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对MDR肿瘤细胞KBV200的PKC-α亚型cDNA克隆序列的研究
目的：探讨口腔癌耐药细胞KBV200中，蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)α亚型的cDNA序列与肿瘤多药耐药性(multidrug resistance，MDR)的关系。方法：应用Western blotting法检测PKC-α在2株细胞中的表达，RT-PCR方法获得2株细胞的PKC-α亚型的cDNA片断，并克隆到T载体上，转化大肠杆菌并测序。结果：KBV200细胞中的PKC-α表达高于在药敏细胞株KB中的表达，同时发现KBV200的PKC-α亚型的cDNA序列中，第54位碱基发生点突变，但并未改变氨基酸序列。结论：PKC-α与KBV200细胞的MDR表型关系密切，引起MDR的外界因素可能通过改变PKC-α的基因序列来提高这一同工酶的表达从而引起了MDR现象。
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反义寡核苷酸联用对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用
目的研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法.方法选择以端粒酶、PKC-α、Bcl-2和IGF-1R为靶点的4种反义寡核苷酸,进行两药组合.以脂质体介导进行反义寡核苷酸转染,用MTT法染色并计算细胞生长抑制率,用SAS统计软件及金正均Q值法进行数据分析.结果联合用药对A549细胞增殖的抑制作用显著高于单药(P＜0.05),并筛选出有协同作用的药物组合(Q≥1.15).结论反义寡核苷酸联合用药可以靶向多个与肿瘤发生发展密切相关的基因,提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果.
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5-HD对慢性低氧肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌PKC-α表达的作用
目的:研究线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)抑制剂5-羟基癸酸盐(5-HD)对慢性低氧肺动脉高压大鼠的影响及其潜在机制.方法:雄性SD大鼠48只,随机分成4组(n=12):①正常对照组;②慢性低氧组;③慢性低氧+ 5-HD组;④慢性低氧+ Diazoxide(mitoKATP开放剂)组;除正常对照组外,其余3组置于氧舱内(氧浓度10% ±0.3%),每天低氧8h,并接受不同的干预,共4周.干预结束后右心导管法测各大鼠肺动脉压,RT-PCR和Western blot检测各组大鼠肺动脉PKC-α蛋白和mRNA的表达.结果:①慢性低氧组肺动脉压显著高于正常组(P＜0.01),同时慢性低氧+ Diazoxide组与慢性低氧+ 5-HD组肺动脉压较慢性低氧组显著减低(P<0.01).②慢性低氧组PKG-α蛋白及mRNA的相对表达显著高于正常组(P<0.05).结论:5-HD对慢性低氧肺动脉高压起保护作用,其机制可能是抑制线粒体ATP敏感钾通道.
关键词： 慢性低氧肺动脉高压 PKC-α 线粒体ATP敏感钾通道 5-HD -
经典型蛋白激酶C在不同肾小球疾病患者肾组织的表达
目的:检测4种经典型蛋白激酶C同工酶(PKC-α、PKC-β Ⅰ、PKC-β Ⅱ和PKC-γ)在正常及不同肾小球疾病患者肾组织的表达,探讨其在肾小球疾病中的作用.方法:收集广东医科大学附属医院肾病内科行肾脏病理活检确诊的肾小球疾病患者肾组织50例,其中肾小球轻微病变、膜性肾病、局灶节段性肾小球硬化症、IgA肾病及狼疮性肾炎各10例;收集6例来自肾肿瘤患者手术切除远离肿瘤部分、病理检查无异常的肾组织做为正常组.免疫组化法检测并分析4种经典型蛋白激酶C同工酶在正常及肾小球疾病肾组织的表达变化.结果:PKC-α、βⅠ和β Ⅱ在正常肾组织肾小管上皮细胞和肾小球均有表达,PKC-γ仅表达于肾小球足细胞,在肾小管间质均无表达;各经典型PKC同工酶在肾小球疾病肾组织中表达部位与正常肾组织相同,但表达量不尽相同.结论:在肾小球疾病中,PKC-α和PKC-β Ⅰ可能参与肾小管间质纤维化,是慢性肾脏病的潜在治疗靶点,PKC-γ可能参与足细胞生理功能的维持,不参与肾小管间质的损伤.
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结肠癌组织中P16、CyclinD1和PKC-α的表达及意义
目的:研究P16、CyclinD1和PKC-α在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床指标的关系.方法:采用免疫组织化学S-P染色方法检测P16、CyclinD1和PKC-α在70例结肠癌组织及癌旁组织中的表达.结果:结肠癌组织中P16蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,CyclinD1和PKC-α阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义.结论:结肠癌的发生与CyclinD1、PKC-α高表达和P16低表达均有关,P16蛋白可作为结肠癌早期诊断、临床生物学行为和预后评估的重要指标.
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PKC-α在肝癌组织中的表达及与术后复发和生存的关系
目的 探讨PKC-α在肝癌组织中的表达水平及与肝癌术后复发和生存的关系.方法将106例肝癌患者作为研究对象,于术后分别取肿瘤组织(观察组)和癌旁组织(对照组),采用荧光定量PCR和Western blot分析组织中PKC-αmRNA和蛋白质水平变化,比较PKC-α表达阳性率,分析PKC-α表达水平与术后复发和生存的关系.建立PKC-α敲低HepG2稳定细胞系,分析PKC-α对细胞侵袭能力的影响.结果观察组肝癌组织中PKC-αmRNA和蛋白质表达水平显著高于对照组(P<0.05).免疫组化分析显示对照组PKC-α阳性率显著低于观察组阳性率(P<0.05),PKC-α阳性患者术后累积复发率显著高于阴性患者(P<0.05),而累积生存率显著低于阴性患者(P<0.05).体外实验证实PKC-α敲低的HepG2细胞侵袭能力显著低于对照细胞(P<0.05).结论PKC-α在肝癌组织中表达升高,对肝癌患者术后复发及生存率有一定影响.
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肺癌组织中PKC-α蛋白的表达与肺癌临床病理特征的关系
目的检测肺癌组织中PKC-α(protein kinase C-alpha)蛋白的表达,探讨PKC-α蛋白与肺癌的组织类型、分化程度肺癌临床病期和淋巴结转移的关系.方法应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)和荧光染色、激光扫描共聚焦技术,检测60例肺癌组织(肺癌组)、17例肺良性病变的正常肺组织(对照组)中PKC-α蛋白表达.结果肺癌组和对照组PKC-α蛋白表达的阳性率分别为76.7%(46/60)和17.6%(3/17),两组间差异具有高度显著性(P<0.01).PKC-α蛋白表达在肺癌不同病理类型即鳞癌和腺癌中,差异无显著性(P>0.05).在高分化、中分化和低分化肺癌之间比较,PKC-α蛋白表达阳性率差异亦无显著性(P>0.05).PKC-α蛋白在IA+IB、IIA+IIB和ⅢA+ⅢB期阳性率分别为50.0%、82.6%和90.5%,阳性率随TNM分期而上升,差异有显著性(P<0.05).PKC-α阳性率在N0和N1～3肺癌分别为42.1%、92.7%,两者差异有高度显著性(P<0.01).41例伴有淋巴结转移的病例中,PKC-α蛋白表达在肺原发灶和淋巴结转移灶之间比较,差异无显著性(P>0.05).结论肺癌组织中存在PKC-α蛋白的高表达;PKC-α蛋白的高表达与肺癌组织类型和分化程度无关,而与肺癌病期、淋巴结转移有密切关系.
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蛋白激酶C-α、CyclinD1和Cdk4在大肠癌中表达的相关性及临床意义
目的 探讨PKC-α,CyclinD1和Cdk4在大肠癌中表达的相关性及其与临床病理学特征的关系.方法 应用免疫组化SP法对83例大肠组织中PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测.结果 PKC-α在大肠癌组织中阳性表达31/47(66.0%)与正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)相比差异有统计学意义(P＜0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P＜0.05).Cy-clinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达分别为26/47(55.5%)、28/47(59.6%),与正常组织中2/15(13.3%)、1/15(6.70%)及腺瘤组织中8/21(38.1%)、9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P＜0.05).大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关(P＜0.05),而与CEA水平关系不大(P＞0.05);CAk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P＜0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P＞0.05).PKC-α与CydinD1呈正相关关系(r=0.348,P＜0.05),CyclinD1和Cdk4呈正相关关系(r=0.393,P＜0.05),PKC-α和Cdk4则无明显相关性(r=0.167,P＞0.05).结论 蛋白激酶C-α与CyclinD1及Cdk4的过表达在大肠癌的发生、发展中起着重要的协同作用.三者的过表达与大肠癌的分化程度,Dukes分期密切相关.
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pkc-α、caspase-3在大肠癌中的表达及意义
目的:研究pkc-α和caspase-3在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系.方法:利用S-P法检测48例大肠癌和10例大肠腺瘤以及15正常大肠黏膜组织中pkc-α和caspase-3基因的蛋白表达.结果:①在大肠腺癌、腺瘤和正常大肠黏膜中pkc-α和caspase-3的阳性表达率分别为58.3%(28/48),66.7%(32/48);90%(9/10),100%(10/10);86.7%(13/15),93.3%(14/15),pkc-α和caspase-3在大肠癌中阳性表达率显著低于正常黏膜和良性腺瘤(P＜0.05).②pkc-α和caspase-3的表达与大肠癌的临床病理分级有关,随着病理分级的增加,其表达率逐渐降低;与性别、年龄、淋巴结转移及Dukes分期均无关(P＞0.05).③大肠癌组织中pkc-α和caspase-3蛋白的表达无明显相关性(P＞0.05).结论:pkc-α和caspase-3蛋白的低表达在大肠癌的发生发展中起着重要的作用,可作为大肠癌临床评价肿瘤生物学行为及病理诊断的有用指标.
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PKC信号通路在实验性肝癌发生过程中的变化特征及与卵圆细胞增殖转化的关系
[目的]探讨实验性肝癌发生、发展过程中PKC-α和C-Jun的表达与卵圆细胞生长之间的关系.[方法]用诱癌剂3-甲基-4-甲基氨偶氮苯(DAB)饲喂SD大鼠构建肝癌模型.分别用斑点杂交检测PKC-α mRNA及用Nortben Blot检测C-Jun mRNA在肝癌发生过程中几个阶段(第4周、第8周、第14周、第17周、第24周)的表达,并用薄层色谱仪线性扫描进行半定量.[结果]在第4周,诱癌组肝脏汇管区出现少量卵圆细胞,同时诱癌组肝脏可检测到PKC-α和C-Jun mRNA的表达.更有意义的是,诱癌组PKC-α和C-Jun mRNA的表达强度及卵圆细胞的数量随着实验的进程从第8周开始急剧增加,持续经过第14周并在第17周达到高峰,然后开始下降.同时在第17周出现不典型增生的卵圆细胞及多灶性肝细胞癌和胆管上皮细胞癌.在第24周,诱癌组肝脏出现大片肝细胞癌和胆管上皮细胞癌,但几乎看不到正常和不典型增生的卵圆细胞,同时PKC-α和C-Jun mRNA的表达强度急剧减弱,因此,在整个诱癌过程中,PKC-α和C-Jun mRNA表达的变化曲线与卵圆细胞的增殖及恶性转化基本一致.[结论]在实验性肝癌发生过程中卵圆细胞可能是肝癌的始动细胞,PKC-α和C-Jun在卵圆细胞的增殖和恶性转化中发挥重要的作用,并由此推测PKC-α和C-Jun的过表达是肝癌形成的前期事件.
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PKC-α在鼻咽癌中的表达及其意义
目的:观察PKC-α在鼻咽癌中的表达情况及与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组化检测56例鼻咽癌标本和15例正常鼻咽黏膜上皮标本中PKC-α、E-cadherin的表达情况,并分析PKC-α和E-cadherin 之间的相互关系以及PKC-α表达与临床病理特征间的关系.结果:15例正常鼻咽黏膜上皮PKC-α均为阴性,56例鼻咽癌标本PKC-α的阳性表达率为78.6%,在角化性鳞癌、分化型非角化性癌、未分化型非角化型癌中的阳性表达率分别为75.0%、70.0%和85.7%,不同组织类型间差异无统计学意义:在无淋巴结转移组和淋巴结转移组阳性率分别为66.7%和60.0%,差异无统计学意义:在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为46.7%和73.1%,差异有统计学意义.PKC-α表达与E-cadherin异常表达呈明显正相关.结论:PKC-α 在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用,PKC-α过表达促进癌细胞增殖,与肿瘤的侵袭、临床分期有关.
关键词： 鼻咽肿瘤 E-cadherin PKC-α 临床病理特征 -
大肠癌PKC-α、CyclinD1和Cdk4的表达与临床病理学特征的关系
目的:探讨大肠癌PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达与临床病理学特征的关系.方法: 应用免疫组织化学SP法对PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测. 结果: PKC-α在大肠癌组织中阳性表达率31/47(66.0%)与大肠正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)对比有显著性差异(P<0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P<0.05).CyclinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达率分别为26/47(55.5%),28/47(59.6%),与正常组织中表达2/15(13.3%),1/15(6.70%)及腺瘤组织中表达8/21(38.1%),9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P<0.05).大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关关系(P<0.05),而与CEA水平关系不大(P>0.05);Cdk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P<0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P>0.05).结论: PKC-α,CyclinD1和Cdk4的高表达与大肠癌分化程度,Dukes分期呈明显相关,对判断大肠肿瘤恶性程度具有一定的临床意义. 应用免疫组织化学SP法对PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测.结果: PKC-α在大肠癌组织中阳性表达率31/47(66.0%)与大肠正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)对比有显著性差异(P<0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P<0.05).CyclinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达率分别为26/47(55.5%),28/47(59.6%),与正常组织中表达2/15(13.3%),1/15(6.70%)及腺瘤组织中表达8/21(38.1%),9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P<0.05).大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关关系(P<0.05),而与CEA水平关系不大(P>0.05);Cdk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P<0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P>0.05).结论: PKC-α,CyclinD1和Cdk4的高表达与大肠癌分化程度,Dukes分期呈明显相关,对判断大肠肿瘤恶性程度具有一定的临床意义.
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P-gp、PKC-α和MRP在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义
目的探讨P-gp、PKC-α和MRP在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义.方法运用免疫组织化学技术(S-P法)检测P-gp、PKC-α和MRP在50例上皮性卵巢癌、20例卵巢良性肿瘤和10例正常卵巢组织中的表达.结果 P-gp、PKC-α和MRP 三个指标在上皮性卵巢癌组织中阳性率分别为48.0%、56.0%、60.0%,显著高于正常卵巢和良性肿瘤(P<0.05);P-gp和PKC-α表达存在密切的相关关系(P<0.01);卵巢癌P-gp、PKC-α和MRP表达阳性者的化疗反应率分别为25.0%、25.0%、33.3%,低于阴性表达组(P<0.05);复发患者P-gp和PKC-α阳性表达率明显高于未复发的患者(P<0.05),MRP表达与复发无关(P>0.05).单因素分析表明,P-gp、PKC-α和MRP与卵巢癌患者的生存期和不良预后有关.多因素分析表明,P-gp及三个指标共同表达与患者的生存率有关.结论卵巢恶性肿瘤中P-gp、PKC-α和MRP阳性表达与临床化疗耐药有关,并影响患者的生存率.联合检测三个指标对临床化疗疗效判断和患者预后估计具有积极的指导作用.
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大鼠视神经切断后视网膜双极细胞PKC-α和recoverin的表达
为了探讨视神经切断后视网膜内部是否存在突触可塑性改变,本实验采用大鼠视神经切断模型,通过免疫组织化学方法检测视神经切断后视网膜双极细胞PKC-α和recoverin的表达变化.结果显示:正常视网膜中,PKC-α和recoverin阳性产物主要见于视网膜内核层、内网层及节细胞层,另外外核层也可见少量recoverin阳性细胞.视神经切断后3 d,大鼠视网膜内网层高倍镜下可见PKC-α和recoverin免疫阳性终末的数量开始增加,14 d时增至高,21 d、28 d呈现逐渐减少的趋势.本研究结果提示视神经切断后视网膜双极细胞与节细胞之间的突触可能存在早期增生,后期溃变的可塑性变化.
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红景天苷抑制胃癌细胞SGC7901增殖及对PKC-α的影响
目的 观测红景天苷对胃癌细胞SGC7901增殖和PKC-α表达的影响,为红景天苷治疗恶性肿瘤提供实验依据.方法 采用细胞形态学方法及MTT法、流式细胞术检测分析不同浓度红景天苷对胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用;Western Blot法检测对照组、红景天苷10～ 40 μmol/L各组PKC-α蛋白表达水平.并对上述结果做相关分析.结果 红景天苷作用SGC7901细胞24 h后细胞变圆,贴壁生长状态变差,死亡细胞数增多.MTT示红景天苷浓度在10～ 100 μmol/L时,细胞死亡率随药物浓度增加而增多,细胞生存率与红景天浓度呈负相关.流式细胞术结果显示,红景天干预后凋亡细胞随着药物浓度增加而增多(P＜0.05).Western blot检测结果示PKC-α蛋白的表达随红景天苷浓度(10、20、40μmol/L)的增加逐渐降低(P＜0.05).结论 红景天苷对胃癌细胞SGC7901具有抑制增殖并诱导凋亡的作用.红景天苷对SGC7901细胞有抑制PKC-α蛋白表达的作用.红景天苷对恶性肿瘤具有相关治疗作用.
