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莪术醇β-环糊精包合物对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究
目的 探讨莪术醇β-环糊精包合物对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 采用饱和溶液法制备莪术醇与β-环糊精的包合物,红外光谱验证包合物的形成.不同浓度(25、50、100 mg/L)莪术醇β-环糊精包合物处理食管癌TE-1细胞后,噻唑蓝 [3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡情况.实时荧光定量PCR及2-ΔΔCt法定量分析不同处理组Survivin mRNA的相对表达量.Western blot检测Survivin蛋白表达.结果 MTT法检测结果显示,与对照组比较,莪术醇β-环糊精包合物各剂量组生长抑制率均明显升高,且随着剂量升高而增加,差异有统计学意义(P <0.05).流式细胞术检测结果显示,莪术醇β-环糊精包合物处理可使细胞阻滞在G0/G1期与G2/M期,并且促进细胞凋亡.此外,与对照组比较,处理组细胞中Survivin mRNA与蛋白表达水平明显降低(P <0.05).结论 莪术醇β-环糊精包合物能够抑制食管癌细胞TE-1的增殖,促进凋亡,对Survivin的抑制与其抑制食管癌细胞的恶性表型的作用相关.
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温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用
目的 研究温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用.方法 采用超临界CO2萃取法提取温郁金成分.将TE-1细胞贴壁后分成4组:1组加入100 μL含0.1％ DMSO的RMPI-1640培养基,作为对照组；另外3组分别加入浓度为25、50、100 mg/L温郁金提取物完全培养液各100 μL,分别作为温郁金低、中、高剂量组.培养48h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组TE-1细胞生长抑制率.应用基因芯片技术检测各组TE-1细胞基因表达谱的变化.对差异表达基因进行基因本体(gene ontology,GO)功能分类.结果 与对照组比较,温郁金各剂量组生长抑制率均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).温郁金各剂量组TE-1细胞生长抑制率随着剂量升高而增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).通过基因芯片筛选出温郁金提取物作用前后88个基因表达水平发生改变且有统计学意义,包括22个基因表达下调,66个基因表达上调.基因GO分类提示差异表达基因主要涉及信号传导(6个)、细胞周期(8个)、凋亡(14个)或分化调节(10个)等.结论 温郁金提取物对人食管癌TE-1细胞生长有抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控多层次的基因表达改变有关.
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干细胞Nanog蛋白在食管癌组织中的表达及意义
目的 探讨食管癌组织中干细胞Nanog蛋白表达,分析其与食管癌临床病理特征的关系.方法 收集87例食管癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本,采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中的Nanog蛋白表达,同时用免疫荧光技术检测食管癌细胞系TE-1、Eca-109中的Nanog蛋白表达.结果 Nanog蛋白在食管癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05),Nanog蛋白在食管癌组织中的表达与其病理分期、分化程度和淋巴结转移有关(P均＜0.05).食管癌细胞系TE-1、Eca-109中的Nanog阳性蛋白呈高表达,且表达存在异质性;多数细胞以细胞质表达为主,少数以细胞核表达为主,细胞核表达阳性率为10％.结论 Nanog蛋白在食管癌组织中的表达与食管癌的发生、发展及转移密切相关.
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TW37对食管癌TE-1细胞迁移的影响
目的:观察TW37对食管癌TE-1细胞迁移的影响.方法:用0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00、32.00和64.00μmol/L的TW37处理TE-1细胞24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖.倒置显微镜下观察2、4μmol/L的TW37作用24 h对TE-1细胞形态的影响.划痕实验检测2、4μmol/L的TW37作用24、48 h对TE-1细胞迁移的影响.Western blot实验测定2、4μmol/L TW37作用24 h对TE-1细胞E-Cadherin、Vimentin以及N-Cad-herin蛋白表达的影响.均设空白对照.结果:TW37抑制TE-1细胞增殖,呈时间和浓度依赖性.TW37作用后TE-1细胞由原来的梭形变成了卵圆形.TW37能够在较低浓度(2μmol/L)抑制TE-1细胞迁移,4μmol/L的TW37抑制迁移的作用更强(P<0.05).TW37能降低TE-1细胞中Vimentin、N-Cadherin的表达,上调E-Cadherin的表达(P<0.05).结论:TW37可能通过抑制EMT进程进而抑制TE-1细胞的迁移.
关键词： 食管癌 TW37 迁移 E-cadherin Vimentin N-cadherin TE-1细胞 -
2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究
目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.
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MicroRNA-21对食管鳞状上皮癌细胞TE-1生物学特性的影响
目的:食管鳞状上皮癌TE-1细胞中microRNA-21(miR-21)高表达,本研究探讨miR-21对TE-1细胞生物学特性的影响.方法:转染miRZip-21慢病毒,持久抑制TE-1细胞中高表达的miR-21,将由此获得的稳定细胞系命名为anti-miR-21细胞系,实时定量PCR方法验证,以TE-1细胞作为对照.细胞增殖实验检测anti-miR-21细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,Transwell迁移实验及划痕实验观察细胞迁移能力,克隆形成实验及细胞毒性实验分别观察放射线及药物敏感性变化.结果:Anti-miR-21细胞的相对增殖率较对照组TE-1细胞低,差异具有统计学意义(P＜0.05).Transwell侵袭实验及迁移实验显示穿过小室的anti-miR-21细胞较TE-1细胞分别减少51.97％及64.31％,差异具有统计学意义(P＜0.05).划痕实验显示anti-miR-21细胞较TE-1细胞的迁移率降低,差异具有统计学意义(P＜0.01).克隆形成实验分析显示anti-miR-21细胞的D0值(2.73Gy vs 3.60Gy)和Dq值(1.25Gy vs 2.75Gy)均低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞毒性实验显示anti-miR-21细胞在顺铂及氟尿嘧啶各个梯度浓度下细胞存活率均降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:MiR-21影响食管鳞状上皮癌TE-1细胞的生物学特性.抑制miR-21表达后,降低了TE-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力,同时增加了其对放射及化学药物的敏感性.MiR-21可能成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.
关键词： 食管鳞癌 TE-1细胞 MicroRNA-21 生物学特性
