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免疫荧光动态监测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合蛋白变化
背景:实时定量RT-PCR 只能间接地反映融合基因表达量的变化,并不能在细胞原位直观反映急性早幼粒细胞白血病患者细胞内PML-RARα融合蛋白在全反式维甲酸治疗前后的相对表达量.目的:探讨免疫荧光技术检测融合蛋白PML-RARα表达的动态变化在判断急性早幼粒细胞白血病的全反式维甲酸早期治疗的效果.方法:应用免疫荧光技术检测全反式维甲酸干预的急性早幼粒细胞白血病经典细胞株NB4 细胞或来源于急性早幼粒细胞白血病患者的NB4 细胞PML-RARα蛋白的表达,以实时定量RT-PCR 检测细胞PML-RARα mRNA 的表达作为对照,以评价免疫荧光技术的可靠性.结果与结论:免疫荧光染色显示,无论是体外培养的NB4 细胞,还是患者骨髓内的NB4 细胞,在全反式维甲酸干预前细胞内均可见大量红色的融合蛋白PML-RARα,大小不均一、形状不规则,全反式维甲酸干预后,NB4 细胞内红色的融合蛋白PML- RARα形状逐渐规则,弥散状态变为散在分布,且随着全反式维甲酸干预时间的延长,原有的弥散状态逐渐消失.实时定量RT-PCR 测得的PML-RARα mRNA 的变化趋势与免疫荧光相一致.说明免疫荧光技术检测PML-RARα能够更为直观地判断全反式维甲酸的治疗效果.
关键词： 免疫荧光 实时定量RT-PCR PML- RARα 急性早幼粒细胞白血病 NB4 细胞 U937 -
ATO,ATRA/G-CSF联合使用加速RARα降解诱导NB4细胞末端分化
目的:探讨三氧化二砷(ATO)、全反式维甲酸(ATRA)及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(A/G)联合使用,诱导NB4细胞末端分化的分子机理.方法:台盼蓝染色记录细胞生长,吉姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪分析确定细胞分化分子标志及凋亡,Western blot观察RARα蛋白的表达.结果:NB4细胞经过ATO+A/G处理,出现形态学末端分化特征和免疫表型的成熟.Western blot结果显示,RARα基因是ATO特定的靶向目标.结论:ATO联合ATRA/G-CSF能够诱导NB4细胞末端分化,其机理与调节RARα的表达有关.
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新型慢性手部湿疹治疗药——Alitretinoin
Alitretinoin是一种能激活所有已知的细胞内维甲酸类受体亚型(RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ和RXRγ)的内源性维甲酸.2009年11月加拿大批准Toctino(alitretinoin,阿利维A酸)软胶囊上市,每日一次,每次30mg,用于局部外用强效糖皮质激素无效的慢性手部湿疹患者.
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多耐药相关蛋白MRP2与核受体RXRα、RARα在人阻塞性胆汁淤积肝组织中的表达变化
目的 观察多耐药相关蛋白MRP2 (multidrug resistance associated protein 2) 与核受体RXRα、RARα在人阻塞性胆汁淤积肝组织的表达变化.方法 收集人正常及阻塞性胆汁淤积肝组织标本各20例,HE染色验证阻塞性黄疸病变,免疫组化方法检测人多耐药相关蛋白MRP2及核受体RXRα、RARα的表达变化.结果 人阻塞性胆汁淤积肝组织中核受体RXRα、RARα表达减弱,多耐药相关蛋白MRP2表达也减弱.结论 与体外培养肝细胞与模型动物一样,人阻塞性胆汁淤积肝组织中MRP2表达减弱也可能由核受体RXRα、RARα表达减弱导致.
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海马细胞胞浆RARα表达对大鼠学习记忆功能的影响
目的 探讨海马细胞胞浆视黄酸受体(retinoic acid receptor,RAR)α蛋白表达对大鼠空间学习记忆功能的影响.方法 SD大鼠采用完全随机化分组方法分为Morrs水迷宫(Morris watermaze,MWM)训练组(n=6)和未训练组(n=6),检测海马组织RARα和GluR1表达水平.分别将AAV-control shRNA和AAV-RARα shRNAs海马定位注射SD大鼠后,检测其学习记忆功能及海马组织RARα和GluR1表达水平变化.体外利用神经生长因子(neuron growth factor,NGF)诱导PC12细胞成熟分化,检测RARα和GluR1表达水平、胞内钙活性及静息膜电位.结果 水迷宫训练组大鼠海马组织RARα和GluR1总蛋白和胞浆蛋白表达水平均较未训练组显著增加(P＜0.01).海马定位注射2周后,Morris水迷宫检测发现AAV-RARαshRNAs组大鼠学习记忆功能较对照组明显减弱(P＜0.05),同时海马RARα和GluR1总蛋白和胞浆蛋白表达水平也明显下降(P＜0.01).经NGF诱导后的PC12细胞静息膜电位更接近于神经元静息膜电位(P＜0.01),RARα和GluR1总蛋白和胞浆蛋白表达水平较对照组明显增高(P＜0.01),胞内钙活性明显增强(P＜0.05).结论 海马细胞胞浆RARα蛋白表达与学习记忆能力呈正相关,在调节突触可塑性中发挥重要作用.
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视黄酸可控的Fas/RARα融合基因表达载体构建
目的构建带有视黄酸反应元件(Retinoic acid response element , RARE)的Fas/RARα融合基因表达载体,为研究肿瘤细胞凋亡的可调控性奠定理论与实验基础.方法采用常规DNA分子克隆方法,借助相关计算机软件,设计融合基因各片段引物,经PCR扩增后重组真核表达载体pRARE-tk-eGFP-Fas/RARα.结果成功构建融合基因真核表达载体,与预期设计路线相符;检测DNA序列与原始片段相一致.结论本实验成功构建了pRARE-tk-eGFP-Fas/RARα融合基因表达载体,为进一步在哺乳动物细胞中表达新型融合蛋白、探讨其未来在临床上的应用奠定实验基础.
