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多取代N-苯基-二氯乙酰胺类抗癌药物:设计、合成、生物活性评价
根据早期研究发现的单取代N-苯基-二氯乙酰胺类化合物比先导化合物二氯乙酸钠(DCA)具有更高抗癌活性的研究结果,本文合成了系列多取代N-苯基-二氯乙酰胺类化合物并对其进行生物活性评价,结果显示3,5-二取代-N-苯基-二氯乙酰胺类化合物表现出更高的活性,其中N-(3,5-二碘-苯基)-二氯乙酰胺抑制非小细胞肺癌细胞株(A549)的IC50为2.84 μmol·L-1,且能够诱导癌细胞凋亡.
关键词： 二氯乙酸钠 细胞毒活性 凋亡 N-苯基-二氯乙酰胺 -
二氯乙酸钠联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的实验研究
目的 研究二氯乙酸钠(Sodium dichloroacetate,DCA-Na)、顺铂(DDP)联合对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 用MTT法检测DCA-Na、DDP应用对A549细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测DCA-Na、DDP单药及两药联合作用于A549细胞凋亡率的变化;用分光光度法检测DCA-Na作用于A549细胞后半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9蛋白的活性.结果 DCA-Na、DDP单药组均对A549细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量-时间依赖性.0.4、2 μg/mL的DDP与37.5、75、150 μg/mL的DCA-Na联合作用A549细胞24、48、72 h后的抑制率显著高于同浓度DDP单药组(P<0.05),且2 μg/mL的DDP与75 μg/mL的DCA联合在48 h表现为协同作用.流式细胞仪检测显示,A549细胞联合组凋亡率显著高于各单药组(P<0.05).DCA-Na作用于A549细胞后,分别在12、24、48、72 h测得Caspase-3、-8、-9蛋白活性显著高于对照组(P<0.05).结论 DCA-Na对人肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用,并且随着药物浓度增加、作用时间延长,其抑制作用也增加(呈剂量和时间依赖性).一定浓度范围的DCA-Na和DDP联合作用于人肺腺癌A549细胞能够产生协同作用.DCA-Na可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,且与DDP联合后其诱导凋亡作用更为显著.
关键词： 二氯乙酸钠 顺铂 A549细胞 凋亡 半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶 -
家兔血清中二氯乙酸钠浓度的测定
目的:建立用反相离子对色谱法测定家兔血清中游离二氯乙酸钠(DCA-Na)浓度的方法.方法:用高效液相色谱法测定了家兔血清中DCA-Na的含量.DCA-Na在碱性条件下与水合肼定量生成稳定的腙,以IPR-B8为色谱试剂,在Zorbas ODS(4.8 mm×250 mm)柱上,以水-甲醇-IRP-B8为流动相进行人离.结果:分离灵敏度为0.05AUFS,在268 nm处,衍生物线性范围0.65～50.0μg/ml,r=0.9995,回收率(98.5±3.3)%.结论:此方法为研究DCA-Na在人体内的药代动力学及药效学提供了参考.
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乳酸堆积和二氯乙酸钠对肝癌细胞凋亡及bax、bcl-2表达和caspase-3活性的影响
目的:探讨乳酸堆积和二氯乙酸钠(DCA)对肝癌细胞(HepG2)凋亡和bax、bcl-2表达及caspase-3活性的影响.方法:通过体外培养HepG2,建立稳定的体外培养模型,配制成终浓度分别为0mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、4.0 mmol/L、8.0 mmol/L的乳酸培养液以及在不同浓度乳酸组中加入终浓度为10-3 mmol/L DCA培养液与HepG2共同培养,其中以0mmol/L乳酸组为对照组.采用MTT法检测乳酸对HepG2的抑制率,流式细胞仪检测乳酸和DCA对HepG2的凋亡百分率,用Real-time PCR法测定bax及bcl-2 mRNA的表达,用免疫荧光法检测caspase-3的活性.结果:乳酸对HepG2的IC50值为13.6 mol/L,与对照组比较,随着乳酸浓度的增加,HepG2凋亡率增加,bax mRNA表达升高,bcl-2 mRNA的表达降低,caspase-3活性增加,其中1.0 mmol/L乳酸组与对照组比较(P＞0.05),2.0 mmol/L,4.0 mmol/L和8.0 mmol/L乳酸组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).加入DCA后,HepG2凋亡减少,2.0mmol/L乳酸+DCA组、4.0 mmol/L乳酸+DCA组、8.0 mmol/L乳酸+DCA组与同浓度的乳酸组比较,bax mRNA表达减少(P＜0.05),bcl-2 mRNA表达增加(P＜0.05),caspase-3活性减低(P＜0.05).结论:乳酸可诱导HepG2凋亡,且随着乳酸浓度的增高,HepG2的凋亡率增加,其机制可能是通过对bcl-2及bax mRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现,DCA可以降低HepG2凋亡,对乳酸堆积造成的HepG2凋亡有抑制作用.
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二氯乙酸钠联合顺铂对胃癌细胞的抑制作用
目的:研究丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂二氯乙酸钠(sodium dichloroacetate,DCA)对胃癌细胞的体外抗肿瘤效应.方法:使用不同浓度的DCA分别干预处理体外培养的胃癌SGC-7901和BGC-823细胞24 h,MTT法检测胃癌细胞存活率,中位效应法观察DCA联合顺铂(cisplatin,DDP)干预的协同效应,Transwell小室实验检测胃癌细胞的侵袭性,流式细胞术双染法检测细胞的早期凋亡率.结果:DCA(20、40、60、80和100 mmol/L)以浓度依赖方式显著抑制胃癌SGC-7901和BGC-823细胞增殖,24 h的IC50值分别为60.9 mmol/L和53.8 mmol/L;较小剂量(20、40 mmol/L) DCA和DDP(5、10μmol/L)联合干预SGC-7901和BGC-823细胞的联合指数值均＜1,提示两者具有协同抑制胃癌细胞增殖的效应.与对照组相比,DCA(60、80、100 mmol/L)组SGC-7901细胞穿膜数目显著降低[(99.3±11.7)、(55.7±6.0)、(38.3±6.7) vs (182.7 ±17.3)个,均P＜0.05];同样浓度组的BGC-823穿膜细胞数目也显著降低[(88.7±8.3)、(49.0±5.7)、(42.3±6.7)vs (170.7 ±15.0)个,均P＜0.05].与对照组相比,DCA(60、80、100 mmol/L)组SGC-7901细胞的早期凋亡率显著增加[(31.7±5.2)％、(35.0±5.4)％、(37.8±6.2)％ vs (8.1±1.3)％,均P＜0.05)];BGC-823细胞的早期凋亡率也显著增加[(24.2±4.6)％、(31.9±4.2)％、(40.4±5.7)％ vs (6.6±1.4)％,均P＜0.05)].结论:DCA明显抑制体外培养胃癌细胞的增殖,并可与化疗药物产生协同效应;DCA可抑制胃癌细胞的侵袭及诱导胃癌细胞凋亡;靶向丙酮酸脱氢酶激酶有望成为未来胃癌治疗新的方法.
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二氯乙酸钠对氧糖剥夺损伤的BV2细胞的保护作用及其机制研究
目的 研究二氯乙酸钠(dichloroacetate,DCA)对氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤模型中小鼠小胶质细胞(BV2细胞)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将BV2细胞分为3组:对照组、OGD组、DCA治疗组,通过OGD 4 h建立损伤模型.CCK-8和流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS和NO的表达,Western blot检测NF-κB通路相关蛋白表达水平.结果 CCK-8及流式细胞检测结果表明,DCA可显著降低OGD诱导的BV2细胞凋亡,并且减少OGD后细胞中活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的表达(P<0.05).Western blot结果显示,DCA可显著影响OGD损伤介导的BV2细胞JNK、I-κB和NF-κB蛋白表达水平(P<0.05).结论 DCA对OGD损伤的BV2细胞具有保护作用,其机制与抗凋亡、抗氧化和抗炎作用有关.
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二氯乙酸钠对人骨肉瘤MG63细胞周期及凋亡影响的初步研究
目的 探讨不同浓度的二氯乙酸钠(DCA)对人骨肉瘤MG63细胞活性、周期及凋亡的影响.方法 用含质量分数10％胎牛血清的RPMI-1640培养基培养MG63细胞,不同浓度DCA作用于对数生长期的细胞,CCK8试剂盒检测50、100、200 μg·mL-1DCA处理24 h、48 h后细胞增殖情况;流式细胞术检测100、200 μg·mL-1 DCA-Na作用24 h、48 h后细胞周期和凋亡情况;qRT-PCR检测100、200 μg·mL-1DCA处理后细胞周期相关基因CDK2的变化.结果 CCK8检测结果显示50、100、200 μg· mL-1DCA均能抑制MG63细胞的生长,且有时间和浓度依赖性;不同浓度的DCA-Na分别干预MG63细胞不同时间后都明显阻滞细胞于G2/M期,且细胞凋亡率增加(P均＜0.001);不同浓度的DCA干预MG63细胞后,细胞中的CDK2mRNA的相对表达量明显降低(P均＜0.001).结论 DCA通过抑制CDK2使MG63细胞阻滞于G2/M期,进而诱导细胞凋亡,抑制细胞的生长.
