRH-7919细胞CyclinD1和CDK4蛋白表达的影响
背景与目的:研究三氯化镧(LaCl3)对大鼠肝癌细胞CyclinD1和CDK4蛋白表达的影响.材料与方法:采用体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919,分别加入0.01、0.10、1.00 mmol/L LaCl3培养1、3、5 d后观察CBRH-7919细胞生长变化;运用流式细胞术、MTF实验和免疫细胞化学检测与G1期调控有关的CyclinD1和CDK4的变化情况,以培养液中不加LaCl3体外培养CBRH-7919作为对照.结果:0.10、1.00 mmol/L LaCl3组培养后3、5 d对细胞的生长均具有抑制作用,与对照组比差异具有统计学意义(P＜0.01);G0/G1期细胞百分数均有显著性增加,与对照组比差异均具有统计学意义(P＜0.01);CyclinD1、CDK4阳性表达均显著减弱,与对照组比差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:LaCl3可通过下调CyclinD1和CDK4,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长.
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Survivin shRNA干扰对食管癌细胞CDK4 mRNA表达的影响
目的：以shRNA抑制食管癌ECA109细胞内Survivin的表达，探讨Survivin shRNA干扰对CDK4基因表达的影响。方法：ECA109细胞分为Survivin shRNA干扰组、质粒对照组和空白细胞组，采用RNA干扰技术沉默ECA109细胞株中Survivin基因的表达，RT-PCR检测各组细胞中Survivin和CDK4 mRNA的表达，Western blot方法检测各组细胞Survivin蛋白的表达，流式细胞术检测细胞周期的改变。结果：与质粒对照组及空白细胞组比较，Survivin shRNA干扰组细胞Survivin mRNA及蛋白表达下调，CDK4 mRNA表达明显降低，差异均具有统计学意义(P均<0.05)；Survivin shRNA干扰组G2期延长，G2期细胞比例增加，细胞G2期增殖阻滞。结论：Survivin基因可能在转录水平对CDK4具有调控作用，其具体调控机制有待进一步研究。
