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单侧输尿管梗阻的大鼠内质网应激相关蛋白表达上调
目的 探究内质网应激(ERS)相关凋亡通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中的作用机制.方法 将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14 d HE和Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Western blot 检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达.结果 与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3 d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P<0.01).结论 内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展.
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α干扰素增强骨肉瘤U2OS细胞对足叶乙甙的敏感性
目的 探讨α干扰素对人骨肉瘤U2OS细胞足叶乙甙敏感性的作用及其机制,为提高骨肉瘤化疗的敏感性探索新的治疗方法.方法 应用MTT法测定IFNα和VP16单用以及联用对U2OS细胞的细胞毒作用;Hoechst 33258荧光染色检测药物对U2OS细胞凋亡的影响;Western blot法检测Caspase-3、8、9的表达和活化.结果 IFNα在50 U/ml、500 U/ml、5000 U/ml等剂量处理48 h、72 h、96 h对U2OS细胞无毒性作用,却明显增强了VP16(2.5 μg/ml)诱导的细胞毒作用;与单药组相比,IFNα(5000 U/ml)与VP16(2.5 μg/ml)联用72 h后U2OS细胞出现更为明显的凋亡特征性形态变化;并且联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、8、9均发生明显断裂活化.结论 IFNα能够增强VP16诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,且与Caspase级联活化有关,二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径.
关键词： α干扰素 足叶乙甙 骨肉瘤 凋亡 半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶 -
SLE患者外周血淋巴细胞凋亡及Caspase表达研究
目的 研究SLE患者外周血淋巴细胞凋亡及细胞凋亡caspase途径在SLE病人中作用机制.方法 选取SLE患者25例,其中活动期11例,缓解期14例,另设对照组18例;采用体外细胞培养法检测外周血淋巴细胞(PBLC)细胞凋亡率、Western blot法检测PBLC Caspase蛋白表达.结果 SLE患者外周血淋巴细胞凋亡异常,培养前低于对照组,培养24、48h后则明显高于对照组,其差异均有统计学意义;其Caspase-2、3蛋白表达水平由低到高依次是:活动组＜缓解组＜正常组.结论 SLE患者的外周血淋巴细胞Caspase2、3蛋白水平低于正常对照组是自身外周血淋巴细胞凋亡障碍导致的结果.
关键词： 系统性红斑狼疮 细胞凋亡 外周血淋巴细胞 半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶 -
二氯乙酸钠联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的实验研究
目的 研究二氯乙酸钠(Sodium dichloroacetate,DCA-Na)、顺铂(DDP)联合对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 用MTT法检测DCA-Na、DDP应用对A549细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测DCA-Na、DDP单药及两药联合作用于A549细胞凋亡率的变化;用分光光度法检测DCA-Na作用于A549细胞后半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9蛋白的活性.结果 DCA-Na、DDP单药组均对A549细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量-时间依赖性.0.4、2 μg/mL的DDP与37.5、75、150 μg/mL的DCA-Na联合作用A549细胞24、48、72 h后的抑制率显著高于同浓度DDP单药组(P<0.05),且2 μg/mL的DDP与75 μg/mL的DCA联合在48 h表现为协同作用.流式细胞仪检测显示,A549细胞联合组凋亡率显著高于各单药组(P<0.05).DCA-Na作用于A549细胞后,分别在12、24、48、72 h测得Caspase-3、-8、-9蛋白活性显著高于对照组(P<0.05).结论 DCA-Na对人肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用,并且随着药物浓度增加、作用时间延长,其抑制作用也增加(呈剂量和时间依赖性).一定浓度范围的DCA-Na和DDP联合作用于人肺腺癌A549细胞能够产生协同作用.DCA-Na可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,且与DDP联合后其诱导凋亡作用更为显著.
关键词： 二氯乙酸钠 顺铂 A549细胞 凋亡 半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶 -
穴位埋线联合盐酸甲氯芬酯对血管性痴呆大鼠海马CA1区几种重要蛋白质表达的影响
目的 探讨穴位埋线与盐酸甲氯芬酯联合治疗血管性痴呆(VD)大鼠的神经生化机制.方法 改良四血管阻断法建立VD大鼠模型;造模后分3个治疗组,分别为盐酸甲氯芬酯治疗组、“肾俞”、“足三里”穴位埋线治疗组(埋线组)及盐酸甲氯芬酯联合穴位埋线组(联合组);免疫组织化学SABC法检测并比较各组大鼠海马CA1区内三种重要蛋白质的表达情况:胆碱乙酰转移酶(ChAT)、脑源性神经营养因子(BDNF)及半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3).结果 经联合治疗后,大鼠海马CA1区ChAT、BDNF免疫反应阳性神经元数目明显增多,Caspase-3阳性神经元数目明显减少,各项指标与单独治疗组相比,差异明显(P＜0.05,P＜0.01).结论 盐酸甲氯芬酯联合穴位埋线治疗法,对VD大鼠海马胆碱能神经元具有良好的保护作用,这可能与其上调海马BDNF及下调Caspase-3密切相关.
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吡非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化的影响
目地 探讨吡非尼酮(PFD)对单侧输尿管梗阻(UUO) 模型大鼠肾小管间质纤维化(TIF)的影响及其可能机制,为临床使用PFD防治肾脏纤维化提供理论依据.方法 SD大鼠35只,分为3组、假手术组7只,模型组14只,治疗组14只.治疗组给予PFD 250 mg·kg-1 ·d-1,疗程14 d.假手术组于手术后14 d处死,后两组于手术后7及14 d分两批处死.行过碘酸希夫染色(PAS)及Masson染色观察病理变化;原位末端标记法(TUNEL)观察肾小管上皮细胞(RTC)凋亡的情况;免疫组化法检测肾小管半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3的蛋白表达;比色法测定肾组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 假手术组肾组织无明显病理改变;模型组TIF明显加重,RTC凋亡及Caspase-3表达增加(P＜0.05),且14 d时较7 d时更明显,但治疗组以上指标明显改善(P＜0.05);与假手术组比较,模型组MDA含量明显增加(7 d较14 d时更明显),SOD活性明显下降(14 d较7 d时更明显);但与模型组比较,治疗组MDA 7 d时显著改善,14 d时差别不明显,SOD 7及14 d均明显改善,以14 d为甚.结论 PFD能明显减少UUO大鼠RTC的凋亡,从而改善TIF,上述作用可能与该药物抑制氧化应激和Caspase-3相关的凋亡途径有关.
关键词： 吡非尼酮 肾小管间质纤维化 凋亡 半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶 氧化应激
