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靛玉红对喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制
目的:探讨靛玉红甲肟(IRO)对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制.方法:MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对Hep-2细胞增殖活性的影响.流式细胞仪检测IRO对Hep-2细胞周期的影响.Western法检测IRO对Hep-2细胞CDK4和cyclin D1蛋白表达的影响.结果:MTT结果发现IRO对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性(P＜0 01).流式检测发现,以10μmol/L的IRO处理Hep-2细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,不同浓度组间差异存在显著性(P＜0 01).Western结果发现IRO对Hep-2细胞CDK4和cyclin D蛋白的表达有抑制作用(P＜0 01).结论:IRO具有抑制人喉癌Hep-2细胞增殖的作用,其机制与阻滞细胞于G0/G1期有关.
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白血病HL-60、HL-60A细胞Cyclin D1、hTERT表达和端粒酶活性及意义
本研究旨在现察cyclin D1、hTERT和端粒酶在正常人单个核细胞(MNC)、HL-60和HL-60A中的表达及活性,并探讨它们与白血病发生及耐药的关系.实验用正常人外周血MNC、耐药白血病细胞株HL-60和HL-60A,采用流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC+ PI染色法检测细胞凋亡,real-time PCR和Western blot检测细胞cyclin D1、hTERT mRNA及蛋白表达,TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性.结果表明:MNC、HL-60、HL-60A的S期细胞比例分别为(10.21±2.11)%、(44.93±3.00)%、(51.38±1.10)%;凋亡细胞比例分别为(16.14±2.13)%、(7.53±0.92)%、(4.15±0.96)%;cyclin D1、hTERT的mRNA和蛋白水平依次增高;HL-60、HL-60A端粒酶活性较正常MNC增强(p=0.000),HL-60与HL-60A之间无明显差别(p=0.232);cyclin D1、hTERT与端粒酶活性呈正相关(p<0.01).结论:与正常人MNC相比,HL-6O、HL-6OA的S期细胞增多,凋亡细胞减少,且以HL-60A更为明显,这可能与cyclin D1、hTERT、端粒酶活性上调有关.
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STAT5信号转导通路及其靶基因产物与结直肠癌恶性潜能的关系
目的:分析STAT5及其靶基因产物Cyclin D1与Caspase-3在结直肠癌组织中的表达情况,探讨STAT5及其靶基因产物在结直肠癌发病机制中的作用.方法:收集北京海淀医院外科2003-12/2005-12经手术切除的结直肠癌标本60例,应用Western blot检测60例结直肠癌组织、正常黏膜中STAT5及其靶基因产物Cyclin D1与Caspase-3表达.结果:p-STAT5,Cyclin D1及Caspase-3表达水平在结直肠癌组织中明显高于正常黏膜(P=0.028,0.035,0.046);p-STAT5表达水平与分期相关(P=0.026);Caspase-3与分期相关(P=0.041).p-STAT5与Caspase-3在结直肠癌组织中表达情况呈线性相关(r=0.412,P＜0.05).结论:STAT5信号转导通路可能在结直肠癌发生过程中起重要作用,检测结直肠癌中STAT5及其靶基因产物的表达可以反映肿瘤的恶性潜能.
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细胞周期素D1(cyclin D1)和Ki67蛋白在食管鳞癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨细胞周期素D1(cyclin D1)、Ki67蛋白在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其临床意义. 方法 应用免疫组化方法检测28例ESCC组织和33例食管炎组织中cyclin D1蛋白、Ki67蛋白的表达. 结果 在ESCC与食管炎组织中cyclin D1阳性表达率分别为60.7%(17/28)和33.3%(11/33)(χ2=4.573,P=0.032),Ki67标记指数(Ki67 LI)分别为(49.21±25.15)%和(11.62±9.87)%(t=7.908,P=0.000).ESCC组TNM分期中Ⅰ期cyclin D1阳性表达率为14.3%(1/7),Ⅱ期为55.6%(5/9),Ⅲ期为85.7%(6/7),Ⅳ期为100%(5/5),Ⅲ期与Ⅰ期、Ⅳ期与Ⅰ期相比,差异有显著性(P值分别为0.029,0.015).有淋巴结转移者cyclin D1阳性表达率为90.9%(10/11),无淋巴结转移者为41.2%(7/17)(P=0.016).28例ESCC随访6～34个月,(25.0±4.2)月,死亡4例(3例为原发病进展,1例脑血管意外),生存19例,失访5例. 结论 cyclin D1的表达与进展期肿瘤、淋巴结转移有关.Ki67在肿瘤中高表达,表达强弱与肿瘤分化程度及肿瘤分期无关.
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肿瘤检验cyclin D1表达DNA含量与肝癌的关系
探讨研究cyclin D1表达DNA含量及细胞凋亡与肝临床发展关系.方法通过检测cyelin D1表达、细胞调亡发生和细胞DNA含量进行分析.结果研究王示:正常肝组织DNA含量度值为0.36±0.07,肝癌中/高分化组和低分化组DNA分别是正常水平人的1.78倍和2.2倍.结论 Cyelin D1的过度表达可反应肝的侵袭力.它与肝癌的发生发展密切相关.
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消痹方对兔膝骨性关节炎软骨下骨CycIin D1 mRNA的影响
目的：探讨消痹方对兔膝骨性关节炎软骨下骨CyclinD1mRNA的影响。方法将新西兰大白兔分为试验组和对照组，术后1周开始分组灌胃治疗。采用X线摄片、光镜对软骨下骨进行组织形态学观察，RT-PCR法检测软骨下骨CyclinD1的表达。结果试验组软骨下骨退变表现、骨质增生和软骨下骨结构紊乱现象明显较对照组轻，试验组骨转换指标CyclinD1mRNA表达量较低(P＜0.05）。结论消痹方通过下调CyclinD1mRNA的表达，降低软骨下骨重塑速率。
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抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌HeLa细胞的影响
目的:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌细胞增殖的抑制效应分析.方法:将携带抗Cyclin D1胞内抗体AD5N的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法稳定转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性细胞株,进一步通过Westem blot、MTT法及流式细胞术分析该胞内抗体的细胞内表达和抗肿瘤效应.结果:ADSN在稳定筛选的细胞株中有效表达,与空细胞和空质粒转染的细胞株相比,明显抑制HeLa细胞增殖,并诱导细胞凋亡(P＜0.01).细胞周期G0-G1期指数增高10.35%,S期指数下降15.77%,凋亡细胞指数上升6.38%.结论:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,抑制宫颈癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡.
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Cyclin D1与P27在口腔鳞癌的表达及意义
目的:探讨Cyclin D1与P27在口腔鳞癌的表达及意义.方法:收集64例经病理证实均为口腔鳞状细胞癌,并且临床病理资料完整的病例.用免疫组化方法检测其与正常黏膜的Cyclin D1与P27的表达差异.结果:Cyclin D1在鳞状细胞癌中的表达明显高于正常黏膜组织,差异有显著性(P＜0.01).P27在鳞状细胞癌中的表达明显低于正常黏膜组织,差异有显著性(P＜0.01).结论:Cyclin D1过表达可能是口腔鳞状细胞癌发生的早期因素,Cyclin D1通过促进细胞增殖、抑制P27等途径促进肿瘤生成.
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皮肤鳞状细胞癌中p16、Cyclin D1、pRb蛋白表达与临床病理特征的关系
目的:分析皮肤鳞状细胞癌中p16、Cyclin D1、pRb蛋白表达与临床病理特征的关系为临床诊断提供依据.方法:采集45例皮肤鳞状细胞癌标本及10例正常皮肤标本,采用免疫组化法测定其中的p16、Cyclin D1、pRb蛋白表达情况.结果:皮肤鳞状细胞癌的p16蛋白阳性表达率明显低于正常皮肤,Cyclin D1、pRb蛋白明显高于正常皮肤,差异有统计学意义(P<0.05).Broders分级为 Ⅲ~Ⅳ 级 、有淋巴结转移者p16蛋白阳性表达率明显低于 Ⅰ~Ⅱ 级者(P<0.05),Cyclin D1、pRb蛋白阳性表达明显高于 Ⅰ~Ⅱ 级 、无淋巴结转移者(P<0.05).直线相关分析显示,p16蛋白阳性表达与Cyclin D1、pRb蛋白呈负相关;cyclin D1蛋白阳性表达与pRb蛋白呈正相关.结论:皮肤鳞状细胞癌的发生和进展可能是p16蛋白 、Cyclin D1、pRb蛋白异常表达的结果.故认为可通过对三种指标进行检测来评估皮肤鳞状细胞癌的恶性程度及预后.
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β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响
目的 观察β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloid peptide (25-35),Aβ25-35]对体外血清饥饿培养PC12细胞的Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响.方法 用终浓度为25 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,流式细胞仪检测分析细胞周期的改变,通过RT-PCR检测Cyclin D1、CDK4、E2F1基因mRNA表达变化,Western印迹检测Cyclin D1、CDK4、pRb蛋白表达的变化.结果 流式细胞仪分析表明血清饥饿培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25 μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P＜0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);Aβ25-35浓度诱导血清饥饿培养的PC12细胞0～20 h,Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白表达增高.结论 Aβ25-35诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与增加Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白的表达有关.
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细胞外信号调节激酶-1、细胞周期蛋白D1表达与儿童急性白血病关系研究
目的探讨细胞外信号调节激酶 -1( ERK1)、细胞周期蛋白 D1( cyclin D1)的表达与儿童急性白血病( AL)的关系.方法 50例儿童 AL( AL组)和 26例 AL完全缓解( AL-CR组)患儿为病例组, 23例非肿瘤性疾病患儿为对照组,采用超敏 SP免疫组织化学法,检测各组骨髓细胞中 ERK1、 cyclin D1的表达情况.结果 AL组 ERK1、 cyclin D1阳性率分别为 68.00%和 56.00%,明显高于 AL-CR组( 3.85%, 3.85%)和对照组( 0, 0)( P<0.01);高危 AL患儿中阳性率分别为 90.91%、 86.36%,明显高于标危 AL患儿( P<0.01); 16例 AL患儿化疗前 ERK1、 cyclin D1阳性率分别为 75.00%、 68.75%,化疗缓解后阳性率均为 0( P<0.01); AL组中 ERK1、 cyclin D1表达相同(χ 2=2.5, P>0.05).结论 AL患儿 ERK1、 cyclin D1表达率较高,可作为近期疗效的观察指标; ERK1与 cyclin D1过度表达相同,可能在 AL发生发展过程中有协同作用.
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胶质瘤中端粒酶逆转录酶、c-myc、cyclin D1表达与预后的相关性
目的 探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)、c-myc、cyclin D1基因在胶质瘤中的表达与预后的关系.方法 收集56例手术切除的胶质瘤标本,应用原位杂交技术和免疫组化S-P法分别检测胶质瘤组织中hTERT和c-myc、cyclinD1基因的表达;6例正常脑组织作为对照.并对检测结果 与随访结果 进行综合分析.结果 56例胶质瘤中,30例表达hTERT,阳性率为53.6%;33例表达c-myc基因,阳性率为58.9%;32例表达cyclin D1基因,阳性率为57.1%.正常脑组织不表达hTERT、c-mye、cyclin D1.随着胶质瘤分级的升高,hTERT和c-myc、cyclin D1基因表达增强(P＜0.05).hTERT与c-myc、cyclin D1基因的表达两两成正相关关系(P＜0.05),三者的表达均与患者生存时间成负相关关系(P＜0.01).结论 hTERT、c-myc、cyclin D1基因的过表达与胶质瘤细胞的恶性变和过度增殖有关,三者联合检测可作为临床判断胶质瘤患者预后的重要指标.
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β-catenin通路相关基因在大肠癌组织中的表达及其临床意义
[目的]研究大肠癌组织中β-catenin、cyclinD1和c-myc蛋白的表达及临床意义.[方法]采用免疫组化法检测正常大肠黏膜和大肠癌组织中β-catenin、cyclinD1和c-myc蛋白的表达.[结果]正常大肠黏膜β-catenin蛋白表达定位于细胞膜,大肠癌组织β-catenin细胞浆和细胞核表达(异位表达)明显增加,细胞膜表达有不同程度的减少.大肠癌组织异位表达率为63.1%,细胞膜表达缺失率为70.8%,大肠癌组织β-catenin的异位表达率与肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移有关.大肠癌组织中cyclinD1和c-myc表达明显高于正常大肠黏膜.大肠癌组织中β-catenin异位表达率与cyclinD1和c-myc阳性表达率均呈明显正相关.[结论]异常的β-catenin相关信号通路与大肠癌的发生发展有密切的关系,β-catenin的异常表达可能可以作为大肠癌患者诊断及预后评估的良好指标.
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Ras、MAPK、Cyclin D1与皮肤瘢痕癌的相关性研究
目的 探讨Ras/Raf/MAPK信号通路和通路下游靶基因Cyclin D1与皮肤瘢痕癌的相关性.方法 (1)用激光扫描共聚焦显微技术对病理性瘢痕和瘢痕癌进行K-ras、H-ras、N-ras免疫荧光双标记;(2)提取DNA,检测病理性瘢痕和瘢痕癌组织中K-ras、H-ras、N-ras第12、13位密码子的突变;(3)采用免疫组化SP法检测正常皮肤、病理性瘢痕和瘢痕癌组织中MAPK、Cyclin D1蛋白的表达;(4)采用原位杂交技术检测3组组织中MAPK mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达.结果 (1)免疫荧光双标记K-ras、H-ras、N-ras在病理性瘢痕上皮中呈较弱荧光为弱阳性,在瘢痕癌组织中呈较强荧光为强阳性;(2)在病理性瘢痕和瘢痕癌中未发现K-ras、H-ras、N-ras第12、13位密码子突变;(3)MAPK和Cyclin D1的蛋白及mRNA在正常皮肤表皮均呈阴性或弱阳性,在皮肤病理性瘢痕上皮中呈弱阳性,在瘢痕癌组织中呈强阳性.瘢痕癌组表达水平(阳性面积)、表达强度(平均光密度)与正常皮肤、病理性瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),正常皮肤组与病理性瘢痕组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 (1)Ras、MAPK、Cyclin D1基因的高表达与瘢痕癌的发生密切相关,各种基因共同发挥了协同作用;(2)K-ras、H-ras、N-ras第12、13位密码子突变与瘢痕癌的发生无相关性.
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p57kip2、cyclin D1在食管癌中的表达及意义
目的 研究p57kip2在食管癌中的表达及意义,探讨其与cyclin D1在食管癌中表达的相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测50例食管癌组织及15例正常食管上皮组织中p57kip2、cyclin D1的表达情况;应用流式细胞术对这些组织的DNA含量和细胞周期分布进行分析.结果 免疫组化:p57kip2蛋白在食管癌组织中阳性表达率(34.0%)低于正常组织(80%)(P＜0.01),与食管癌组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移情况有关(P＜0.05);cyclin D1蛋白在食管癌组织中的阳性表达率(64.0%)高于正常组织(13.33%)(P＜0.01),与浸润深度和淋巴结转移情况有关(P＜0.05) ,与食管癌组织分化程度无关(P＞0.05).p57kip2和cyclin D1之间表达负相关(r=-0.429,P＜0.01).流式细胞术:与正常组织相比,癌组织中DNA含量增高,异倍体细胞增加;G0/G1期细胞减少,而S期和G2/M期细胞增多,增殖指数(PI)高于正常组织.结论 p57kip2蛋白低表达可能与食管癌的发生发展有关;p57kip2与cyclin D1联合检测可作为评估食管癌恶性程度指标.
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甲状腺微小乳头状癌发生及淋巴结转移的相关因素分析
目的 探讨CD56、Cyclin D1、C-met在甲状腺微小乳头状癌(papillary thyroid microcarcinoma,PTMC)和癌旁甲状腺组织中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法 应用免疫组化SP法检测59例PTMC中CD56、Cyclin D1和C-met蛋白表达,分析三者在PTMC中的表达与淋巴结转移的关系.结果癌旁甲状腺组织中CD56的表达显著高于PTMC组织(P<0.05);PTMC组织中Cyclin D1和C-met蛋白表达显著高于癌旁甲状腺组织(P<0.005),PTMC的淋巴结未转移组中Cyclin D1蛋白半定量评分高于转移组(P<0.05);等级相关分析显示Cyclin D1与C-met蛋白在PTMC中表达有相关性(rs=0.59,P<0.01).结论 CD56、Cyclin D1、C-met蛋白均可影响PTMC的发生,Cyclin D1可作为其淋巴结转移的预测因子,与C-met联合检测对提示是否淋巴结转移具有重要意义.
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非小细胞肺癌中Cyclin D1表达及其临床意义
目的 探讨cyclin D1在非小细胞肺癌组织中表达阳性率、与临床病理生理特征的关系及其在预后中的意义.方法 标本系胸外科手术切除的石蜡包埋组织,其中NSCLC 56例、肺炎性假瘤12例,以癌旁正常肺组织作内对照.各组年龄,性别没有差别,采用免疫组化定性检测肺组织中cyclin D1的表达.结果 (1)NSCLC组免疫组化阳性表达率为62.5%,显著高于癌旁组(30.4%,P=0.001)及肺炎性假瘤组(33.3%,P=0.018)及;(2)与临床病理特征的关系研究中发现,该蛋白高表达在吸烟组、低分化组要高于非吸烟、中高分化组;(3)在随访中发现两组生存时间有差别,免疫组化表达阳性组的生存时间比阴性组的生存时间要短(P=0.048).结论cyclin D1对NSCLC的诊断、病情的预后均具有一定的临床价值,说明cyclin D1有可能成为肺癌诊断与预后有用的生物标志物.
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蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨
目的 研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制.方法 采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR 法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1 mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达.结果 与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg·L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达.结论 蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导.
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黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖作用影响的研究
目的 探讨黄芪甲苷(astragaloside,AS)对神经干细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠胎鼠神经干细胞,Nestin免疫化学染色鉴定 NSCs,BrdU标记鉴定NSCs增殖.BrdU标记免疫细胞化学染色检测神经干细胞增殖能力.实时定量 PCR技术探讨黄芪甲苷促进NSCs增殖的作用机制.结果 Nestin鉴定为阳性,Brdu标记亦呈阳性;BrdU标记结果表明,黄芪甲苷高、中、低剂量组NSCs的增殖率明显提高(P<0.05,P<0.01).实时定量PCR结果表明在诱导NSCs增殖过程中,黄芪甲苷高剂量组Hes5基因表达增加(P<0.05).结论 黄芪甲苷对NSCs增殖具有明显的诱导作用,其可能通过上调与细胞增殖相关基因Hes1、Hes5、cyclin D1表达而起作用,但也可能调节与其它增殖通路有关.
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Cyclin D1和Ki67与涎腺腺样囊性癌发生及预后的相关性研究
目的:检测Cyclin D1和Ki67在涎腺腺样囊性癌(Adenoid Cystic Carcinoma,ACC)中的表达状况,探讨其与ACC发生及预后的相关性.方法:采用免疫组织化学染色方法,分别检测Cyclin D1和Ki67在10例正常涎腺组织(normal salivary gland,NSG)及40例ACC组织中的表达.实验数据采用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果:Cyclin D1和Ki67在NSG中基本无表达,而在ACC中阳性表达率明显增高,且实体型组高于腺管型组和筛孔型组,复发组和转移组比无复发组和无转移组阳性表达率显著增高,但与患者性别、年龄及发生部位无相关性.结论:Cyclin D1在ACC中高表达,提示其表达异常是ACC发生的重要机制之一;Cyclin D1和Ki67的表达与ACC的生长亚型显著相关,提示实体型ACC预后更差;两种蛋白的过度表达与ACC的复发转移显著相关,故联合检测Cyclin D1和Ki67将有助于预测肿瘤患者的预后.
